趨化因子I-TAC及其受體3對腺樣囊性癌轉移影響的研究①

莊桂婧，李鐵成，邱 明

(1.佳木斯大學附屬第二醫院 ，黑龍江 佳木斯 154002 ；2.大慶油田總醫院口腔科，黑龍江 大慶 163001 )

趨化因子I-TAC及其受體3對腺樣囊性癌轉移影響的研究①

莊桂婧1，李鐵成2，邱 明2

(1.佳木斯大學附屬第二醫院 ，黑龍江 佳木斯 154002 ；2.大慶油田總醫院口腔科，黑龍江 大慶 163001 )

目的:初步研究趨化因子(I-TAC)及其受體(CXCR3)誘導血管生成擬態形成在腺樣囊性癌中的作用和意義。方法:實驗選用唾液腺樣囊性癌病理蠟塊24塊，綜合臨床癥狀和鏡下觀察應用免疫組織化學法，檢測唾液腺腺樣囊性癌及正常唾液腺組織旁組織中I-TAC-CXCR3的表達并采用PAS、CD31雙重染色法檢測各組組織中血管生成擬態的形成狀況。結果:I-TAC和CXCR3在腺樣囊性癌組織中的表達量高于瘤旁組織(P<0.05)。在有神經轉移的腺樣囊性癌組織中高于無神經轉移的腺樣囊性癌組織(P<0.05)。有神經轉移和無神經轉移組織都存在血管生成擬態，然而在有神經轉移的腺樣囊性癌中血管生成擬態的表達數量明顯高于無神經侵襲組和正常組織。結論:I-TAC和CXCR3在腺樣囊性癌組織中高表達提示二者可能在腺樣囊性癌的發病機制中發揮作用血管生成擬態在有神經轉移的腺樣囊性癌中高表達且CXCR3與組織陽性表達的血管生成擬態呈正相關 (相關系數r=0.718,P<0.01)。初步得出趨化因子及其受體可能與腺樣囊性癌的神經轉移相關。

腺樣囊性癌;趨化因子及其受體;血管生成擬態;免疫組織化學

I一TAC為干擾素誘導的T細胞趨化因子(分子標記CXCLll)被稱為1型趨化因子(或Thl趨化因子),其受體是CXCR3[9]。I-TAC強有力的趨化現象和代理激活T細胞的這兩種活動依賴在CXCR3激活[1]。腺樣囊性癌具有嗜神經侵襲的特性，因此我們推測I-TAC-CXCR3這對生物軸誘導血管擬態形成為腺樣囊性癌發生嗜神經侵襲的機制之一[2]，本實通過檢測腺樣囊性癌及其癌旁組織中I-TAC-CXCR3 表達的差異及其與血管生成擬態[3]多少的關系來分析其與對腺樣囊性癌神經轉移的趨化性和對血管擬態形成的誘導關系。

1 材料與方法

1.1 標本來源

取大慶油田總醫院病理科2014～2015年間的唾液腺腺樣囊性癌病理蠟塊27例，其中男15例，女12例；年齡25～73歲。分別取腺樣囊性癌組織和腫瘤外1.0cm正常腮腺組織，標本轉至液氮罐中，后置于-80℃低溫冰箱中保存待用,其余標本送病理科石蠟包埋，常規病理檢查,病理診斷均由兩位病理醫生確診，神經侵襲腺樣囊性癌18例，無神經侵襲9例。每例腫瘤標本連續切片，厚度約 4～6μm，選取完整均勻的切片HE染色后光鏡下觀察，如發現1處及以上在神經周圍和(或)神經內有腫瘤細胞的存在，即將該例組織劃為侵襲神經現象組。共計侵襲神經現象標本 18例,未侵襲現象標本9例。

1.2 免疫組化SP法檢測I-TAC和CXCR3的表達

I-TAC和CXCR3的檢測采用SP免疫組化法，染色程序按SP試劑盒說明書進行。

1.3CD31與PAS雙重染色方法

首先進行CD31免疫組化染色(染色步驟如上),DAB顯色后。顯微鏡下觀察,血管內皮細胞著色后,水流沖洗1min終止顯色反應。將切片置于0.5%的過碘酸溶液中氧化8～15min。水流沖洗3min后置于Schiff液中,閉光環境在Schiff液中反應15～30min,一般15min為宜。蒸流水洗3次,每次1min,流水沖洗3～5min。蘇木精淺染胞核l2min(蘇木精為實驗開始時配置),自來水沖洗2min。鹽酸酒精分化,氨水返藍。常規酒精脫水,二甲苯透明,中性樹膠封片。

1.4 統計學方法

采用SPSS19.0軟件進行統計分析，各計量資料以均數 ± 標準誤表示，表達水平分析采用四格表資料的Fisher確切概率法，P<0.05表明差異有統計學意義。兩組變量間的相關性分析采用Pearson等級相關分析,以P<0.01為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 免疫組織化學法檢測I-TAC和CXCR3 的表達結果顯示:27對腺樣囊性癌組織及其瘤旁組織均測得I-TAC和CXCR3的表達，腺樣囊性癌組織及其瘤旁組織I-TAC和CXCR3平均表達量見表1，I-TAC和CXCR3 在有神經侵襲組織的腺樣囊性癌中的表達高于無神經侵襲的腺樣囊性癌組織和正常組織，差異有統計學意義(P<0.05)。

2.2 在腺樣囊性癌組織中觀察到血管擬態的存在并且有神經侵襲組明顯多于無神經侵襲及正常組織，差異有統計學意義(P<0.05)。

表1 CXCR3,I-TAC,VM在腺樣囊性癌和正常組織免疫組化染色結果

圖1I-TAC在有神經侵襲的SACC的表達(×400)

圖2 CXCR3 在有神經侵襲的SACC的表達(×400)

圖3 VM在神經侵襲的SACC的表達(×400)

3 討論

腫瘤細胞常常表現出特定的轉移方式，并且不同的腫瘤細胞具有各自的特異性侵襲器官，這提示受侵襲器官周圍的微環境對腫瘤細胞的誘導、侵襲和增殖效應有著一定的影響作用。腺樣囊性癌有嗜神經的特性，因此有必要對其特征性的嗜神經特性進行相關的研究。趨化因子是一類可誘導的、分子質量為7～8kD的促炎細胞因子，具有激活和趨化白細胞的作用[4]。根據其末端半膚氨酸保守序列位置的不同可分為四大類，其中CXC類趨化因子的近氨基端存在CXC(半膚氨酸一其它氨基酸一半眺氨酸)基序，這類趨化因子—可趨化中性粒細胞，刺激血管形成[10]。VM是具有侵襲性腫瘤細胞為滿足自身的侵襲發展提供路徑和營養，而通過自身變形和細胞外基質重塑形成的一種類似血管樣的通道[5]。VM在鏡下觀察的情況是腫瘤細胞形成瘤細胞條索并圍成管道，管道內沒有血管內皮細胞襯覆，管道外是一層厚薄不一的PAS陽性物質構成的基底膜。血液則在這無內皮細胞的管道中流動。因為VM缺乏內皮細胞，所以腫瘤細胞可直接進入血液，發生血行播散,不同于經典的內皮細胞依賴的腫瘤微血管結構[6]。為了驗證趨化因子和血管擬態的關系，本實驗設計應用免疫組織化學法檢測I-TAC和CXCR3在有無神經侵襲的腺樣囊性癌中的表達程度與周圍的正常組織做照，PAS、CD33雙重染色觀察血管擬態的形成狀況。實驗結果顯示在有神經侵襲的腺樣囊性癌中I-TAC和CXCR3 的表達明顯高于無神經轉移和正常組織(P<0.05)。在表達CXCR3的有神經轉移的腺樣囊性中均能觀察到血管生成擬態。統計結果進行配對資料的相關性分析，表明CXCR3主要表達與腺樣囊性癌組織臨床病理特征的關系：CXCR3與I-TAC兩者陽性表達呈正相關(相關系數r=0.652,P<0.01),血管生成擬態(VM)與CXCR3兩者的陽性表達呈正相關(相關系數r=0.718,P<0.01)。通過以上實驗現象和數據可以發現CXCR3，I-TAC和VM的表達與腺樣囊性癌的病理分型有關，均為神經侵襲較無神經侵襲偏高(P<0.05)，初步分析CXCR3和I-TAC對腺樣囊性癌的發展和轉移有促進作用，CXCR3與血管生成擬態陽性表達呈正相關提示CXCR3和I-TAC可以誘導血管生成擬態生成，為腺樣囊性癌的神經轉移提供信號，實驗也證實了腺樣囊性癌存在VM,神經轉移組陽性表達率明顯增高,說明血管生成擬態與神經轉移有相關性。依據實驗和以往的研究結果可以初步判定CXCR3/I-TA/C受體配體對口腔腺樣囊性癌細胞轉移提供了信號[7]，誘導形成血管擬態為口腔腺樣囊性癌侵襲轉移提供血液供應促進它的嗜神經侵襲。因此,在臨床上可通過CXCR3，I-TAC及血管生成擬態對腺樣囊性癌患者檢測,從而對腺樣囊性癌神經轉移進行早期預測,早期治療[8]。考慮到治療的安全和可靠性,還需要今后更多的體內、體外實驗研究，為進一步降低腺樣囊性癌轉移率提供依據。

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The effect of I-TAC and its receptor 3 on the metastasis of adenoid cystic carcinoma

ZHUANGGui-jing1，LITie-cheng2，QIUMing2

(1. Department of Stomatology, the Affiliated Stomatology Hospital of Jiamusi University, Jiamusi 154002,China; 2, Daqing Oilfield General Hospital，Daqing163004,China)

Objective: To study the role and significance of chemotactic factor (I-TAC) and its receptor (CXCR3) on inducing the formation of vasculogenic mimicry in adenoid cystic carcinoma. Methods：24 blocks of salivary adenoid cystic carcinoma pathological were observed by immunohistochemical method combined with clinical symptoms and endoscopic. The expression of I-TAC-CXCR3 in salivary adenoid cystic carcinoma and normal salivary gland tissues were detected. Vascular PAS and CD31 double staining methods were used to detect the formation of tissue mimicry.Results:The expression of I-TAC and CXCR3 in adenoid cystic carcinoma tissues was higher than that nearby tumor tissues (P<0.05).Neuroinvasive-nessofadenoidcysticcarcinoma(P< 0.05)ishigherthanthatofthenonmetastaticadenoidcysticcarcinoma.Vasculogenicmimicryexistsinneuroi-nvasivenessandnonmetastaticofadenoidcysticcarcinoma.Tissueswithandwithoutnervetransferexistangiogenesismimicry.However,inadenoidcysticcarcinomawithnervetransferinangiogenesis,theexpressionquantityofmimicrywasobviouslyhigherthanthatofnonerveinvasiongroupandnormalgroup. Conclusion: The high expressions of I - TAC and CXCR3 in adenoid cystic carcinoma tissue indicate that they might play a role in the pathogenesis of adenoid cystic carcinoma. The expressions of angiogenesis mimicry in adenoid cystic carcinoma with nerve transfer are high. Angiogenesis mimicry CXCR3 and the positive expressions of tissues were positively correlated (correlation coefficientr=0.718,P<0.01).Itispreliminarilyconcludedthatchemokinesandtheirreceptorsmaybeassociatedwiththenervetransferofadenoidcysticcarcinoma.

adenoid cystic carcinoma；the chemotactic factor and its receptor；vasculogenic mimicry; immunohistochemistry

莊桂婧(1989～)女，黑龍江綏化人，在讀碩士研究生。

邱明(1964～)男，黑龍江大慶人，碩士，主任醫師，碩士研究生導師。E-mail:zhuang.guimi@163.com。

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1008-0104(2017)01-0082-03

2016-01-05)