肝癌高發家族成員血清IL-23水平變化

李慧，吳繼周，吳健林，寧秋悅，胡蝶飛，劉若時

(廣西醫科大學第一附屬醫院，南寧530021)

·臨床研究·

肝癌高發家族成員血清IL-23水平變化

李慧，吳繼周，吳健林，寧秋悅，胡蝶飛，劉若時

(廣西醫科大學第一附屬醫院，南寧530021)

目的觀察肝癌高發家族成員血清白細胞介素23(IL-23)水平變化，并探討其臨床意義。方法在廣西肝癌高發區選取肝癌高發家族成員103例為觀察組，以生活環境、性別、民族、HBV攜帶狀況、年齡作為配對條件選取無癌家族成員103例為對照組。采用ELISA法檢測兩組受檢者血清IL-23。結果觀察組、對照組血清IL-23水平分別為3.980(2.350，9.504)、3.548(2.087，7.925)ng/mL，兩組相比，P<0.05。觀察組女性、HBsAg陽性、年齡≤25歲、壯族成員血清IL-23水平均高于對照組(P均<0.05)。觀察組中先證者三級及以上親屬血清IL-23水平高于先證者一級親屬、二級親屬(P均<0.05)。觀察組中家族有2～3個先證者、4個以上先證者血清IL-23水平相比，P>0.05。結論肝癌高發家族成員血清IL-23水平高于無癌家族成員。

白細胞介素23；肝細胞肝癌；家族聚集性

原發性肝細胞肝癌(簡稱肝癌)是全球最常見的惡性腫瘤之一，具有侵襲性強、病死率高、生存率低等特點。中國是肝癌大國，相關流行病學調查資料顯示，中國肝癌高發地區主要為江蘇、福建、浙江、山東、廣西、廣東等東南沿海一帶[1～3]。前期本課題組前往廣西少數民族居住地深入調查發現，在某些村子，同一個家族中可有數名成員罹患肝癌。肝癌發病呈現明顯的家族聚集性。目前相關研究表明，肝臟免疫微環境的變化參與腫瘤的發生及發展過程。白細胞介素23(IL-23)是肝臟免疫微環境中的重要細胞因子。本研究觀察了肝癌高發家族成員血清IL-23水平變化，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇103例肝癌高發家族成員為觀察組，其中男61例、女42例。年齡2～78(27.1±10.4)歲，年齡≤25歲53例、>25歲50例。壯族74例、瑤族29例。HBsAg陽性25例、陰性78例。均來自廣西肝癌高發地，未患肝癌，HCV抗體均為陰性。來自15個肝癌高發家族，每個家族中有兩例或兩例以上成員有肝癌病史。包含肝癌高發家族中先證者的一級親屬(父母、子女、兄弟姐妹)56例，二級親屬(叔伯、姑舅、姨、祖父母、外祖父母)16例，三級及以上親屬(表兄妹、堂兄妹等)31例；家族成員中有2～3個先證者46例，家族成員中有4個以上先證者57例。另根據生活環境相同、水源相同、性別相同、民族相同、HBV攜帶狀況相同、年齡±5歲的配對原則納入103例無癌家族成員為對照組。

1.2 血清IL-23檢測方法 抽取兩組受試者空腹外周靜脈血3 mL于肝素鈉抗凝管中。室溫靜置1 h后，3 000 r/min常溫離心5 min分離血清，用移液槍抽取上清液20 mL置入EP管內進行分裝、標序號，放入-80 ℃低溫冰箱中保存待測。采用ELISA法檢測血清IL-23，試劑盒購自上海酶聯生物科技有限公司，嚴格按照試劑盒說明書操作。

1.3 統計學方法 采用SPSS17.0統計軟件。先對各組血清IL-23數據行正態性檢驗，不符合正態分布的數據用中位數和四分位數[M(P25，P75)]表示。配對資料比較采用配對設計Wilcoxon秩和檢驗，非配對資料比較采用獨立樣本Mann-WhitneyU秩和檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

觀察組、對照組血清IL-23水平分別為3.980(2.350，9.504)、3.548(2.087，7.925)ng/mL,兩組相比，P<0.05。觀察組、對照組男性成員血清IL-23水平分別為3.428(2.086，8.086)、3.919(2.391，8.374)ng/mL，兩組男性成員血清IL-23水平相比，P>0.05。觀察組、對照組女性成員血清IL-23水平分別為5.775(2.759，11.401)、3.110(1.865，6.383)ng/mL，兩組女性成員血清IL-23水平相比，P<0.05。觀察組、對照組HBsAg陽性成員血清IL-23水平分別為4.265(2.702,8.313)、3.251(2.481,6.202)ng/mL，兩組HBsAg陽性成員血清IL-23水平相比，P<0.05。觀察組、對照組HBsAg陰性成員血清IL-23水平分別為3.945(2.209,10.942)、3.712(1.903,8.681)ng/mL，兩組HBsAg陰性成員血清IL-23水平相比，P>0.05。觀察組、對照組年齡>25歲成員血清IL-23水平分別為3.372(2.130,9.181)、3.203(1.852,7.468)ng/mL，兩組年齡>25歲成員血清IL-23水平相比，P>0.05。觀察組、對照組年齡≤25歲成員血清IL-23水平分別為4.715(2.847,11.183)、4.118(2.491,8.374)ng/mL，兩組年齡≤25歲成員血清IL-23水平相比，P<0.05。觀察組、對照組壯族成員血清IL-23水平分別為4.403(2.185,9.563)、3.426(1.878,8.243)ng/mL，兩組壯族成員血清IL-23水平相比，P<0.05。觀察組、對照組瑤族成員血清IL-23水平分別為3.827(2.807,10.414)、4.118(2.447,7.028)ng/mL，兩組瑤族成員血清IL-23水平相比，P>0.05。

觀察組中先證者一級親屬、二級親屬、三級及以上親屬血清IL-23水平分別為3.980(2.350,9.504)、3.436(2.132,14.073)、6.896(3.315,13.510)ng/mL。觀察組中先證者三級及以上親屬血清IL-23水平與先證者一級親屬、二級親屬相比，P均<0.05；先證者一級親屬血清IL-23水平與先證者二級親屬相比，P>0.05。

觀察組中家族有2～3個先證者、4個以上先證者血清IL-23水平分別為3.642(2.353 ,6.757)、5.587(2.281，11.183)ng/mL，P>0.05。

3 討論

Oppmann等[4]在搜索IL-6家族序列數據庫時發現了一個類似于IL-12的p35亞基的新序列，并命名為p19。p19本身無活性，但與IL-12的p40亞基通過二硫鍵連接后可結合形成具有生物活性的異源二聚體，即IL-23。IL-23是IL-12家族中的一員，主要由活化的巨噬細胞、樹突狀細胞及單核細胞分泌。近年來多項研究發現IL-23在腫瘤免疫、炎癥反應、感染及自身免疫性疾病過程中發揮生物學效應，尤其在腫瘤免疫微環境中是一種重要的中介和調節器。有研究表明IL-23在結直腸癌[5]、黑色素瘤[6]、乳腺癌[7]和纖維肉瘤[8]中起到了抑制腫瘤生長和轉移的作用。但Langowski等[9]對人類不同類型腫瘤組織中IL-23 p19 mRNA的表達情況進行了全面檢測，發現與正常組織相比，p19 mRNA在不同器官腫瘤組織樣本中的表達量均顯著上調，且其表達定位于腫瘤組織中，提示IL-23具有潛在的促腫瘤效應。Ghilardi等[10]在對IL-23 p19缺失及IL-23 p40-/-小鼠的研究中證明IL-23可通過抑制殺傷性T細胞浸潤來促進腫瘤的發生。Jantschischi等[11]也發現暴露于紫外線下的IL-23 p19-/-的小鼠與野生小鼠相比，更易發生腫瘤。劉永浩等[12]報道IL-23能顯著促進肝癌細胞的增殖，IL-23在體內外均能直接促進肝癌的發展。由此充分說明，IL-23具有促進腫瘤生長的效應，并且與肝細胞肝癌的發生、發展有著密切的關系，但其與肝癌家族聚集性是否存在一定的相關性，國內外均沒有相關報道。

CD4+T細胞對腫瘤的免疫應答起著重要的輔助作用，可分為不同亞型，如Th1、Th2、Th17及調節性T細胞(Treg)；其中Th17/Treg失衡與肝癌的發生發展密切相關[13]，且Th17占比越高，肝癌的惡性程度也越大[14]。IL-17由Th17細胞分泌，且IL-17的升高與乙肝患者從慢性乙肝到肝纖維化的進展有關[15]。Langrish等[16]研究發現IL-23可通過與受體IL-23R結合來誘導T細胞分化為Th17細胞，繼而分泌IL-17。鄭慧麗等[17]證明只有當IL-23與啟動因子TGF-β同時存在時才能進一步使CD4+T細胞分化為Th17細胞，并分泌IL-17。進一步說明了IL-23可通過增強和刺激Th17細胞分泌IL-17來促進肝癌的發生。本研究結果顯示，肝癌高發家族組中未患肝癌成員的IL-23表達水平高于無癌家族組，提示處于肝癌高發家族無癌成員血清中IL-23水平已升高，據此推測在癌變發生前，肝癌高發家族成員的免疫狀態發生了微弱變化，Th17與Treg的平衡被打破，增加了罹患肝癌的風險。分層比較中還發現IL-23表達水平升高者以女性、年齡≤25歲、壯族成員為主。這提示肝癌高發家族組中女性、年齡≤25歲、壯族成員血清中IL-23變化相對顯著。壯族成員IL-23明顯升高符合廣西壯族人群肝癌發病率較高的研究結論[18]，不過也可能是由于本次研究中壯族成員樣本量偏大所致，還需進一步研究。

HBV感染是促使肝癌發生的重要危險因素[19]。本研究結果顯示，肝癌高發家族中HBsAg陽性成員血清IL-23的表達水平高于無癌家族，兩組HBsAg陰性成員血清IL-23水平差異無統計學意義，提示感染HBV的成員體內Th17/Treg已出現失衡，機體的免疫微環境穩態遭到破壞；但HBV感染和Th17/Treg失衡的先后、因果關系并不清楚，究竟是HBV感染后出現機體免疫失衡，還是免疫平衡紊亂致使機體更易受到HBV感染，還需深入研究。

此外，我們將肝癌高發家族組中不同親屬級別成員的IL-23水平進行兩兩比較，得出先證者三級及以上親屬血清IL-23水平顯著高于一、二級親屬血清IL-23水平，但可能由于二級親屬樣本量偏少，一級親屬與二級親屬血清IL-23水平無統計學差異。同時，肝癌高發家族中伴隨著先證者例數的增加，血清IL-23水平有所升高，但差異無統計學意義。因此，我們推測肝癌高發家族出現家族聚集性，可能與遺傳因素和先證者例數無關，需擴大樣本量或延伸至基因層面進行更深一步的研究。

綜上所述，肝癌高發家族成員血清IL-23水平高于無癌家族，提示IL-23與肝癌高發家族聚集性存在著一定的相關性。推測在肝癌高發家族中，無癌成員的免疫系統已經在癌前發生了微弱的變化，但具體的免疫系統調節機制還需進一步研究與討論。

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10.3969/j.issn.1002-266X.2017.39.012

R735.7

B

1002-266X(2017)39-0042-03

國家自然科學基金資助項目(30960170)；廣西高等學校重點資助科研項目(桂教201202ZD021)。

吳繼周(E-mail： wjz925@163.com)

2017-05-31)