口腔癌患者外周血細胞免疫水平與臨床結局的相關性分析

孟智堅，郭立娜

口腔癌患者外周血細胞免疫水平與臨床結局的相關性分析

孟智堅，郭立娜

目的 探討口腔癌患者外周血細胞免疫水平與臨床結局的相關性。方法 選取2014年1月—2015年1月我院收治的口腔癌50例(口腔癌組)，選擇同期體檢健康的50例(對照組)。比較兩組外周血淋巴細胞(CD3+、CD4+、CD8+、CD19+)和自然殺傷(natural killer, NK)細胞的水平，分析口腔癌患者外周血淋巴細胞(CD3+、CD4+、CD8+、CD19+)、NK細胞與其臨床特征的相關性。結果 與對照組比較，口腔癌組CD3+及CD4+T淋巴細胞、CD4+/CD8+和NK細胞顯著降低(P<0.05)，CD19+T淋巴細胞顯著升高 (P=0.000)，CD8+T淋巴細胞降低不明顯(P>0.05)。與Ⅲ～Ⅳ期口腔癌患者比較，Ⅰ～Ⅱ期患者的CD3+、CD4+及CD8+T淋巴細胞、CD4+/CD8+和NK細胞顯著升高(P<0.05)，CD19+T淋巴細胞顯著降低(P=0.000)。與無淋巴結轉移的患者比較，出現淋巴結轉移的患者CD3+、CD4+及CD8+T淋巴細胞和NK細胞顯著降低(P<0.05)，CD19+T淋巴細胞顯著升高(P=0.000)，CD4+/CD8+降低不明顯(P>0.05)。與無復發患者比較，術后復發者CD3+、CD4+及CD8+T淋巴細胞、CD4+/CD8+和NK細胞顯著降低(P<0.05)，CD19+T淋巴細胞顯著升高(P=0.000)。結論 口腔癌患者存在一定程度的免疫抑制，且外周血細胞免疫水平與其預后密切相關。

口腔腫瘤；免疫，細胞；T淋巴細胞

近年來隨著環境的污染和人類生活習慣的改變，口腔癌的發病率逐年升高[1]。研究顯示惡性腫瘤患者常伴有不同程度的免疫功能障礙[2-3]，其中外周血細胞免疫功能障礙較常見。T淋巴細胞和自然殺傷 (natural killer, NK)細胞是外周免疫系統的重要組成成分，在免疫介導的抗腫瘤反應中發揮關鍵性作用[4-5]。文獻報道腫瘤患者存在一定程度的輔助性T細胞(Th)1/Th2平衡失調，其可進一步促進腫瘤細胞的增殖和轉移，故腫瘤患者免疫功能低下時常伴病情惡化[6-7]。因此，探討口腔癌患者的細胞免疫功能具有十分重要的臨床意義，可為進一步的臨床干預提供理論依據，但國內相關研究較少。本文探討口腔癌患者外周血細胞免疫水平與臨床結局的相關性，現將結果報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2014年1月—2015年1月收治的口腔癌50例(口腔癌組)，其中男31例，女19例；年齡29～63(49.93±12.39)歲；患中舌癌18例，口底癌12例，牙齦癌9例，頰癌7例，上顎癌4例；腫瘤細胞高分化28例，中分化14例，低分化8例；TNM分期為Ⅰ期11例，Ⅱ期9例，Ⅲ期23例，Ⅳ期7例；合并淋巴結轉移39例，合并遠處轉移7例。納入標準：①經病理檢查確診的口腔癌患者；②入院前未接受過放化療、手術等治療；③年齡18～65歲；④同意參與本研究。排除標準：①復發的口腔癌；②伴全身系統性疾病；③多臟器功能不全；④5年內合并其他腫瘤；⑤伴免疫功能缺陷；⑥不配合治療或治療期間轉院；⑦隨訪期間失訪。選取同期在我院體檢健康的50例作為對照組，其中男31例，女19例；年齡28～63(50.18±12.73)歲。兩組的一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究通過我院倫理委員會批準，所有研究對象均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 研究方法 兩組均于清晨空腹抽取靜脈血5 ml，3000 r/min離心10 min后取上層血清，置于乙二胺四乙酸二鈉試管中，抽取100 μl與鼠抗人單克隆抗體CD45/CD4/CD8/CD3、CD45/CD(16+56)/CD19/CD3各20 μl混勻，常溫避光下反應30 min，于60 min內進行流式細胞儀檢測(Epics XL型流式細胞儀，美國Beckman coulter公司)，測定血淋巴細胞CD3+、CD4+、CD8+、CD19+和NK細胞的水平。

1.3 觀察指標 比較兩組外周血淋巴細胞(CD3+、CD4+、CD8+、CD19+)和NK細胞的水平變化，分析口腔癌患者外周血淋巴細胞(CD3+、CD4+、CD8+、CD19+)及 NK細胞與其臨床特征的相關性。

2 結果

2.1 兩組外周血淋巴細胞水平比較 與對照組比較，口腔癌組CD3+及CD4+T淋巴細胞、CD4+/CD8+和NK細胞顯著降低(P<0.05)，CD19+T淋巴細胞顯著升高 (P=0.000)，CD8+T淋巴細胞降低不明顯(P>0.05)，見表1。

2.2 TNM分期與外周血淋巴細胞的相關性 與Ⅲ～Ⅳ期口腔癌患者比較，Ⅰ～Ⅱ期患者的CD3+、CD4+及CD8+T淋巴細胞、CD4+/CD8+和NK細胞顯著升高(P<0.05)，CD19+T淋巴細胞顯著降低(P=0.000)，見表2。

表1 口腔癌患者與健康對照組外周血淋巴細胞水平比較

表2 口腔癌患者TNM分期與外周血淋巴細胞的相關性

2.3 淋巴結有無轉移與外周血淋巴細胞的相關性 與無淋巴結轉移的患者比較，出現淋巴結轉移的患者CD3+、CD4+及CD8+T淋巴細胞和NK細胞顯著降低(P<0.05)，CD19+T淋巴細胞顯著升高(P=0.000)，CD4+/CD8+降低不明顯(P>0.05)，見表3。

表3 口腔癌患者有無淋巴結轉移與外周血淋巴細胞的相關性

2.4 術后有無復發與外周血淋巴細胞的相關性 本組43例行根治性手術治療，隨訪1年后15例復發。與無復發患者比較，術后復發者CD3+、CD4+及CD8+T淋巴細胞、CD4+/CD8+和NK細胞顯著降低(P<0.05)，CD19+T淋巴細胞顯著升高(P=0.000)，見表4。

表4 口腔癌患者行根治性手術后有無復發與外周血淋巴細胞的相關性

3 討論

以T淋巴細胞和NK細胞為主的細胞免疫在機體抗腫瘤中發揮著重大作用。CD8+T淋巴細胞是細胞免疫的重要組成，CD3+T淋巴細胞則是成熟T淋巴細胞的標志物[8]，均在細胞免疫和體液免疫中起著關鍵性協助作用，而CD19+T淋巴細胞在細胞免疫功能受損時，反應性增高[9]。我國學者發現組織缺氧可通過誘導CCL28的高表達，進而促進調節性T淋巴細胞聚集，促進原發性肝癌患者的腫瘤細胞生長[10]。Pedroza-Gonzalez等[11]研究顯示原發性或轉移性肝癌患者腫瘤微環境中CD4+細胞源的調節性T淋巴細胞增加，使機體的免疫力降低，與預后呈正相關。Li等[12]研究表明外周血調節性T淋巴細胞水平的升高與臨床預后有關。鑒于免疫系統在腫瘤發生和發展中的重要意義，急需探討口腔癌患者免疫功能與臨床預后的相關性，但目前相關研究尚未完善。

本文系統探討了口腔癌患者CD3+、CD4+、CD8+及CD19+T淋巴細胞和NK細胞的表達，在很大程度上反映了患者的免疫功能。本研究結果顯示，與對照組比較，口腔癌組CD3+及CD4+T淋巴細胞、CD4+/CD8+及NK細胞顯著降低，CD19+T細胞顯著升高，表明口腔癌患者免疫功能受損。此外，與Ⅲ～Ⅳ期口腔癌患者比較，Ⅰ～Ⅱ期患者的CD3+、CD4+及CD8+T淋巴細胞和CD4+/CD8+、NK細胞顯著升高，CD19+T淋巴細胞顯著降低；與無淋巴結轉移的患者比較，出現淋巴結轉移的患者CD3+、CD4+及CD8+T淋巴細胞和NK細胞顯著降低，CD19+T淋巴細胞顯著升高；與術后無復發的患者比較，術后復發者的CD3+、CD4+及CD8+T淋巴細胞、CD4+/CD8+和NK細胞顯著降低，CD19+T淋巴細胞顯著升高，說明口腔癌患者的病情越重，免疫功能越低下，與符良斌等[13]研究結果一致。T淋巴細胞亞群介導的細胞免疫和NK細胞可發揮殺傷腫瘤細胞的作用，其功能抑制可能與患者術后復發率升高有關，且免疫功能低下是發生腫瘤的重要因素，表現為輔助性T淋巴細胞減少而抑制性T淋巴細胞增多，腫瘤切除或許可解除患者的免疫抑制狀態[14]。張立娜[15]研究顯示口腔癌患者外周血調節性T淋巴細胞表達水平升高，手術切除原發病灶后有助于降低外周血調節性T淋巴細胞水平，進而解除免疫抑制狀態。

綜上所述，口腔癌患者存在一定程度的免疫抑制，外周血細胞免疫水平與臨床預后密切相關。

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Correlation Analysis of Immune Cell Levels of Peripheral Blood and Clinical Outcomes in Patients with Mouth Cancer

MENG Zhi-jian, GUO Li-na

(Department of Stomatology, Affiliated Hospital of Inner Mongolia Medical University, Hohhot 010050, China)

Objective To investigate correlation between immune cell levels of peripheral blood and clinical outcomes in patients with month cancer. Methods A total of 50 patients with month cancer admitted during January 2014 and January 2015 were selected as month cancer group, and 50 healthy people taking medical examination were chosen as control group. Levels of peripheral blood lymphocytes (CD3+, CD4+, CD8+and CD19+) and natural killer (NK) cells were compared, and correlations between levels of peripheral blood lymphocytes (CD3+, CD4+, CD8+and CD19+) and NK cell and clinical characteristics were analyzed in two groups. Results Compared with those in control group, levels of CD3+ and CD4+ T lymphocyte, CD4+/CD8+and NK lymphocyte were significantly decreased (P<0.05); CD19+ T lymphocyte level was significantly increased (P=0.000); while CD8+T lymphocyte level was not significantly decreased in month cancer group (P>0.05). Compared with those in patients with stage III-IV, levels of CD3+, CD4+and CD8+T lymphocyte, CD4+/CD8+and NK lymphocyte were significantly increased (P<0.05); CD19+T cell level was significantly decreased in patients with stage I-II (P=0.000). Compared with those in patients without lymph node metastasis, levels of CD3+, CD4+and CD8+T lymphocyte and NK cell level were significantly decreased (P<0.05), while CD19+T cell level was significantly increased (P=0.000), but CD4+/CD8+level was not significantly decreased in patients with lymph node metastasis (P>0.05). Compared with those in patients without recurrence, levels of CD3+CD4+and CD8+T lymphocyte, CD4+/CD8+and NK lymphocyte were significantly decreased (P<0.05) and CD19+T lymphocyte level was significantly increased in patients with postoperative recurrence (P=0.000). Conclusion Patients with month cancer have a certain degree of immune suppression, and immunity cell levels of peripheral blood is closely associated with clinical prognosis.

Mouth neoplasms; Immunity, cellular; T-Lymphocytes

內蒙古自治區衛生和計劃生育委員會醫療衛生科研計劃項目(201303048)

010050 呼和浩特，內蒙古醫科大學附屬醫院口腔科

郭立娜，E-mail:2649122035@qq.com

R739.8

A

1002-3429(2017)03-0074-04

10.3969/j.issn.1002-3429.2017.03.029

2016-11-29 修回時間：2016-12-29)