卵巢漿液性囊腺癌中PDCD4的表達及其與預后的關系①

宋繼榮，肖 敏，張丹鳳

(佳木斯大學附屬第一醫院婦產科,黑龍江 佳木斯 154003)

卵巢漿液性囊腺癌中PDCD4的表達及其與預后的關系①

宋繼榮，肖 敏，張丹鳳

(佳木斯大學附屬第一醫院婦產科,黑龍江 佳木斯 154003)

目的:探討卵巢漿液性囊腺癌中程序性細胞死亡因子4(PDCD4)的表達，并評估其和預后的關系。方法:佳木斯大學附屬第一醫院的婦產科收集2008-01～2012-08接受手術治療，且隨訪資料完整的50例卵巢漿液性囊腺癌患者的存檔蠟塊，10例癌旁正常組織標本。采用免疫組化方法檢測PDCD4在卵巢癌中的表達，并分析它與預后的關系。用SPSS17.0進行數據處理，對于患者的總生存情況，采用Kaplan-Meier法進行分析；對于影響卵巢癌生存預后的因素，運用Cox比例風險模型分析。結果:①50例卵巢癌患者中PDCD4總體的陽性表達率為42%(21/50)，缺失表達率為58% (29 /50),PDCD4在癌旁組織中總的陽性率80%(8/10)，差異有統計學意義(χ2=18.963，P=0.000)。②PDCD4的表達與卵巢癌組織分化程度(χ2=5.466，P=0.019)、臨床分期(χ2=7.550，P=0.006)均有關，而與年齡無關(χ2=3.120，P=0.077)。③50例卵巢癌中PDCD4陽性表達者其總體生存情況明顯優于PDCD4表達陰性者(χ2=22.136，P=0.000)。④在多因素的分析中，PDCD4被證明是影響卵巢癌總生存的獨立因素。結論:在卵巢漿液性囊腺癌中，PDCD4是低表達；在總生存情況中，PDCD4 蛋白陽性的表達者優于PDCD4 蛋白陰性者；PDCD4可成為評估卵巢漿液性囊腺癌預后的獨立因素。

卵巢漿液性囊腺癌；程序性細胞死亡因子4；預后

卵巢癌是女性常見的生殖道惡性腫瘤之一，而85%～90%的卵巢惡性腫瘤為上皮性癌，在上皮性癌中75%為漿液性囊腺癌。在女性生殖系統腫瘤中，卵巢癌的發病率雖為第三位，但它的死亡率卻居第一位[1]，嚴重威脅著女性的健康。現如今，臨床中對于其治療仍然采用手術并聯合化療，但因卵巢癌出現耐藥性，術后5年仍是僅有較低的存活率。關于晚期卵巢癌患者，近年有報道表明其5年存活率僅為25%～30%[2]。因此，尋求新的方法提高卵巢癌患者的診斷治療及預后成為眾多學者的研究熱點，而隨著分子生物學技術的發展，對于腫瘤的發生、進展和凋亡過程，人們有了更深一步的認識，特別是抑癌基因的發現和進一步的研究，為治療腫瘤提供了新的思路，成為新的治療靶點。

1995年于小鼠體內發現了PDCD4，它是與細胞凋亡有關的因子，而其抑制腫瘤生長表現為：抑制蛋白轉錄和翻譯過程[3]。近幾年來，其在抑制腫瘤細胞生長轉化方面引起了人們越來越多的關注，大量研究表明，PDCD4在腫瘤組織中的低表達狀態對腫瘤的病理分級及預后判斷有重要意義[4,5]。然而，在卵巢癌方面，PDCD4的研究相對較少，目前，關于PDCD4與卵巢癌預后的關系，國內尚未有研究。而本文則利用免疫組化檢測PDCD4在卵巢癌中的表達，并分析其與預后的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 對象及標本

搜集2008-01～2012-08就診于本院的50例卵巢癌患者，且其手術標本均已證實為卵巢漿液性囊腺癌的存檔蠟塊，同時選用10例癌旁組織作為對照，年齡36～70歲。患者術前均未接受放化療，病理得到病理科醫師證實。根據FIGO制定的標準進行手術病理分期，在卵巢漿液性囊腺癌患者標本中，Ⅰ期12例，Ⅱ期10例，Ⅲ期18例，Ⅳ期10例。其中11例為高中分化，39例為低分化。

1.1.2 實驗用品

器材：超凈工作臺，恒溫箱，顯微鏡等。試劑：兔抗人PDCD4多克隆抗體(購于北京博奧森生物技術有限公司)，顯色劑(DAB液)及抗體稀釋液等。

1.2 方法

1.2.1 實驗方法

操作步驟：通過病理號查找病理科存檔的病理蠟塊，蠟塊常規脫蠟制成4μm厚切片，經過水化、封閉、滴加一抗(兔抗人PDCD4)，然后滴加二抗，通過顯色劑顯色及復染，最終脫水、封片、鏡下采圖并計數。

1.2.2 結果判定

PDCD4的陽性表達于細胞核和細胞質中均有。在高倍視野下進行計數，評分判定：(l)陽性率：陽性細胞占總細胞數的百分率<5%為0分，5%～<25%為1分，25%～<50%為2分，50%～<75%為3分，75%～100%為4分。(2)染色強度以淺黃色計1分,黃色計2分，深黃色計3分。最終陽性率與染色強度的積分乘積為表達強度，0分為陰性(-)，1～3分為弱陽性(+),4～8分為中度陽性(),9～12分為強陽性()。

1.3 隨訪

用電話方式進行隨訪，2015年08月為最終截止日期。自進行手術日起直至出現與卵巢癌相關的死亡的時間即為總生存時間。

1.4 統計學方法

采用SPSS17.0統計軟件。用χ2檢驗進行率的比較，而對于等級資料，則采用Spearman等級相關檢驗。關于患者的總生存情況，用Kaplan-Meier法進行分析，而生存曲線間的差異，則用Log-rank檢驗進行比較，對于影響卵巢癌生存預后的因素，運用Cox比例風險模型分析。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1PDCD4的表達情況

在卵巢癌細胞核和胞質中，PDCD4都有陽性表達，在卵巢癌中為42%，癌旁中為80%，差異有統計學意義(χ2=18.963，P=0.000)見表1。

表1 卵巢漿液性囊腺癌及癌旁中PDCD4的表達情況

分組PDCD4-+總計卵巢癌組織29137150癌旁正常組織213410總計311410560

2.2PDCD4與卵巢漿液性囊腺癌臨床病理的關系

根據免疫組化結果，以及統計學分析，PDCD4表達的高低和組織分化程度(P=0.019)、臨床分期(P=0.006)有關，P<0.05。而與年齡無關(P=0.077)見表2。

表2PDCD4與卵漿液性囊腺癌臨床病理之間的關系

臨床病理特征nPDCD4+-χ2值P值年齡(歲)≤55261412>55247173．1200．077分化程度高-中1183低3913265．4660．019臨床分期早(Ⅰ～Ⅱ)22148晚(Ⅱ～Ⅲ)287217．5500．006

2.3PDCD4表達與卵巢癌預后的關系

50例乳卵巢癌患者中PDCD4 陽性表達者其總生存率明顯優于PDCD4 陰性表達者(χ2=22.136，P=0.000)，見圖1。

圖1 PDCD4表達與總生存情況的關系

2.4 卵巢癌患者總體生存情況相關的多因素分析

在影響卵巢癌總生存情況中，PDCD4可作為獨立因素(P=0.000),見表3。

表3 影響卵巢癌患者總體生存情況的多因素分析

因素β值標準誤WaldX2自由度P值HR95%CI年齡-0．5590．4321．67610．1950．5720．245-1．333分期0．4900．4351．26810．2601．6320．696-3．829分化-0．4490．7680．34210．5590．6380．142-2．876PDCD4-3．4841．07210．55610．0010．0310．004-0．251

3 討論

卵巢癌具有發病隱匿、早期的診斷率低、較容易發生轉移等特點，因此若患者自覺有臨床癥狀來就診時，多數已至晚期，如出現廣泛轉移，根治性手術就難以實施，因此眾多學者致力于尋找新的方法治療卵巢癌。目前，在原有治療方案的基礎上，新的方法為中晚期的卵巢癌提供了新的選擇，這些方法包括生物、免疫和分子靶向治療等[6]，同時為改善卵巢癌的預后提供了可能。隨著對卵巢癌生物機理的研究，分子靶向治療進入了人們的視線，且很快得到關注，而了解卵巢癌基因突變，成為分子靶向治療的基礎。伴隨著PI3K/AKT/MTOR信號通路的研究，并探討其在卵巢癌中的重要性，有眾多研究者已致力于研究此信號通路的抑制劑,而作為此信號通路下游的PDCD4因子于發現后也被用于多個領域研究。

PDCD4基因是Shibahara等于1995年研究小鼠細胞程序性死亡過程中發現的，后來Cmarik等在小鼠的角蛋白細胞腫瘤轉化模型及Jansen等應用小鼠體內皮膚癌模型研究過程中證實PDCD4是腫瘤抑制基因[7]。人類PDCD4基因定位于10q24，cDNA全長約3.5kb，編碼區約1.4kb。有研究證實，PDCD4在人類多種組織中均有表達，且大多數正常組織細胞中，PDCD4蛋白主要位于細胞核中。本研究表明，在正常組織中，PDCD4表達于細胞核，而在卵巢癌中，胞核與胞質均有表達，PDCD4此種表達現象在卵巢癌中意義尚不明確。孫瑋等[8]發現，在正常組織中，PDCD4位于細胞核中，若細胞周圍環境改變，例如：在營養條件不利，或惡性細胞發生增殖時，通過核輸出信號，它可以轉移到胞漿中。故對PDCD4在卵巢癌細胞中的這種表達現象進一步研究，可能為明確其在卵巢癌發生發展中的作用提供依據。

近期有研究發現，在惡性腫瘤的形成和發展中，有PDCD4參與，且在很多腫瘤組織中，它均呈低水平或缺失。本實驗表明，在卵巢漿液性囊腺癌中，PDCD4的表達率明顯低于癌旁組織，且隨著其分期增高、分化程度降低，PDCD4呈低水平，甚至缺失，提示PDCD4的低表達或缺失在卵巢癌的發生以及發展中發揮重要作用。而許多學者在結腸癌、腎癌、胃癌等的研究中也得到相同的結論。同時也有研究表明，PDCD4的致病機制與CpG島甲基化、微小RNA磷酸化和泛素化調控有關，然而，在卵巢癌中的致病機制還有待進一步研究。

此后，在乳腺癌、大腸癌、肺癌等多種惡性腫瘤研究中表明，PDCD4的缺失與預后不良有關。但在卵巢癌中國內尚未有此類研究，而本研究發現，PDCD4與卵巢漿液性囊腺癌的預后有關，且可能成為評估其預后的獨立因素。韓曉蓉等[9]在關于乳腺癌預后的研究中同樣得出，PDCD4可作為獨立因素。根據PDCD4的表達判斷預后的同時，還可進一步研究增加PDCD4表達的方法，同時也為分子靶向治療提供一個新的靶點。

[1]佟麗波，楊秀蓮，張丹鳳，等.KLK7蛋白及E-鈣黏蛋白在卵巢癌中的表達及意義[J].黑龍江醫藥科學,2010, 33(6):3-5

[2]徐馳，溫義成，劉健.血清CA-125、CA-153、HCG在卵巢癌聯合檢查中應用的價值[J].黑龍江醫藥科學，2013, 36(3):67

[3]Lankat-ButtgereitB,GokeR.ThetumoursuppressorPdcd4recentadvancesintheelucidationoffunctionandregulation[J].BiolCell, 2009, 101(6):309-317

[4]ChenY,KnoselT,KristiansenG,etal.LossofPDCD4expressioninhumanlungcancercorrelateswithtumorprogressionandprognosis[J].JPathol, 2003, 200(5):640-646

[5]FangW,LiX,JiangQ,etal.Transcriptionalpatterns,biomarkersandpathwayscharacterizingnasopharyngealcarcinomaofSouthernChina[J].JTranslMed, 2008, 6:28-32

[6]劉云，杜成，劉文超.卵巢癌治療新進展[J].現代腫瘤學， 2015, 23(4):553-556

[7]張海員，徐暉，劉佳瑋，等.PDCD4在DNA損傷和腫瘤耐藥性中的研究進展[J].中華臨床雜志，2013, 7(22):10268-10270

[8]孫瑋，高飛，張利寧.新的抑癌基因PDCD4最新研究進展[J].藥物分析雜志，2007, 27(7):1138-1141

[9]韓曉蓉，吳坤河，郜紅藝.不同分子亞型乳腺癌中程序性細胞死亡4的表達及其與預后的關系[J].中國普外基礎與臨床雜志，2014，21(5):577-582

佳木斯大學科學技術面上項目，編號：13Z1201553。

宋繼榮(1969～)女，黑龍江佳木斯人，碩士，主任醫師，碩士研究生導師。

肖敏(1989～)女，黑龍江黑河人，在讀碩士研究生。E-mail：313505660@qq.com。

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1008-0104(2017)01-0055-03

2015-12-07)