新生兒膽紅素濃度與UGT1A1基因G71R突變以及G6PD缺陷的相關性研究

黃晶　郭艷　陳沛偉　楊峰

[摘 要] 目的：探討葡萄糖醛酸轉移酶1A1（ UGT1A1）基因G71R突變合并葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（G6PD）缺陷對新生兒膽紅素濃度的影響。方法：2013年1月至2014年5月間62例足月新生兒62例，根據臍血G6PD水平分組，G6PD缺陷組36例，G6PD正常組26例，檢測UGT1A1基因G71R突變和出生后3d膽紅素水平變化。結果：G6PD缺陷組病例與正常組的UGT1A1基因型分布比較差異無統計學意義，兩組間等位基因G71R突變頻率比較差異無統計學意義（P>0.05）。G6PD缺陷組與正常組病例UGT1A1基因G71R純合子/雜合子型的膽紅素水平在出生后1 d時比較差異無統計學意義（P>0.05），出生后2 d和3 d比較缺陷組顯著高于正常組（P<0.05）。G6PD正常組出生后1 ～3 d 兩種基因型膽紅素水平比較差異無統計學意義（P>0.05）。結論：UGT1A1基因G71R突變與G6PD缺陷在加重新生兒膽紅血癥及黃疸方面具有協同作用，應密切觀察和監護該類患兒，及早發現膽紅素水平異常和早期干預，以減少因膽紅素血癥引發的各類危重疾病的發生。

[關鍵詞] UGT1A1基因；G71R突變；G6PD缺陷；新生兒膽紅素濃度

中圖分類號：R722 文獻標識碼：B 文章編號：2095-5200（2017）01-126-02

DOI：10.11876/mimt201701051

新生兒高膽紅素血癥可通過光療治療，但重癥患兒可引起膽紅素腦病，即使幸存，也可能遺留永久性神經系統后遺癥[1]。近些年來，分子生物學對新生兒高膽紅素血癥的基因研究不斷深入。研究發現葡萄糖醛酸轉移酶1A1（UGT1A1）基因突變可引發葡萄糖醛酸轉移酶（UGT）的功能和結構性改變，影響膽紅素的結合[2]，葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（G6PD）缺陷可致高膽紅素血癥[3]。本文探討UGT1A1基因G71R突變合并G6PD缺陷對新生兒膽紅素濃度的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料

研究樣本為我院2013年1月至2014年5月間62例足月新生兒，男/女為34/28，平均孕周（39.2±1.2）周，母乳喂養56例，人工喂養6例。排除早產、低體重、敗血癥、肝功能異常、ABO溶血、窒息、顱內出血、頭顱血腫、低血糖、紅細胞增多癥、嚴重感染患兒以及孕母妊娠期有高危并發癥患兒。采集新生兒臍血或新生兒娩出后24 h內血液。采用熒光分析法檢測G6PD，≤2.2為G6PD缺陷。根據G6PD水平將患兒分為G6PD缺陷組36例，G6PD正常組26例，兩組患兒性別、出生時體質量等基本資料比較差異無統計學意義。

1.2 方法

UGT1A1基因G71R突變檢測參考文獻[4]，PCR引物為上海生工生物工程技術有限公司提供。

使用日本APEL公司膽紅素測定儀，于每日清晨測定患兒膽紅素水平，連續測定3 d。

1.3 統計學方法

相關數據應用SPSS19.0軟件處理分析，計數資料以%表示，計量資料以均值±標準差表示，分別應用卡方檢驗和t檢驗，P<0.05時認為數據間比較差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 不同組別病例UGT1A1基因型分布和G71R突變頻率

如表1所示，G6PD缺陷組病例與正常組的UGT1A1基因型分布比較差異無統計學意義，兩組間等位基因G71R突變頻率比較差異無統計學意義（P>0.05）。

2.2 不同組別病例膽紅素水平測定結果

如表2所示，G6PD缺陷組病例出生后1 d UGT1A1基因G71R純合子/雜合子型的膽紅素水平與野生型比較差異無統計學意義（P>0.05），出生后2 d和3 d純合子/雜合子型的膽紅素水平顯著高于野生型（P<0.05）；G6PD正常組病例出生后1 d、2 d和3 d UGT1A1基因G71R的純合子/雜合子分型與野生型比較差異無統計學意義（P>0.05）。

3 討論

3.1 膽紅素

膽紅素主要來源于血紅蛋白，可非極性與白蛋白結

合[5]。新生兒膽紅素是判定黃疸的關鍵指標。了解影響新生兒膽紅素水平的機制對于改善高膽紅素血癥患兒預后具有重要意義[6]。

3.2 UGT1A1基因G71R突變

UGT參與膽紅素排出體外的生理過程，而UGT1A1則與膽紅素的葡萄糖醛酸化密切相關[7]。UGT家族一般被分為兩個亞族，分別是UGT1A和UGT2B[8]。UGT1A主要對膽紅素、苯酚類葡萄糖等具有醛酸化作用，其編碼基因主要位于2號染色體上，由1599個核苷酸組成。UGT1A1基因為UGT1A蛋白的一種，以肝臟為主要分布臟器，為唯一作用于膽紅素的同工酶[9]。一旦UGT1A1基因編碼區發生突變，則對UGT酶的結構和功能產生影響，降低UGT酶的催化結合作用，影響膽紅素葡萄糖醛酸化，阻礙膽紅素排出體外，進而引發高膽紅素血癥[10-11]。

G71R突變最早在日本人群中發現[12]，主要表現為UGT1A1的第一外顯子發生G-A突變，其71位密碼子發生GGA-AGA突變，使甘氨酸突變為精氨酸[13]。傅雯萍等[14]

將母乳性黃疸患兒作為研究對象，證實了UGT1A1基因G71R突變對母乳性黃疸的發生具有促進作用，可通過抑制葡萄糖醛酸轉移酶活性提高患兒機體內膽紅素水平。因而對于篩查發現存在UGT1T基因G71R突變患兒，應格外注意其黃疸的發生和膽紅素的濃度變化情況，及時發現異常并早期施治，盡早控制病情進展[15]。

3.3 G6PD缺陷

G6PD為人體血紅細胞內存在的一種蛋白質，由515個氨基酸構成，13個外顯子與12個內含子編碼，具有協同葡萄糖實現人體新陳代謝的作用[16]。G6PD的編碼氨基酸序列發生結構性異常時，引起G6PD缺乏癥，造成膽紅素水平升高，但目前對于G6PD引起高膽紅素的機制尚不明確。有研究認為，存在G6PD缺乏的病例中存在還原型輔酶II缺乏，血紅細胞有結構和功能性改變，易發生紅細胞破裂溶血，進而造成膽紅素水平升高[17]。也有報道認為G6PD缺乏時血紅細胞膜及血紅蛋白可能發生氧化性損傷，從而引起溶血，加重黃疸癥狀。

3.4 G6PD缺陷聯合UGT1A1基因G74R突變

基于G6PD缺陷和UGT1A1基因G74R突變均對新生兒膽紅素升高存在影響作用，本研究將兩種分子學指標進行聯合檢驗，結果發現在G6PD缺陷病例中，患兒出生后第2 d和第3 d，UGT1A1基因G71R純合子/雜合子的膽紅素水平顯著高于野生型，說明G6PD缺陷與UGT1A1基因G71R突變聯合出現時，對新生兒膽紅素濃度有顯著影響，可提高膽紅素水平，誘發或加重黃疸及膽紅素血癥。

綜上所述，UGT1A1基因G71R突變與G6PD缺陷在加重新生兒膽紅血癥及黃疸方面具有協同作用，該類患兒應作為臨床的重點工作對象，密切觀察和監護，及早發現膽紅素水平異常和早期干預，以減少因膽紅素血癥而引發的各類危重疾病的發生。

參 考 文 獻

[1] PALMER R H， EZHUTHACHAN S， NEWMAN C， et al. Management of hyperbilirubinemia in newborns： measuring performance using a benchmarking model.[J]. Pediatrics， 2004， 114（3）：902.

[2] LEVESQUE E， GIRARD H K， LEPINE J， et al. Regulation of the UGT1A1 bilirubin-conjugating pathway： role of a new splicing event at the UGT1A locus[J]. Hepatology，2007， 45（1）：128-138.

[3] VALAES T. Severe neonatal jaundice associated with G6PD Deficiency： Pathogenesis and global epidemiology[J]. Acta Paediatrica Supplement， 1994， 394（394）：58-76.

[4] 高宗燕. UGT1A1基因突變對廣西新生兒黃疸發病的影響[D]. 南寧：廣西醫科大學， 2008.

[5] STOCKER R， YAMAMOTO Y， MCDONAGH A F， et al. Bilirubin is an antioxidant of possible physiological importance[J]. Science， 1987， 235（4792）：1043-6.

[6] AHLFPRS C E， WENNBERG R P. Bilirubin-albumin binding and neonatal jaundice.[C]// Seminars in Perinatology. 2004：334-339.

[7] SUGATANI J， YAMAKAWA K， YOSHINARI K， et al. Identification of a defect in the UGT1A1 gene promoter and its association with hyperbilirubinemia.[J]. Biochemical & Biophysical Research Communications， 2002， 292（2）：492-7.

[8] HASEGAWA Y， SARASHINA T， ANDO M， et al. Rapid detection of UGT1A1 gene polymorphisms by newly developed Invader assay.[J]. Clinical Chemistry， 2004， 50（8）：1479-80.

[9] PETERSEN JP， HENRIKSEN TB， HOLLEGAARD MV， et al. Extreme neonatal hyperbilirubinemia and a specific genotype： a population-based case-control study[J]. Pediatrics ，2014 ，134（3）： 510-515.

[10] DAPOLITO M， MARRONE A， SERVEDIO V， et al. Seven novel mutations of the UGT1A1 gene in patients with unconjugated hyperbilirubinemia.[J]. Haematologica， 2007， 92（1）：133-134.

[11] LONG J， ZHANG S， FANG X， et al. Neonatal hyperbilirubinemia and Gly71 Arg mutation of UGT1 A1 gene： a Chinese case- control study followed by systematic review of existing evidence[J]. Acta Paediatr，2011，100（7） ： 966-971.

[12] MAAMOR N H， YUSOFF S， ZILFALILB A， et al. Frequency of G71R and Detectio of a Novel Mutation in Exon 1 of the UGT1A1 gene in a Malay population[J]. International Medical Journal， 2012， 19（3）：230-237.

[13] KAGA A， OHKUBO Y， WATANABE Y， et al. Development of icterus gravis in a preterm infant with G71R UGT1A1 polymorphism[J]. BMC Research Notes， 2013， 6（1）：1-4.

[14] 傅雯萍，吳彬彬，王恒. UGT1A1 G71R基因多態性對母乳性黃疸程度的影響[J]. 臨床兒科雜志，2010，289（3）：255-256.

[15] BARTLETT MG， GOURLEY GR. Assessment of UGT polymorphisms and neonatal jaundice. Semin Perinatol，2011，35（3） ： 127-133.

[16] BEUTLER E. G6PD deficiency.[J]. Blood， 1994， 84（11）：3613.

[17] CAPPELLINI M D， MARTINEZ D M F， SAMPIETRO M， et al. The interaction between Gilberts syndrome and G6PD deficiency influences bilirubin levels.[J]. British Journal of Haematology， 1999， 104（4）：928–929.