HPLC法測(cè)定杏蘇散提取物中活性成分苦杏仁苷和迷迭香酸含量

時(shí)慶欣，張盛，王玄源(湖北中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖北 武漢 430065)

丁建中 (長(zhǎng)江大學(xué)醫(yī)學(xué)院，湖北 荊州 434023)

宋成武，蘇明武，黃榮增 (湖北中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖北 武漢 430065)

HPLC法測(cè)定杏蘇散提取物中活性成分苦杏仁苷和迷迭香酸含量

時(shí)慶欣，張盛，王玄源
(湖北中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖北 武漢 430065)

丁建中
(長(zhǎng)江大學(xué)醫(yī)學(xué)院，湖北 荊州 434023)

宋成武，蘇明武，黃榮增
(湖北中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖北 武漢 430065)

目的：采用反相高效液相色譜雙波長(zhǎng)法測(cè)定杏蘇散水提液中苦杏仁苷和迷迭香酸的含量。方法：采用色譜柱為HPLC反向C18色譜柱 (4.6mm×250mm, 5μm)梯度洗脫，雙波長(zhǎng)為λ1=222nm，λ2=330nm，流速為1.0mL/min，柱溫為30℃。結(jié)果：苦杏仁苷對(duì)照品線性關(guān)系良好，r=0.9999，回歸方程為Y=27.390X+0.0522，線性范圍為0.08～0.64μg；迷迭香酸對(duì)照品線性關(guān)系良好，r=0.9997，回歸方程為Y=26.141X+0.0905，線性范圍為0.04～0.32μg。苦杏仁苷平均加樣回收率為98.59%，RSD=1.6%(n=6)；苦杏仁苷平均加樣回收率為98.86%，RSD=2.1%(n=6)。結(jié)論：方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，為杏蘇散的質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)提供了一定的科學(xué)依據(jù)。

杏蘇散；苦杏仁苷；迷迭香酸；反相高效液相色譜法；雙波長(zhǎng)法

杏蘇散為我國(guó)經(jīng)典中藥復(fù)方，具有輕宣涼燥，理肺化痰之功效，主要用于治療上呼吸道感染、慢性支氣管炎。該方出自吳鞠通的《溫病條辨.中秋燥勝氣論》，其中苦杏仁和紫蘇為復(fù)方中的重要組成藥物[1]。苦杏仁苷和迷迭香酸分別是中藥苦杏仁和紫蘇葉中的指標(biāo)性活性成分，具有眾多藥理活性，包括抗氧化、抗炎、抗腫瘤、抗菌等藥效作用[2～4]。

雙波長(zhǎng)法和反相高效液相色譜法是中藥及其復(fù)方中有效成分質(zhì)量控制最為常用的方法[5～7]。因此，本研究利用該方法構(gòu)建杏蘇散水煎液中的兩種功效性成分(苦杏仁苷和迷迭香酸)的定量分析方法，進(jìn)一步為該復(fù)方制劑的質(zhì)量控制提供有效的分析檢測(cè)手段。

1 儀器與試劑

復(fù)方中所有藥材均購(gòu)自湖北清大中藥飲片有限責(zé)任公司，經(jīng)湖北中醫(yī)藥大學(xué)生藥教研室鑒定。迷迭香酸標(biāo)準(zhǔn)品和苦杏仁苷標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自中國(guó)藥品生物檢定所。HPLC設(shè)備為Dionex-P680型號(hào)高效液相色譜儀乙腈為色譜純，流動(dòng)相試劑甲醇、乙腈為色譜純(Fisher)、分析純甲酸購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)，色譜用純凈水自制。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品和樣品溶液的制備

1)杏蘇散水煎液 10倍量水煎煮提取3次，每次提取1h。過(guò)濾，合并濾液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮至一定體積，微孔濾膜(0.45μm)過(guò)濾，直接用于HPLC分析。

2)對(duì)照品溶液 精密稱(chēng)曲一定量標(biāo)準(zhǔn)品苦杏仁苷和迷迭香酸，分別制備濃度為80μg/mL和40μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，使用時(shí)按比例稀釋成不同濃度工作液。

3)陰性對(duì)照溶液 按照供試品溶液相同制備方法制備苦杏仁、紫蘇葉陰性對(duì)照溶液。

2.2 色譜條件

參照已發(fā)表文獻(xiàn)條件[8～12]，流動(dòng)相為乙腈-甲酸水；色譜柱：Aglient TC-C18柱 (4.6mm×250mm, 5μm) ；梯度條件為：0～30min，6%A；30～70min，27%A；70～80min，6%A；流速：1.0mL/min；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：λ1=222nm (0～40min)，λ2=330nm (40～70min)。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

圖1 對(duì)照品溶液色譜

取上述制備好的對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液各5μL，進(jìn)行HPLC分析。色譜圖見(jiàn)下圖1、2、3。

2.4 線性關(guān)系

用上述標(biāo)準(zhǔn)品溶液，加甲醇制備濃度為160μg/mL的苦杏仁苷對(duì)照品工作液，并分別精密吸1、2、4、6、8mL該溶液于10mL容量瓶中，定容搖勻，分別進(jìn)行HPLC分析(所有分析重復(fù)進(jìn)樣3次)。數(shù)據(jù)結(jié)果以色譜中峰面積平均值(Y)對(duì)苦杏仁苷進(jìn)樣量(X)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。制備迷迭香酸80μg/mL工作液，利用上述同樣方法HPLC進(jìn)樣分析，進(jìn)行線性關(guān)系考察。

圖2 杏蘇散水提液色譜圖 圖3 陰性對(duì)照溶液色譜圖

結(jié)果表明，苦杏仁苷在0.08～0.64μg(Y=27.390X+0.0522，r=0.9999)范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系；迷迭香酸在0.04～0.32μg(Y=26.141X+0.0905，r=0.9997)范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)

采用同樣HPLC分析方法，進(jìn)行6次杏蘇散水煎液分析(進(jìn)樣量為10μL)，結(jié)果RSD=0.2%，情況良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

采用同樣HPLC分析方法，于0、2、4、8、12、24h測(cè)定杏蘇散水提取液中苦杏仁苷和迷迭香酸的峰面積，計(jì)算RSD=0.6%，說(shuō)明樣品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定情況良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

采用同樣HPLC分析方法，對(duì)樣品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次分析，計(jì)算后得到的苦杏仁苷含量為0.8219mg/g(RSD=1.5%)；迷迭香酸含量為0.4211mg/g(1.5%)。

2.8 加樣回收試驗(yàn)

取上述2.7中的樣品溶液，分別精密加入一定量的苦杏仁苷和迷迭香酸對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液，采用同樣HPLC分析方法。結(jié)果見(jiàn)表1、表2。

表1 杏蘇散水煎液中苦杏仁苷的加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表2 杏蘇散水煎液中迷迭香酸的加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.9 含量測(cè)定

按杏蘇散制備工藝制備3批樣品，按上述HPLC分析方法，利用外標(biāo)法測(cè)定杏蘇散水煎液中苦杏仁苷和迷迭香酸的含量，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 杏蘇散水煎液中苦杏仁苷和迷迭香酸的含量結(jié)果

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)對(duì)杏蘇散中苦杏仁苷和迷迭香酸的測(cè)量波長(zhǎng)進(jìn)行了考察，結(jié)果表明當(dāng)波長(zhǎng)λ1=222nm，λ2=330nm，基線平整，噪音較小。本實(shí)驗(yàn)所建立的雙波長(zhǎng)-HPLC法測(cè)定杏蘇散中苦杏仁苷和迷迭香酸含量的分析方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、有效。為該中藥經(jīng)典復(fù)方的質(zhì)量控制分析方法奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。同時(shí)，該方法可為在其它中藥及中藥復(fù)方中測(cè)定苦杏仁苷和迷迭香酸含量的研究中提供經(jīng)驗(yàn)借鑒。

[1]朱虹, 王燦暉.杏蘇散組方意義探討[J].安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 2005, 24(2):3～5.

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[12] 黃亮輝, 蘇琪, 趙婷婷,等.白蘇子和紫蘇子生品及其炮制品中迷迭香酸的含量測(cè)定[J].中藥材, 2010, 33(12):1856～1858.

[編輯] 一凡

2016-12-20

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81173147)。

時(shí)慶欣(1993-)，男，碩士生，主要從事藥物分析方法的研究與設(shè)計(jì)；通信作者：黃榮增，hrz0909@163.com。

R917

A

1673-1409(2017)04-0001-03

[引著格式]時(shí)慶欣，張盛，王玄源，等.HPLC法測(cè)定杏蘇散提取物中活性成分苦杏仁苷和迷迭香酸含量[J].長(zhǎng)江大學(xué)學(xué)報(bào)(自科版)，2017，14(4)：1～3.