果蠅EZH2與乳腺癌分子分型及臨床病理特征的關系*

李杰寶，喻曉程，田野

（湖北省武漢市第一醫院，湖北 武漢 430000）

果蠅EZH2與乳腺癌分子分型及臨床病理特征的關系*

李杰寶，喻曉程，田野

（湖北省武漢市第一醫院，湖北 武漢 430000）

目的探討果蠅Zeste基因增強子人類同源物2（EZH2）與乳腺癌分子分型及臨床病理參數的關系。方法 根據新型乳腺癌分子分型標準，將乳腺癌進行分子分型；免疫組織化學方法檢測乳腺癌組織石蠟切片中EZH2的表達；采用χ2檢驗分析EZH2表達與乳腺癌新型分子分型，以及臨床病理參數之間的關系；采用Kaplan-Meier法分析EZH2表達與乳腺癌患者無病生存率（DFS）的關系。結果 13例管腔上皮A型乳腺癌患者中，3例為EZH2高表達（23.08%）；10例管腔上皮B型乳腺癌患者中，5例為EZH2高表達（50.00%）；7例人表皮生長因子受體2過表達型乳腺癌患者中，3例為EZH2高表達（42.86%）；12例三陰性型乳腺癌患者中，10例為EZH2高表達（83.33%）。乳腺癌各分子亞型間EZH2表達的比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。EZH2高表達與EZH2低表達患者DFS比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。結論 EZH2可能是預測乳腺癌預后的指標之一。

果蠅Zeste基因增強子人類同源物2；乳腺癌；分子分型；免疫組織化學

乳腺癌是女性高發的惡性腫瘤之一，其具有高度異質性且近年來的發病率呈現逐年遞增的趨勢，但其發病機制尚未完全闡明[1]。新型乳腺癌分子分型根據乳腺癌患者腫瘤組織中的雌激素受體（estrogen receptor，ER）、孕激素受體（progesterone receptor，PR）、人表皮生長因子受體2（human epidermal growth factor receptor-2，HER-2）和Ki67的表達差異，將乳腺癌分為管腔上皮A型、管腔上皮B型、Her-2過表達型和三陰性型[2-3]。果蠅Zeste基因增強子人類同源物 2（enhancer of zeste homolog 2，EZH2）是果蠅Enhancer of zeste基因的人類同源基因，作為多梳基因（polycoml group genes，PcG）家族的重要成員之一，其參與細胞分化，并與多種腫瘤的發生、發展密切相關[4-5]。本研究根據新型乳腺癌分子分型將42例患者分為管腔上皮A型、管腔上皮B型、Her-2過表達型和三陰性型，采用免疫組織化學方法檢測各分型乳腺癌組織石蠟切片中EZH2的表達，以探討EZH2與乳腺癌分子分型及臨床病理參數的關系。

1 資料與方法

1.1 乳腺癌石蠟標本收集

選取2004年5月-2008年10月在華中科技大學附屬醫院確診為乳腺癌并行手術治療的女性乳腺癌患者42例，其臨床、病理和隨訪資料完整，切除的乳腺癌石蠟標本保存完好。實驗所需兔抗人EZH2多克隆抗體購自美國GeneTex公司，鼠抗人Ki67單克隆抗體（即用型）、抗體稀釋液和生物素標記二抗購自武漢博士德生物工程有限公司。

1.2 免疫組織化學法

將每例患者手術切除的乳腺癌組織石蠟樣本分別連續切片5張，其中1張進行常規蘇木精-伊紅染色法染色，觀察乳腺癌的形態學；2張用于免疫組織化學法染色，觀察EZH2在乳腺癌組織、細胞中的表達情況；另2張備用。

1.3 免疫組織化學法染色結果判斷

EZH2的免疫組織化學法結果主要為核染色，分別由2名不知道切片病理診斷結果的觀察者判斷切片的EZH2染色情況，無細胞核染色計1分，細胞核染色＜25%計2分，細胞核染色在25%～75%計3分，細胞核染色＞75%計4分[6]。3～4分為EZH2高表達，1～2分為EZH2低表達。

Ki67的免疫組織化學法結果為細胞核呈棕褐色著色。分別由2位不知道切片病理診斷結果的觀察者判斷切片的Ki67染色情況。隨機選取高倍鏡下10個視野，計數每個視野中100個細胞中陽性表達的百分比，最后取10個高倍鏡視野百分數的平均值。

新型乳腺癌分子分型：ER+和/或PR+，Her-2-，Ki67＜14%為管腔上皮A型；ER+和/或PR+，Her-2+ 或ER+和/或PR+，Her-2-，Ki67≥14%為管腔上皮B型；ER-，PR-，Her-2+為Her-2過表達型；ER-，PR-，Her-2-為三陰性型。

1.4 統計學方法

數據分析采用SPSS 17.0統計軟件，計數資料以率（%）表示，用χ2檢驗；兩組生存率的比較采用Log-rank χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 免疫組織化學染色法結果

42例乳腺癌患者中，13例為管腔上皮A型（30.95%）；10例為管腔上皮B型（23.81%）；7例為Her-2過表達型（16.67%）；12例為三陰性型（28.57%）。在42例乳腺癌患者中，21例為EZH2高表達（50.00%）。

2.2 EZH2表達與乳腺癌分子分型的關系

13例管腔上皮 A型乳腺癌患者中，3例為EZH2高表達（23.08%）；10例管腔上皮B型乳腺癌患者中，5例為EZH2高表達（50.00%）；7例Her-2過表達型乳腺癌患者中，3例為EZH2高表達（42.86%）；12例三陰性型乳腺癌患者中，10例為EZH2高表達（83.33%）。乳腺癌各分子亞型間EZH2的表達比較，差異有統計學意義（χ2=9.240，P=0.020）。

2.3 EZH2表達與乳腺癌臨床病理特征的關系

EZH2表達在患者年齡及患者絕經狀態之間比較，差異無統計學意義（P＞0.05）；EZH2表達的高低在腫瘤大小、淋巴結是否轉移及術后分期之間比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。與EZH2低表達的乳腺癌患者比較，EZH2高表達的乳腺癌患者腫瘤生長速度較快、發生淋巴結轉移的概率較大、術后分期較晚。見附表。

2.4 EZH2表達與乳腺癌預后的關系

42例乳腺癌患者隨訪＞5年，21例EZH2高表達的乳腺癌患者中，有6例死亡，2例發生復發和轉移；21例EZH2低表達的乳腺癌患者中，有2例死亡，1例發生復發和轉移。采用Kaplan-Meier法對42例乳腺癌患者進行生存分析，對EZH2高表達和EZH2低表達患者的無病生存率（disease free survival，DFS）進行Log-rank檢驗，差異有統計學意義（χ2=7.041，P=0.008）。見附圖。

附表 乳腺癌患者臨床病理特征與EZH2高表達的關系例（%）

附圖 不同EZH2表達水平乳腺癌患者的DFS生存曲線

3 討論

乳腺癌是一種嚴重威脅女性健康的惡性腫瘤，具有高度異質性以及較高的發生率，且其發病機制尚未完全闡明，已成為近年來的研究熱點[7]。GOLDHIRSCH等[3]確立新型的乳腺癌分子分型，根據乳腺癌患者腫瘤組織中的ER、PR、HER-2和Ki67的表達差異，將乳腺癌分為管腔上皮A型、管腔上皮B型、Her-2過表達型和三陰性型。劉佳等[8]通過檢測80例乳腺癌組織中ER、PR、HER-2、CK5/6、CK14、EGFR以及EZH2蛋白的表達，將乳腺癌分為腔型、HER-2（+）型、基底細胞樣型和正常乳腺樣型，其所占比例分別為61.25%、10.00%、25.00% 和3.75%，其中管腔上皮型在各分子亞型中的比例最高。WIECHMANN等[9]的研究中，管腔上皮型在乳腺癌各分子亞型中所占的比例最高且預后相對較好。本研究根據ST.Gallen的新型乳腺癌分子分型標準，將42例乳腺癌患者分為管腔上皮A型（30.95%）、管腔上皮B型（23.81%）、Her-2過表達型（16.67%）和三陰性型（28.57%）。其中由A型和B型組成的管腔上皮型所占比例最高，為53.76%，該結果與其他研究一致。

EZH2是果蠅Enhancer of zeste基因的人類同源基因，作為PcG基因家族的重要成員之一，其參與細胞分化，并與多種腫瘤的發生、發展密切相關[4]。EZH2是一種轉錄阻遏因子，其高表達可抑制腫瘤細胞的凋亡，與腫瘤的發生與轉移密切相關[10]。RAAPHORST等[11]研究EZH2基因在正常乳腺組織、癌前病變乳腺組織及浸潤性乳腺癌組織中的表達差異，結果顯示EZH2在正常乳腺組織中無表達，而在乳腺癌組織中的表達明顯高于癌前病變乳腺組織。姚凡等[12]通過對105例乳腺癌患者腫瘤組織的檢測發現，其中69.50%乳腺癌組織中出現EZH2陽性表達，且EZH2表達與乳腺癌患者的年齡、腫瘤大小、術后分期、PR表達及c-erbB-2表達等無相關性。徐靜等[13]對82例乳腺癌患者的研究表明，出現EZH2陽性表達的乳腺癌患者高達51.20%，EZH2陽性表達患者的組織分化較差、腫瘤直徑較大且更容易發生淋巴結轉移。本研究旨在探討EZH2表達高低與乳腺癌分子分型及臨床病理特征的關系，結果表明在12例三陰性型患者中，EZH2高表達者 10例（83.33%），腫瘤大小、淋巴結是否轉移及不同術后分期EZH2高表達例數比較，差異有統計學意義，提示EZH2表達可能與乳腺癌的病情程度相關，病情越嚴重，EZH2高表達的可能性越大。且EZH2高表達的乳腺癌患者腫瘤生長速度較快、發生淋巴結轉移的概率較大、術后分期較晚，表明EZH2高表達可能會加快患者的病情發展，與其他研究結果一致。

已有研究表明，EZH2高表達患者比低表達患者的無病生存率更低，差異有統計學意義，EZH2高表達患者比低表達患者的預后更差，其發生復發轉移的概率更高[14]。本研究對42例乳腺癌患者隨訪≥5年，統計發現，21例EZH2高表達的乳腺癌患者中，有6例死亡，2例發生復發和轉移；21例EZH2低表達的乳腺癌患者中，有2例死亡，1例發生復發和轉移。表明EZH2高表達患者比低表達患者更易發生復發轉移，其與之前的研究報道一致。

綜上所述，EZH2高表達多發生在病情更為嚴重的三陰性型乳腺癌患者中，EZH2表達的高低在腫瘤大小、淋巴結是否轉移及術后分期之間比較，差異有統計學意義，且EZH2高表達的乳腺癌患者往往預后不良，總生存率較低。因此，EZH2可能是預測乳腺癌病情以及乳腺癌預后的指標之一。

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[12]姚凡,劉崇,房月,等.EZH2在乳腺癌中的表達及其臨床意義[J].中國微生態學雜志,2013,25：143-146.

[13]徐靜,劉麗麗,趙瑞霞,等.EZH2與乳腺癌及三陰性乳腺癌相關性的研究[J].中華腫瘤防治雜志,2010,17(24)：2026-2029.

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（李科編輯）

Correlations of enhancer ofDrosophilazeste homolog 2 with molecular subtypes and clinicopathological parameters of breast cancer*

Jie-bao Li,Xiao-cheng Yu,Ye Tian
(The First Hospital of Wuhan,Wuhan,Hubei 430000,China)

ObjectiveTo investigate the correlations of enhancer ofDrosophilazeste homolog 2(EZH2) with molecular subtypes and clinicopathological parameters of breast cancer.Methods The breast cancers were classified into several molecular subtypes,according to the new standard of molecular classification of breast cancer.The expression ofEZH2 in paraffin sections ofbreastcancer tissues was tested through immunohistochemistry method.The correlations of EZH2 with clinicopathological parameters and new molecular subtypes of breast cancers were analyzed and compared through Chi-square test.The correlation between EZH2 and disease-free survival of the breast cancer patients was analyzed through Kaplan-Meier method. Results In the 13 cases of Luminal A subtype,3 cases had high EZH2 expression(23.08%).In the 10 cases of Luminal B subtype,5 cases had high EZH2 expression(50.00%).In the 7 cases of Her-2 over-expression subtype,there were 3 cases of high EZH2 expression(42.86%).In the 12 cases of triple-negative breast cancer subtype,there were 10 cases of high EZH2 expression (83.33%).Significant differences existed in the expression of EZH2 among the four groups of molecular subtypes of breast cancer(P＜0.05).There was significantdifferencein the disease-freesurvivalbetween the breastcancerpatientswith high EZH2 expression and those with low EZH2 expression(P＜0.05).Conclusions EZH2 might be one of the indexes to predict the prognosis of breast cancer.

enhancer of Drosophila zeste homolog 2;breast cancer;molecular subtype;immunohistochemistry

R737.9

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.06.010

1005-8982（2017）06-0050-04

2016-08-09

湖北省2015年武漢市衛計委臨床醫學課題（No：WX15B17）