四妙勇安湯活性部位灌胃給藥的急性毒性實驗研究※

聶 波 徐 冰 陳立新 趙明鏡 吳愛明 婁利霞 鄭思新 吳圣賢

(北京中醫藥大學東直門醫院中醫內科學教育部和北京市重點實驗室，北京 100700)

四妙勇安湯活性部位灌胃給藥的急性毒性實驗研究※

聶 波 徐 冰1陳立新2趙明鏡 吳愛明 婁利霞 鄭思新3吳圣賢△

(北京中醫藥大學東直門醫院中醫內科學教育部和北京市重點實驗室，北京 100700)

目的 觀察四妙勇安湯活性部位(SMAF)灌胃給藥的急性毒性。方法 通過預實驗，未獲得動物的半數致死量，進行最大耐受量試驗。選取昆明小鼠及Wistar大鼠各40只，雌雄各半，均分為給藥組(20只)及對照組(20只)，雌雄各半，給藥組采用一次最大濃度和最大容積灌胃給藥，小鼠灌胃劑量為6.0 g/kg，大鼠灌胃劑量為3.0 g/kg，對照組灌胃等容積0.5%羧甲基纖維素。觀察給藥14 d內，大、小鼠的行為、體質量、進食量、死亡率及毒性反應，計算藥物的最大耐受量。結果 給藥后14 d內，與對照組相比，給藥組雌雄小鼠、大鼠活動、行為、眼瞼、分泌物、呼吸、腹形、排便等均無異常，未見因藥物引起的死亡。給藥組雌雄小鼠、大鼠給藥后7、14 d體質量與對照組同期比較差異無統計學意義(P>0.05)。給藥組雌雄小鼠、大鼠藥后7、14 d進食量與對照組同期比較差異無統計學意義(P>0.05)。給藥14 d后，處死各組小、大鼠，與對照組比較，給藥組均未見臟器明顯的腫大、萎縮、壞死、充血、出血、水腫等異常現象。四妙勇安湯活性部位一次性灌胃給藥對小鼠最大耐受量>6.0 g/kg(相當于人日推薦量的360倍)；對大鼠最大耐受量>3.0 g/kg(相當于人日推薦量的180倍)。結論 SMAF灌胃給藥沒有明顯毒性。

四妙勇安湯；急性毒性試驗；最大耐受量；大鼠,Wistar；小鼠

四妙勇安湯是最具中醫配伍和用量特色的經典古方之一，收載于清代醫家鮑相敖的《驗方新編》，由金銀花、玄參、當歸、生甘草組成，具有解毒、滋陰、活血、通絡等功效，是治療下肢動脈硬化閉塞癥和脈管炎的傳統名方[1-2]。近年來，本著中醫學“異病同治”的辨證論治思想，該方被廣泛用于治療冠心病、動脈粥樣硬化、不穩定性心絞痛等心血管疾病，臨床療效顯著[3-4]。

課題組自2000年提出并探索了解毒活血藥防治動脈粥樣硬化的思路，展開了相關的實驗研究，結果表明：清熱解毒和活血化瘀并用的四妙勇安湯，不但可以調節血脂，延緩斑塊形成[5-6]，還可以減輕動脈粥樣硬化炎癥反應，穩定斑塊，防止斑塊破裂[7-8]。但由于原組方中各藥用量大，作用機制、藥效物質基礎、藥物的安全性報道較少，因此，我們利用藥效活性導向篩選和組分配伍方法獲得活性組合物“四妙勇安湯”的活性部位，為評價其安全性，本試驗觀察一次性灌胃“四妙勇安湯”活性配伍方對大鼠、小鼠所產生的毒性反應和最大耐受量[9-10]，為藥效學研究提供劑量參考，為其臨床應用及進一步的安全性試驗研究奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 受試藥物 四妙勇安湯活性部位(縮寫SMAF，下同)是利用藥效活性導向篩選和組分配伍方法獲得的活性組合物，1 g SMAF相當于原藥材12.37 g。取研磨后的SMAF 15 g，加入0.5%羧甲基纖維素(CMC)至100 mL溶解，按照設計劑量(小鼠灌胃給藥劑量6.0 g/kg，大鼠灌胃給藥劑量3.0 g/kg)，用0.5% CMC水溶液稀釋成所需濃度，備用。賦形劑對照組：0.5% CMC。

1.2 實驗動物及飼養條件 昆明小鼠40只，雌雄各半，體質量18～22 g。Wistar大鼠40只，雌雄各半，體質量140～160 g。購于軍事醫學科學院實驗動物中心[許可證號：SCXK-(軍)2007-004]。大、小鼠均飼養于北京科蘭博實驗動物研究所小動物實驗室[許可證號：SYXK-(京)2007-0018]。室溫25～28 ℃，濕度50% RH左右，光照良好。動物飼料為北京科蘭博實驗動物研究所專用飼料，自由進食和飲水。實驗過程中對動物的處置符合北京中醫藥大學東直門醫院實驗動物倫理委員會的規定。

1.3 實驗器材 注射器(1、2.5 mL)，量筒(20 mL)，燒杯(25、50 mL)，小鼠灌胃針，PW-3電子秤(上海凱士電子有限公司)，外科手術剪，眼科鑷子，防護手套。

1.4 小鼠急性毒性試驗方法[11-12]小鼠40只，隨機分為給藥組和對照組，雌雄各半，每組各10只。給藥組：灌胃給藥劑量6.0 g/kg，一次性給藥。灌胃前禁食不禁水12 h，給藥后常規飼養，觀察14 d。對照組灌胃等容積的0.5% CMC。

1.5 大鼠急性毒性試驗方法[13]大鼠40只，隨機分為給藥組和對照組，雌雄各半，每組各10只。給藥組：灌胃給藥劑量3.0 g/kg，一次性給藥。灌胃前禁食不禁水12 h，給藥后常規飼養，觀察14 d。對照組灌胃等容積的0.5% CMC。

1.6 觀察指標 ①一般狀態：主要觀察給藥后即刻至6 h動物的一般狀態(包括行為、活動、眼瞼、分泌物、呼吸、腹形、排便等)。其后上述內容每日觀察1次，如動物死亡及時肉眼尸檢；②于給藥前和給藥后的第7、14 d，測量體質量；③于給藥前和給藥后的第7、14 d，測量進食量；④藥后14 d處理活存動物，進行大體解剖，若有肉眼可見變化則進行組織病理學檢查。

2 結 果

2.1 小鼠急性毒性實驗

2.1.1 一般情況 給藥后14 d內，與對照組相比，給藥組小鼠活動、行為、眼瞼、分泌物、呼吸、腹形、排便等均無異常，未見因藥物引起的死亡。

2.1.2 死亡率及最大耐量 給藥后14 d內，與對照組相比，給藥組小鼠全部活存，提示最大耐受量>6.0 g/kg。

2.1.3 小鼠主要臟器解剖肉眼觀察 給藥14 d后，小鼠脫頸椎處死，解剖，觀察心、肝、脾、肺、腎等主要臟器，與對照組比較，給藥組均未見臟器明顯的腫大、萎縮、壞死、充血、出血、水腫等異常現象。

2.1.4 SMAF對小鼠體質量的影響 見表1。

表1 SMAF對小鼠體質量的影響

n給藥組(n=20)給藥前給藥后7d給藥后14d對照組(n=20)給藥前給藥后7d給藥后14d雌性1020.70±0.7925.50±0.5129.90±1.2921.40±0.7526.00±0.5429.60±0.47雄性1020.70±1.1826.80±0.6830.90±1.2721.30±0.7927.10±0.5531.50±1.32

由表1可見，給藥7、14 d后，給藥組小鼠和對照組小鼠體質量均持續增加，但給藥組小鼠給藥后7、14 d體質量與對照組同期比較差異無統計學意義(P>0.05)。

2.1.5 SMAF對小鼠進食量的影響 見表2。

表2 SMAF對小鼠進食量的影響

n給藥組(n=20)給藥前給藥后7d給藥后14d對照組(n=20)給藥前給藥后7d給藥后14d雌性105.39±0.045.60±0.095.41±0.045.40±0.095.68±0.115.88±0.09雄性106.31±0.106.37±0.105.97±0.076.13±0.706.24±0.146.16±0.09

由表2可見，給藥7、14 d后，給藥組雌雄小鼠進食量與對照組同期比較差異無統計學意義(P>0.05)。

2.2 大鼠急性毒性實驗

2.2.1 一般情況 給藥后14 d內，與對照組比較，給藥組大鼠活動、行為、眼瞼、分泌物、呼吸、腹形、排便等均無異常，未見因藥物引起的死亡。

2.2.2 死亡率及最大耐量 給藥后14 d內，與對照組比較，給藥組大鼠全部活存，提示最大耐受量>3.0 g/kg。

2.2.3 SMAF對大鼠體質量的影響 見表3。

表3 SMAF對大鼠體質量的影響

n給藥組(n=20)給藥前給藥后7d給藥后14d對照組(n=20)給藥前給藥后7d給藥后14d雌性10201.10±7.19233.20±4.42265.00±8.02199.50±3.17233.50±4.24269.20±5.60雄性10201.90±7.02245.70±3.62282.30±7.18200.30±6.69243.90±4.29277.20±4.51

由表3可見，給藥7、14 d后，給藥組大鼠和對照組大鼠體質量均持續增加，但給藥組大鼠給藥后7、14 d體質量與對照組同期比較差異無統計學意義(P>0.05)。

2.2.4 對大鼠進食量變化的影響 見表4。

表4 SMAF灌胃對大鼠進食量變化的影響 ±s

由表4可見，給藥7、14d后，給藥組雌雄大鼠進食量與對照組同期比較差異無統計學意義(P>0.05)。

2.2.5 大鼠主要臟器解剖肉眼觀察 給藥14 d后，大鼠過量麻醉處死，解剖，觀察心、肝、脾、肺、腎等主要臟器，與對照組比較，給藥組大鼠未見臟器明顯的腫大、萎縮、壞死、充血、出血、水腫等異常現象。

3 討 論

急性毒性實驗是在1 d內單次或多次對動物給藥后，在14 d內連續觀察動物所產生的毒性反應及死亡情況。如受試藥物引起動物死亡，應測定藥物毒性反應與劑量的關系，通常測定LD50；當受試藥物測不出LD50時，可以做1次或1 d內數次給藥的最大耐受量實驗來考察動物的急性毒性情況[13]。

四妙勇安湯作為中醫解毒活血代表方藥，用于治療脫疽(即血栓閉塞性脈管炎)已使用多年[14]，目前在冠狀動脈粥樣硬化、冠心病等疾病臨床應用廣泛，且療效顯著，均未見報道有明顯毒副反應[15]。SMAF是四妙勇安湯經過活性篩選后配伍獲得的活性配伍方，前期研究已表明SMAF具有抗動脈粥樣硬化炎癥反應、穩定斑塊等藥理作用[5-8]。本研究進行的大、小鼠急性毒性實驗中，采用可灌胃最大濃度和最大容積進行實驗，給藥期間，一般情況未見異常，給藥組大、小鼠狀態良好，均未見動物死亡；體質量及攝食量均未見與給藥相關的變化，提示該方藥的安全范圍大。因此，本研究大、小鼠的最大耐受量實驗結果表明，小鼠的最大耐受量>6.0 g/kg(相當于人日推薦量的360倍)，大鼠的最大耐受量>3.0 g/kg(相當于人日推薦量的180倍)，均未出現動物死亡，說明SMAF毒性很小或者無毒。為進一步開展其全面的毒理評價試驗奠定基礎，為臨床廣泛應用提供安全保證。

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(本文編輯：李珊珊)

The acute toxicity experimental study of Simiao-yongan decoction active fraction by intragastric administration

NIEBo*,XUBing,CHENLixin,etal.

*KeyLaboratoryofChineseInternalMedicineofMinistryofEducationandBeijing,DongzhimenHospitalofBeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100700

Objective To observe the acute toxicity of Simiao-yongan decoction active fraction (SMAF). Methods Through the pre-experiment, the half lethal dose of the animal was not obtained, and the maximum tolerance dose (MTD) test was carried out. 40 Kunming mice and 40 Wistar rats (half male and female ) were divided into medicine group (n=20) and control group (n=20), hale male and half female.The medicine group received a maximum concentration and the maximum volume, the mice received gavage in a dosage of 6.0g/kg and the rats received 3.0g/kg. The control group received 0.5% carboxymethocel at equal volume by gavage.The mice received gavage in a dosage of 6.0 g/kg and the rats received 3.0g/kg with a maximum concentration and the maximum volume. The behavior, body weight, eating volume and rate of death and toxic reaction within 14 days were observed in mice and rats, and the drug maximum tolerance dose (MTD) was calculated. Results 14 d after administration, as compared with control group, there were no abnormalities on activity, behavior, eyelid, excreta, breath, abdominal and defecation in administration group, and with no drug-induced death. There were no statistical differences on the body weight at 7 and 14 d after administration between administration and control group at the same period (P>0.05). There were no statistical differences on the eating volume at 7 and 14 d after administration between male and female mice and rats in administration and control group at the same period (P>0.05). The MTD of mice was greater than 6.0 g/kg (Equivalent to 360 times the amount recommended by the people) and the MTD of the rats was greater than 3.0 g/kg (Equivalent to 180 times the amount recommended by the people). Conclusion SMAF has no obvious toxicity by intragastric administration.

Simiao-yongan decoction; Acute toxicity test; Maximum tolerance dose; Rats; Wistar; Mice

10.3969/j.issn.1002-2619.2017.01.026

※ 項目來源：國家十一五科技重大專項(編號：2009ZX09103-318)

聶波(1977—)，女，副研究員，博士。研究方向：中藥藥理與中藥化學。

R994.21

A

1002-2619(2017)01-0100-04

2016-05-18)

△ 通訊作者：北京中醫藥大學東直門醫院腦病科，北京 100700

1 中國藏學研究中心北京藏醫院中醫科，北京 100029

2 世界中醫藥學會聯合會，北京 100029

3 中國人民解放軍軍事醫學科學院放射與輻射醫學研究所藥理室，北京 100850