SRC-3 和PAX2在乳腺浸潤癌組織中的表達(dá) ①

周 昱，王 新，廉奇鑫

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院腫瘤科，黑龍江 佳木斯 154003)

SRC-3 和PAX2在乳腺浸潤癌組織中的表達(dá)①

周 昱，王 新，廉奇鑫

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院腫瘤科，黑龍江 佳木斯 154003)

目的：通過對女性乳腺癌癌旁正常組織、乳腺浸潤癌中PAX2與SRC-3相關(guān)蛋白分析是否相關(guān)并且有無臨床意義。方法：通過免疫組化SP法研究乳腺癌及正常組織中SRC-3，PAX2是否有表達(dá)。結(jié)果：SRC-3在乳腺浸潤癌中的陽性表達(dá)率為78.89%，在正常乳腺組織的陽性表達(dá)率為21.11%，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。PAX2在乳腺浸潤癌組織的陽性表達(dá)率為30.00%，在癌旁正常組織的陽性表達(dá)率為94.44%，其在癌旁正常組織的表達(dá)明顯高于乳腺浸潤癌組織中，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論:SRC-3與PAX2可能是乳腺浸潤癌的不良預(yù)后因素；二者共同參與了乳腺癌細(xì)胞增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移。

乳腺浸潤癌；SRC-3；PAX2

近年來，我國經(jīng)濟(jì)保持高速增長，中國和世界發(fā)達(dá)國家的對接能力越來越接近，無論是在經(jīng)濟(jì)還是民生或者醫(yī)療建設(shè)都有巨大的突破，在人民生活質(zhì)量提高的今天，疾病已經(jīng)成為現(xiàn)代關(guān)注討論的熱詞，其中“乳腺疾病”的爆發(fā)率呈現(xiàn)擴(kuò)散趨勢[1]。類固醇受體輔助活化因子-3(steroidreceptor-coaetivator-3SRC-3)[2]，由p160類固醇受體輔助活化因子SRC構(gòu)成，定位于人染色體20q12[3]，在1997年Anzick等人尋找并發(fā)現(xiàn)了與乳腺癌有關(guān)的擴(kuò)增基因SRC-3又名AIB-1(amplifiedinbreastcancer-1)、ACTR(activatorofthyroidhornone)、TRAM-1、NCoA3、RAC-3，以及P/CIP[4]。人類最初發(fā)現(xiàn)SRC-3是在人類乳腺癌染色體區(qū)域，SRC-3基因擴(kuò)增過度表達(dá)與很多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展有一定聯(lián)系，最常見的腫瘤是乳腺癌，其次卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌、胰腺癌和胃癌等。PAX家族中有一個因子PAX2(Pairedbox2)它以一個亞型的形式出現(xiàn)，而且學(xué)著研究出它定位于人類染色體10長臂25短臂上，它PAX家族一員特點(diǎn)包含高度保守的成對球型結(jié)構(gòu)域的,在泌尿系統(tǒng)中PAX2編碼的轉(zhuǎn)錄因子起了重不可少的作用它不僅對泌尿生殖系統(tǒng)、而且對中樞神經(jīng)系統(tǒng)等重要器官的發(fā)生發(fā)展中起決定性作用,而且它也經(jīng)常出現(xiàn)在性腫瘤中。此次實(shí)驗(yàn)在乳腺浸潤癌中SRC-3；PAX2是否有的表達(dá)及兩者之間有無意義，為乳腺癌早期診斷及預(yù)后提供科學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法1.1 標(biāo)本來源

收集我院2012-09～2015-09乳腺浸潤性癌組織標(biāo)本，共90例，每例樣品分別于肉眼可見的淋巴結(jié)、手術(shù)切緣的正常乳腺組織及癌灶取材。其中60例患者無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，30例患者有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。患者均為女性，年齡30～68歲，中位年齡49歲。腫瘤大小以最大截面剖開腫瘤后測得的最大橫徑為計，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均由病理證實(shí)。TNM分期采用國際抗癌聯(lián)盟(UICC)2002年的分期系統(tǒng)分期。所有患者均有完整的臨床資料，包括年齡、一般情況、腫瘤大小、淋巴結(jié)狀態(tài)、疾病分期及脈管浸潤情況。

1.2 主要試劑

北京中杉生物技術(shù)有限公司購買SRC-3兔抗單克隆抗體以及PAX2兔抗單克隆抗體。

1.3 免疫組化

通過免疫組化SP法研究乳腺癌及正常組織中SRC-3；PAX2是否有表達(dá)。

1.4 結(jié)果判定

SRC-3蛋白主要位于細(xì)胞質(zhì)，部分位于細(xì)胞膜，陽性者可見細(xì)胞質(zhì)染色呈棕黃色顆粒，在腫瘤組織中呈彌漫或片狀分布。采用二級計分法: 根據(jù)陽性細(xì)胞所占5個以上高倍鏡視野比例計數(shù): <5%為0分； 5%～25%為1分；26%～50%為2分；>50%為3分。染色強(qiáng)度分類: 淡黃色為1分；黃或深黃色為2分； 褐或棕褐色為3 分。兩者計分相乘大于1 分為陽性。PAX2蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，免疫組化結(jié)果可見細(xì)胞膜與細(xì)胞質(zhì)分別呈猩紅色和暗紫色。以高倍鏡( 400×) 觀察5 個視野，每個視野觀察100個細(xì)胞。染色強(qiáng)度分級為: 陰性(-):細(xì)胞不顯色或顯色<25%；弱陽性(+):25%～50%細(xì)胞顯色；中度陽性() :51%～75%細(xì)胞顯色，著色較深；強(qiáng)陽性():>75%細(xì)胞顯色，著色深。弱陽性、中度和強(qiáng)陽性均記為陽性。所有免疫組化結(jié)果由兩位高年資病理醫(yī)師雙盲閱片，對于不一致的判定結(jié)果，經(jīng)討論后得出一致結(jié)果。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

本次90例病例均是女性，平均年齡為49歲，(30～68歲)。術(shù)前均未行放療和化療。腫瘤組織學(xué)分級Ⅰ級+Ⅱ級32例(35.56%)，Ⅲ級58例(64.44%)。無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移30例(33.33%)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移60例(66.67%)，其中15例(16.67%)患者轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)都大于10枚。按照NCCN制定的乳腺癌TNM分期，Ⅰ期8例(8.89%)，Ⅱ期47例(52.22%)，Ⅲ期及以上35例(38.89%)，見表1。

表1 患者的一般資料

2.1SRC-3在癌旁正常組織、乳腺癌組織中的表達(dá)

SRC-3在癌旁正常組織、乳腺浸潤癌的陽性染色于細(xì)胞質(zhì)。SRC-3在癌旁正常組織、乳腺浸潤癌組織中的陽性表達(dá)見表2。從表中可以看到SRC-3在癌旁正常組織中的陽性率為21.11%(19/90)，在浸潤癌組織中表達(dá)的陽性率為78.89%(71/90)，SRC-3蛋白在乳腺浸潤癌中的表達(dá)明顯高于癌旁正常組織，兩者差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

表2 SRC-3在癌旁正常組織、乳腺浸潤癌組織的表達(dá)

2.2PAX2在癌旁正常組織、乳腺浸潤癌組織中的表達(dá)

PAX2在癌旁正常組織、乳腺浸潤癌組織的陽性染色于細(xì)胞質(zhì)。PAX2在癌旁正常組織、乳腺浸潤癌中的陽性表達(dá)見表3。從表中可以看到PAX2在癌旁正常組織中的陽性率為94.44%(85/90)，在乳腺浸潤癌組織中表達(dá)的陽性率為30.00%(27/90)，PAX2蛋白在乳腺浸潤癌組織中的表達(dá)明顯低于癌旁正常組織組織，兩者差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

表3 PAX2在癌旁正常組織、乳腺浸潤癌組織的表達(dá)

2.3SRC-3表達(dá)與乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

如表4所示，SRC-3蛋白在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌中陽性表達(dá)率為63.33%(38/60)，SRC-3蛋白在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌組織中陽性表達(dá)率為93.33%(28/30)，兩實(shí)驗(yàn)對照組組間比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

表4 SRC-3表達(dá)與乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

2.4PAX2表達(dá)與乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

如表5所示，PAX2蛋白在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌中陽性表達(dá)率為38.33%(23/60)，PAX2蛋白在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌組織中陽性表達(dá)率為13.33%(4/30)，兩實(shí)驗(yàn)對照組組間比較差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

表5 PAX2與乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

2.5SRC-3表達(dá)與PAX2表達(dá)的相關(guān)性分析

SRC-3表達(dá)與PAX2表達(dá)的相關(guān)性分析見表6；乳腺浸潤癌組織71例SRC-3陽性表達(dá)中有18例PAX2呈陽性表達(dá)；乳腺浸潤癌組織63例PAX2陰性表達(dá)中有10例SRC-3呈陰性表達(dá)；SRC-3表達(dá)與PAX2表達(dá)具有明顯的負(fù)相關(guān)性(r=-0.635，P<0.05)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

表6 SRC-3表達(dá)與PAX2表達(dá)的相關(guān)性分析

3 討論

到現(xiàn)在為止，全球?qū)θ橄侔┑木C合治療已經(jīng)取得了廣泛的認(rèn)識，目前國內(nèi)外專家對乳腺癌治療必須原發(fā)灶以及控制全身轉(zhuǎn)移，還要兼顧功能和外形，注重人性化的綜合治理[5～7]。國內(nèi)外研究顯示，在所有研究表名有31%～64% 的乳腺癌中呈高表達(dá)[8～10]。中國學(xué)者周濤等[11]研究表明，乳腺浸潤癌中SRC-3陽性表達(dá)率為54.59%。本研究發(fā)現(xiàn)，SRC-3 在乳腺浸潤癌中的陽性表達(dá)率為75.00%，該實(shí)驗(yàn)結(jié)果明顯高于國外學(xué)者研究及國內(nèi)學(xué)者周濤等的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，并且這幾個實(shí)驗(yàn)都提示SRC-3的陽性表達(dá)率可能與乳腺癌病理類型有關(guān)，本次實(shí)驗(yàn)有一次證明且證明了乳腺浸潤癌中SRC-3的陽性表達(dá)率可能更高。Silberstein[12]等人應(yīng)用免疫組化法監(jiān)測PAX2發(fā)現(xiàn)38例乳腺浸潤癌患者表達(dá)水平呈低表達(dá)。發(fā)現(xiàn)腫瘤的惡性越高則陰性表達(dá)率越高，腫瘤組織學(xué)分級越低，則陽性表達(dá)率越高。本測試結(jié)果發(fā)現(xiàn)在乳腺癌中該蛋白未發(fā)現(xiàn)PAX2表達(dá)的與其相關(guān)性(P=0.590)，最后分析可能跟數(shù)據(jù)樣本個數(shù)量不足有關(guān)。

PAX2、SRC-3在乳腺浸潤癌中的臨床意義、組織學(xué)類型、TNM分期在同一類腫瘤中，即使治療方案一樣，但對患者預(yù)后治療效果都是不一樣的，它們之間的差別被大部分學(xué)著認(rèn)為是由于腫瘤分子生物學(xué)的本質(zhì)是不同的。惡性腫瘤具有獨(dú)特的異型性，它們的形態(tài)盡管相同腫瘤的分子遺傳學(xué)卻千姿百態(tài)它們表達(dá)的水平也各有各樣，進(jìn)而更進(jìn)一步使腫瘤發(fā)生及其對預(yù)后差異較大。因此大部分學(xué)著期待在未來研究中對分子水平上的腫瘤進(jìn)行分型并且研究，希望以后會更加明確的判斷惡性腫瘤生物學(xué)行為以及在預(yù)后的治療方案及個體化治療策略。

實(shí)驗(yàn)樣本量僅有 90例，只能初步研究了PAX2、SRC-3在乳腺浸潤性癌中的表達(dá)、與臨床中的特征的關(guān)系、以及兩者的相關(guān)性，對乳腺浸潤癌的預(yù)后判斷提供了新的思路，但PAX2、SRC-3 在腫瘤形成過程中的明確的機(jī)制還不完善，還需要更深層次的實(shí)驗(yàn)研究。

[1]王新，范立君，李壯,等.GRP78、GRP94在乳腺癌中的表達(dá)及其意義[J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，2014，37(6):89-91

[2]廉奇鑫,蘇俊強(qiáng),王新.FBXW7和SRC-3在乳腺癌中的表達(dá)及臨床意義[J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué),2015,38(3):72-74

[3]LahusenT,HenkeRT,KaganBL,etal.Theroleandregulationofthenuclearreceptorco-activatorAIB1inbreastcancer[J].BreastCancerResTreat,2009, 116:225-237

[4]ZhangH,YiX,SunX,etal.DifferentialgeneregulationbytheSRCfamilyofcoactivators[J].Genes&Devdopment,2004,18(14):1753-1765

[5]BeelenK.PI3K/AKT/mTORpathwayactivationinprimaryandcorrespondingmetastaticbreasttumorsafteradjuvantendocrinetherapy[J].IntJCancer，2009，135：1257-1263

[6]Beca,F.p-mTORexpressionisassociatedwithbetterprognosisinluminalbreastcarcinoma[J].JClinPathol，2014， 67： 961-967

[7]Andrade-VieiraR,GoguenD,BentleyHA,etal.Pre-clinicalstudyofdrugcombinationsthatreducebreastcancerburdenduetoaberrantmTORandmetabolismpromotedbyLKB1loss[J].Oncotarget, 2014，12738-12752

[8]IwaseH，OmotoY，ToyarnaT，etal．ClinicalsignificanceofAIB-1expressioninhumanbreastcancer[J]．BreastCancerResTreat，2003，80(3):339-345

[9]ShibataA，HayashiY，ImaiT，etal．SomaticgenealterationofAIB1geneinpatientswithbreastcancer[J]．EndocrJ，2001，48 (2):199-204

[10]BourasT，SoutheyMC，VenterDI．Over-expressionofthesteroidreceptorcoactivatorAIB-linbreastcancercorrelateswiththeabsenceofestrogenandprogesteronereceptorsandpositivityforp53andHER-2 /neu[J]．CancerRes，2001，61(3):903-907

[11]周濤，李云濤，范忠林． 乳腺癌組織中AIB-1 蛋白表達(dá)與臨床病理指標(biāo)的相關(guān)性[J]． 腫瘤防治研究，2009，36( 9) : 750-753

[12]GaryBSilberstein.ExpressionofthePAX2oncogeneinhumanbreastcanceranditsroleinprogesterone-dependentmammarygrowth[J].Oncogene,2002,21:1009-1016

1.黑龍江省青年基金批準(zhǔn)號，編號：QC2013C013；2.佳木斯大學(xué)青年基金，編號：sq2013-013。

周昱(1969～)男，黑龍江雙鴨山人，本科，副主任醫(yī)師，副教授，碩士研究生導(dǎo)師。

王新(1963～ )男，黑龍江佳木斯人，碩士，主任醫(yī)師，教授，碩士研究生導(dǎo)師。E-mail:1502136777@qq.com。

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1008-0104(2017)01-0048-02

2015-11-20)