大容山野生香菇分離培養(yǎng)試驗

吳章榮 陳德榮 盧玉文 秦延春 丘獻娟 韋錦福

（玉林市微生物研究所，廣西玉林53700）

大容山位于廣西東南部，是桂東南最高峰，屬熱帶季風氣候，山高林密，原始森林面積廣闊，具有豐富的野生食用菌資源。研究從大容山采集到香菇（圖1）并進行分離馴化試驗，希望獲得適合當?shù)卦耘嗟膬?yōu)良香菇新品種。試驗分別從菌蓋處菌柄與菌蓋處取組織培養(yǎng)塊進行分離培養(yǎng)，對比分離的效果；分別運用5 種不同培養(yǎng)基配方，7 種不同的pH，以及不同溫度范圍進行培養(yǎng)試驗?，F(xiàn)將試驗結(jié)果總結(jié)如下。

圖1 大容山野生香菇

1 材料和方法

1.1 供試材料從大容山上采得的新鮮野生香菇子實體。經(jīng)過分離純化后獲得菌株。

1.2 不同部位子實體分離試驗選擇生長健壯、朵形正常、無病蟲、菌膜未破的野生香菇子實體。取材按菌蓋、菌柄與菌蓋交界處兩個部位進行分離，培養(yǎng)基為PDA 加富培養(yǎng)基，常規(guī)方法制作，置于生化培養(yǎng)箱25℃培養(yǎng)。

1.3 供試母種培養(yǎng)基配方試驗設計五個配方:配方①馬鈴薯100 g，葡萄糖10 g，瓊脂8.3 g；配方②馬鈴薯100 g，葡萄糖10 g，瓊脂8.3 g，硫酸鎂2 g，磷酸二氫鉀2 g；配方③馬鈴薯100 g，葡萄糖10 g，瓊脂8.3 g，硫酸鎂2 g，磷酸二氫鉀2 g，蛋白胨2 g；配方④馬鈴薯100 g，葡萄糖10 g，瓊脂8.3 g，硫酸鎂2 g，磷酸二氫鉀2 g，蛋白胨4 g；配方⑤馬鈴薯100 g，葡萄糖10 g，瓊脂8.3 g，硫酸鎂2 g，磷酸二氫鉀2 g，麩皮10 g。

將大容山野生香菇母種，取菌齡相同0.5 cm 大小的活化菌絲塊分別接入試管斜面中，每個配方接7 支試管斜面，25℃生化培養(yǎng)箱內(nèi)恒溫培養(yǎng)。接種培養(yǎng)10 d后測量菌絲生長速度，觀察菌絲形態(tài)。

1.4 pH 梯度試驗試驗所用的培養(yǎng)基為PDA加富培養(yǎng)基配方③。設置7 個pH 為pH4、pH5、pH6、pH7、pH8、pH9、pH10。將分離大容山野生香菇母種擴大培養(yǎng)，取菌齡相同0.5 cm 大小的接種塊接入上述試管斜面中，每個pH 處理接6 支試管，3 個重復。置25℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)，接種培養(yǎng)10 d 后測量菌絲生長速度，觀察菌絲形態(tài)特征等。

1.5 菌絲培養(yǎng)溫度試驗擴大培養(yǎng)培養(yǎng)基為PDA加富培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度設10℃、15℃、20℃、25℃，每個溫度處理培養(yǎng)7支試管。接種培養(yǎng)后10 d測量生長速度，觀察菌絲形態(tài)特征等。

2 結(jié)果與分析

2.1 大容山野生香菇菌絲不同組織分離培養(yǎng)結(jié)果試驗結(jié)果，用菌柄與菌蓋交界處組織塊分離效果比較好，分離成功率達85%。原因是柄與菌蓋交界處組織細胞生長活力較強，菌肉肥厚，與外界環(huán)境接觸少，不容易受細菌、霉菌感染（表1）。

表1 不同組織分離培養(yǎng)結(jié)果

2.2 不同母種培養(yǎng)基培養(yǎng)菌絲結(jié)果從表2、圖2可知，菌絲生長最好的培養(yǎng)基是配方④，菌絲粗壯，濃密、爬壁力強，生長速度最快；其次為配方②，菌絲生長最差是配方⑤，菌絲較稀疏纖細。菌絲長勢從好到差依次為配方④、配方②、配方①、配方③、配方⑤。配方④加入4 g 蛋白胨，含氮量豐富，因此菌絲生長最好。

表2 供試母種培養(yǎng)基上菌絲生長情況

圖2 配方④培養(yǎng)母種

2.3 培養(yǎng)基pH 試驗結(jié)果試驗結(jié)果表明:當培養(yǎng)基pH 為5 時菌絲生長最好，表現(xiàn)為菌絲粗壯濃密、潔白尖端整齊、爬壁力強；其次為pH4，菌絲除爬壁力比pH5 稍弱，其它各項指標與pH5 基本差不多；pH6、pH7、pH8菌絲總體長勢差不多，但與pH5相比稍差，pH9、pH10 長勢基本一致，但比其他各pH 培養(yǎng)基差。由此可見大容山野生香菇母種菌絲在偏酸性培養(yǎng)基上生長較好，偏堿性培養(yǎng)基稍差，其中最適宜的pH為5（表3）。

2.4 菌絲培養(yǎng)溫度試驗結(jié)果由表4 可見，大容山野生香菇菌絲在25℃培養(yǎng)長勢最好，白色、濃密、粗壯、尖端整齊、爬壁力強、生長速度最快。其次為20℃培養(yǎng)，白色、濃密、較粗壯、爬壁力強、生長速度較快。第三為15℃培養(yǎng)，白色、濃密、較粗壯、整齊、爬壁力較弱、生長速度一般。培養(yǎng)溫度10℃，生長速度最慢，菌絲灰白，較濃，較細、尖端較整齊，爬壁力弱。

表3 不同pH培養(yǎng)基菌絲生長情況

表4 不同培養(yǎng)溫度對菌絲生長的影響

3 小結(jié)與討論

通過對大容山野生香菇的分離培養(yǎng)試驗，結(jié)果得出大容山野生香菇分離母種時從菌柄與菌蓋交接處挑取組織塊成功率最高，組織塊萌發(fā)快；母種的培養(yǎng)溫度為25℃時菌絲生長最快長勢最好。培養(yǎng)基pH4～pH10 菌絲均可生長，偏酸性比偏堿性菌絲生長好，以培養(yǎng)基pH5 為最佳。大容山野生香菇最適母種培養(yǎng)基:馬鈴薯100 g，葡萄糖10 g，瓊脂8.3 g，硫酸鎂2 g，磷酸二氫鉀2 g，蛋白胨4 g。

大容山為廣西桂東南最高峰，山高林密，云霧繚繞，山水清轍，森林茂密，生物資源豐富，生態(tài)環(huán)境質(zhì)量良好。生長其中香菇肉質(zhì)特別脆嫩，味道特別鮮美，香氣特別濃郁，今后應對大容山野生香菇人工栽培進一步研究。