SIRT1對早期腦缺血大鼠水通道蛋白4表達的影響

賀 偉， 展宏剛

(山東省泰山醫院，山東 泰安 271000)

SIRT1對早期腦缺血大鼠水通道蛋白4表達的影響

賀 偉， 展宏剛△

(山東省泰山醫院，山東 泰安 271000)

目的： 檢測水通道蛋白4(AQP4)及沉默信息調節因子1(SIRT1)在腦缺血大鼠腦組織中的表達變化，探究SIRT1對AQP4的調節作用，明確二者在腦缺血及腦水腫發生發展中的作用。方法: 雄性SD大鼠隨機分成假手術組(sham組)和腦缺血模型組(MCAO組)，其中MCAO組又分為6 h、12 h、24 h和48 h 4個時點組別。采用線栓法阻塞大腦中動脈建立局灶性腦缺血模型，于相應時點進行神經癥狀評分，Morris水迷宮檢測大鼠學習認知功能，TTC染色觀察腦梗死體積，干濕重法檢測腦含水量的變化，HE染色觀察大腦皮層周圍組織神經細胞形態學變化，Western blot檢測AQP4、SIRT1和基質金屬蛋白酶9(MMP-9)的表達情況。結果: 與sham組相比較，隨著再灌注時間增加，MCAO組大鼠神經功能評分、腦梗死體積、腦組織通透性和腦組織含水量均持續增加，而大鼠學習認知功能則降低顯著，HE染色顯示腦缺血大腦皮層周圍組織神經元細胞形態不規則，數目減少；Western blot實驗結果顯示AQP4表達水平呈增高趨勢，SIRT1表達降低，MMP-9表達增高，MCAO-48 h組與sham組比較差異最明顯(P<0.01)。結論: 腦缺血后，伴隨腦組織損傷的加劇，SIRT1和MMP-9信號通路的表達激活影響了AQP4的表達活化，共同參與了腦水腫的形成。

腦缺血； 腦水腫； 沉默信息調節因子1； 水通道蛋白4

腦缺血可發生于多種腦血管疾病過程中，涉及多環節、多因素、多途徑損傷的復雜酶促級聯反應，引起嚴重的神經損傷。而腦水腫是缺血性腦血管病中常見的并發癥之一，引起顱內高壓、加重病情，甚至造成病人死亡。而血腦屏障(blood-brain barrier，BBB)通透性改變既是腦缺血損傷后的結果，又是導致損傷進一步加重的重要因素[1]。水通道蛋白4(aquaporin 4，AQP4)是膜水通道蛋白家族的一員，在腦組織中廣泛表達，是控制水進出腦組織的通道，在腦組織水平衡、 星形細胞遷移、神經興奮及炎癥等方面均起著重要作用[2]。大量研究[3]表明，AQP4與腦水腫關系密切， 參與了多種疾病所引起的腦水腫的病理過程。先前的大量研究[4]顯示，腦缺血早期，迅速引起腦損傷，損傷程度隨時間變化很大，這一時期所造成的腦水腫程度也最為嚴重。更有研究[5]指出，中腦動脈閉塞(middle cerebral artery occlusion，MCAO)發生48 h之內是腦水腫的發展的關鍵時期，也是臨床藥物治療的黃金時期。沉默信息調節因子1(silent information regulator 1，SIRT1)為哺乳動物sirtuins家族成員之一，是一種依賴于煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide，NAD+)的去乙酰化酶，在成人組織中廣泛表達。研究顯示，SIRT1通過去乙酰化相關因子調節基質金屬蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9，MMP-9)在內的多個細胞信號通路，參與心腦血管內皮細胞保護作用[6]；另有研究顯示，MMP-9信號通路可以激活AQP4的表達，參與心血管疾病的發生過程[7],但在腦缺血后繼發腦水腫病理生理過程中的作用仍不清楚。為了進一步研究腦缺血發生早期SIRT1、MMP-9信號通路與AQP4的表達存在具體的病理生理關系，我們建立大鼠MCAO模型，選取了MCAO 6 h、12 h、24 h及48 h這4個重要的時點分別進行研究，以期探尋大鼠腦缺血后早期SIRT1對水通道蛋白4的調控規律及其與腦水腫的關系。

材 料 和 方 法

1 材料與試劑

水合氯醛(中國醫藥)；0.9%氯化鈉注射液(湖南科倫制藥)；生物素標記山羊抗兔IgG/小鼠IgG Ⅱ抗試劑盒(北京中杉金橋生物)；Western blot Ⅰ抗Ⅱ抗去除液、Western blot 轉膜液、BCA蛋白濃度測定試劑盒、SDS-PAGE凝膠配制試劑盒和SDS-PAGE電泳液均購自碧云天生物；蛋白markers(Lonza Rockland)；PVDF膜(0.45 μm；購自SERVA)；增強型化學發光試劑(Millipore)；所用單克隆抗體為 AQP4(Abcam)、MMP-9(Cell Signaling Technology)、SIRT1(LifeSpan)和β-actin(Ambobio)。

2 實驗動物

健康雄性Sprague-Dawley大鼠，SPF級，體重250～300 g，由山東省醫學科學院動物中心提供，合格證號為SCXK(魯)2016-0007。

3 實驗方法

3.1 動物分組及給藥 健康成年雄性SD大鼠110只，將動物隨機分為假手術組(sham組)和MCAO模型組。MCAO模型組按照時點不同分為MCAO 6 h、12 h、24 h和48 h 4個亞組。每個MCAO亞組各25只大鼠，假手術組大鼠20只。

3.2 模型構建 將麻醉成功的大鼠仰臥位固定在手術臺上，剪毛，常規消毒皮膚，頸部正中切口約2～3 cm，逐層分離，暴露左側頸總動脈，鈍性分離左側頸總動脈(common carotid artery，CCA)、頸外動脈(external carotid artery，ECA)、頸內動脈(internal carotid artery，ICA)及迷走神經，仔細分離盡量減少對迷走神經的刺激。在近顱底處分離頸內動脈顱外段唯一分支——翼腭動脈，并將其起始部結扎，游離頸外動脈主干一段，在頸外動脈下墊雙線分別2次結扎頸外動脈，兩節點之間保留一定距離(約2 mm)，提起一端，將頸內、外動脈分叉處分離干凈。用血管夾夾閉頸總動脈、頸內動脈，將右側頸外動脈近心段剪開一小口，將漁線所做成的線栓子緩慢插入ECA及ICA入顱至大腦中動脈(middle cerebral artery，MCA)開口處，線栓子插入的平均深度為(18.5±0.5) mm，外留1 cm長漁線，此時即在大腦中動脈起始端堵塞大腦中動脈，造成局灶性腦缺血，結扎漁線與血管，消毒并逐層縫合皮膚。假手術組除不插魚線外，其余操作與手術組相同。

3.3 神經行為學評分 模型制作成功后，按照Bederson[8]評分標準在4個時點對實驗鼠的行為缺陷進行神經功能評分：沒有觀察到神經癥狀，行為正常者為0分；提尾懸空時，動物的手術對側前肢表現為腕肘屈曲，肩內旋，肘外展，緊貼胸壁者為1分；將動物置于光滑平面上，推手術側肩向對側移動時，阻力降低者為2分；動物自由行走時向手術對側環轉或轉圈者為3分；軟癱，肢體無自發活動或死亡者為4分。分數越高，大鼠行為障礙越嚴重。評分結束后，挑選評分在1～3分者入組，造模后死亡及評分為4分的實驗鼠排除入組。

3.4 Morris水迷宮檢測大鼠學習認知功能 大鼠MCAO術后第7天，在無平臺情況下將小鼠放于水迷宮，馴化2次。于第14天開始測試，連續進行5 d。水池直徑150 cm，水深40 cm，水溫(25±2)℃，逃避平臺直徑10 cm，其平面沒在水面下1 cm。按照東、西、南、北4個方位，將水池均分為4個象限，將平臺置于第1象限的中心。水池外接攝像和計算機分析系統[9]。(1)定位航行試驗：將大鼠從每一象限起點面朝池壁放入水中，依次記錄其游到平臺的時間，即為逃避潛伏期，時限為120 s。此時限內找不到平臺，則由實驗者將其引導到平臺上，并停留15秒，該次潛伏期記錄為120 s。將大鼠擦干放入籠子，5 min后再進行下一次試驗。每天以4次訓練潛伏期的平均值作為當日記錄結果。(2)空間探索試驗：于第5天開始進行空間探索試驗，用于評估短期記憶能力。將平臺移除，大鼠于原象平臺的對側限入水，記錄120 s內每只大鼠穿越原放置平臺位置的次數。

3.5 血腦屏障通透性測定 大鼠MCAO術后48 h，經尾靜脈注射伊文思藍(Evans blue, EB; 2%， 4 mL/kg)，注射后2 h麻醉大鼠，將其固定于鼠板上，打開胸腔，用12號針頭經左心室插入心臟，并在右心耳處剪口，用靜脈滴注的方式將0.9%生理鹽水灌注入心臟(灌注壓為110 mmHg)，至右心耳流出無色清亮的液體，斷頭取腦，去除硬腦膜，生理鹽水沖洗后，濾紙吸干表面水分，取缺血側大腦稱其濕重后置于甲酰胺溶液(每100 mg腦組織中加入1 mL甲酰胺)中，56 ℃水浴24 h。24 h后1 000 r/min 離心5 min，用吸管輕吸出上清液，可見光分光光度計測定上清液632 nm處的吸光度(A)值，甲酰胺作為空白比色，按公式計算腦組織EB含量：腦組織EB滲透率=(左腦A值/左腦重量)/(右腦A值/右腦重量)。

3.6 腦含水量的測定 采用干濕重法測定腦含水量。不同時相點，大鼠處死后迅速取腦，將取出的腦組織放在一個內有生理鹽水濕潤的定性濾紙的培養皿中，以防止腦組織水分蒸發。去除皮質表面的軟腦膜、小腦、腦干，用濾紙輕輕拭去腦組織表面的血跡，分離獲取梗死側大腦半球，置于稱量杯中稱取濕重，從取腦到稱重完畢時間控制在5 min內。然后將腦組織放入電熱恒溫箱中，100 ℃烘干24～48 h烘烤至恒重，記錄干重(兩次干重之差≤0.2 mg)。按如下公式計算：腦組織含水量(%)=(濕重-干重)/濕重×100%。

3.7 腦梗死體積百分比的測定 缺血再灌注之后，將各實驗鼠麻醉后迅速斷頭取腦，切除嗅球和低位腦干，用生理鹽水沖洗后迅速將腦組織置于-20 ℃冰箱中速凍15～20 min，取出腦組織放入腦槽中，在冰床上進行操作。大腦沿冠狀面自前腦額極起向后連續切片，一般切成5～6 片、厚度相近(平均2 mm)的冠狀腦切片。小心地將腦片置于 2% TTC 溶液中，放入37 ℃恒溫箱中避光孵育30 min。正常腦組織可染成深紅色，梗死灶為白色，將腦片置于4%多聚甲醛中固定12 h，數碼照相機拍照。選擇每一切面的額側面用Image-Pro Plus 6.0圖像分析軟件計算每張腦片的面積和梗死面積。大鼠腦梗死灶體積百分比(%)=(正常側大腦半球體積-梗死側非梗死區大腦半球的體積)/正常側大腦半球體積×100%=[(A1’+A2’+…+An’)d-(A1+A2+…+An)d]/(A1’+ A2’+…+An’)d×100%，An’表示每片正常腦組織面積，An表示梗死側非梗死區每片腦組織面積，d表示每片厚度。以此腦梗死灶體積百分比來反映MCAO后腦損傷的嚴重程度。

3.8 腦組織取材 將各實驗組剩余大鼠麻醉，斷頭處死，迅速置于冰盤上分離腦組織，在視交叉前行冠狀切取腦組織，取右側腦組織塊在冰冷的生理鹽水中漂洗稱重，分離的梗死腦組織半球再分為2部分：一部分用4%多聚甲醛固定，后續經脫水、透明、包埋，制成腦組織石蠟塊；另一部分置于液氮中保存待用。

3.9 大腦皮層周圍組織的HE染色 取大鼠腦組織石蠟塊，切片機連續切片，厚度約4 μm，置60 ℃烤箱烘烤備用。取石蠟切片常規脫蠟至水，蘇木素染色10 min，流水稍洗，體積分數1%的鹽酸乙醇分化，流水沖洗數分鐘，伊紅染色5 min，流水稍洗，梯度乙醇常規脫水，中性樹膠封片。染色后，BX51普通生物顯微鏡對腦組織觀察并拍照，觀察腦組織病理結構的改變。

3.10 Western blot實驗 在研缽中放入約100 mg缺血側腦組織冰凍標本，加入少量液氮，敲碎，然后把組織研磨成細小的組織碎片，置于2 mL的勻漿器中，加入Western blot或IP細胞裂解液，混勻。加入含1 mmol/L PMSF的裂解液1 mL研磨均勻，移入EP管中。高速冷凍離心機中以14 000×g，4 ℃離心10 min，小心取出上清，用BCA法測定總蛋白濃度。30～50 μg總蛋白上樣量以濃度為8%的凝膠電泳分離。冰水浴下恒流(300 mA)濕法轉膜1.5 h，以體積分數5%的脫脂奶粉封閉1 h，加Ⅰ抗[SIRT1(1∶500)、AQP-4(1∶2 000)、MMP-9(1∶1 000)和β-actin(1∶5 000)]。4 ℃共孵育過夜。TBST洗滌，與Ⅱ抗共孵育2 h，用增強型化學發光試劑進行顯色，并利用灰度分析軟件定量分析，以β-actin的灰度值標化蛋白表達水平。

4 統計學處理

應用SPSS 19.0 統計軟件進行數據處理，數據均以均值±標準差(mean±SD)表示，組間差異比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA)，以P<0.05表示差異有統計學意義。

結 果

1 MCAO大鼠的一般特征

實驗期間，sham組大鼠一般狀態良好，對外界反應靈敏，無死亡。與sham組比較，MCAO組大鼠精神萎靡，出現運動功能障礙，行走向對側旋轉或傾倒，甚至癱瘓。Sham組造模全部成功，MCAO模型組造模成功71只，成功率約80.0%。

2 神經功能評分

Sham組未閉塞大腦中動脈，故評分均為0分；造模后MCAO模型組神經功能評分如表1，表明各模型組均出現不同程度的神經功能缺損癥狀，隨著再灌注時間延長，自6 h～48 h神經功能評分呈逐漸增高趨勢；與MCAO-6 h組比較，MCAO-24 h及MCAO-48 h組神經功能評分差異有統計學顯著性(P<0.05)。

3 Morris水迷宮試驗測試結果

與sham組比較，MCAO組大鼠逃避潛伏期逐漸延長，穿越平臺次數減少，探索速度及平臺象限路程百分比降低，探索路程增加。MCAO組間比較，隨著缺血時間延長，MCAO-48 h組逃避時間延長明顯，差異具有統計學顯著性(P<0.01)；與MCAO-6 h組比較，24 h及48 h時點均顯著降低，差異具有統計學顯著性(P<0.05)；探索速度均降低，尤其在MCAO-48 h組降低最為顯著(P<0.01)；平臺象限路程百分比降低，探索路程增加(P<0.05)，MCAO-48 h組增加最顯著(P<0.01),見表1、2。

表1 MCAO大鼠不同時點神經功能評分、平均逃避潛伏期、MCAO腦組織EB外滲率的變化

#P<0.05,##P<0.01vssham;*P<0.05,**P<0.01vsMCAO-6 h.

表2 各組大鼠空間探索實驗各項指標的比較

#P<0.05,##P<0.01vssham;*P<0.05,**P<0.01vsMCAO-6 h.

4 大鼠血腦屏障通透性的變化

實驗結果如表1所示，EB染色范圍反映了大鼠血腦屏障通透性。MCAO組與假手術組相比，血腦屏障通透性顯著增加(P<0.01)；隨著時間的持續，與MCAO-6 h組相比較，MCAO-24 h及MCAO-48 h組腦組織均顯著增加血腦屏障通透性(P<0.05)，而MCAO-12 h與MCAO-6 h組相比較略有增加，但相互之間無顯著差異。

5 腦組織含水量的變化

實驗結果如圖1所示，sham組各時點腦組織含水量都維持在較低的正常水平，組間變化不大，相互之間差異無統計學顯著性；與sham組相比較，MCAO組各時點的腦含水量顯著增加；隨著再灌注時間延長，各組腦含水量均逐漸升高，尤其在MCAO-12 h組腦含水量顯著激增，與MCAO-6 h組比較，差異有統計學顯著性(P<0.05)；MCAO-24 h及48 h組的腦含水量均維持在較高的水平。

Figure 1.The changes of brain water content in the MCAO rats at different time points. Mean±SD. n=6. ##P<0.01 vs sham; *P<0.05 vs MCAO-6 h.

6 腦梗死體積的變化

與假手術組相比，缺血再灌注各組腦組織梗死范圍從再灌注6 h逐漸升高(P<0.05)，再灌注48 h達到峰值，差異有統計學顯著性(P<0.01)。假手術組無缺血改變，TTC 染色呈均勻紅色。MCAO 組梗死體積百分比隨再灌注時間的延長逐漸增加(P<0.05)，在48 h達到最大，見圖2。

Figure 2.The cerebral infarct sizes in the MCAO rats at different time points. Mean±SD. n=6. #P<0.05, ##P<0.01 vs sham; *P<0.05 vs MCAO-6 h.

7 光鏡檢查

光鏡下大腦海馬組織HE染色可見，sham組神經元和膠質細胞形態正常，CA1區神經元排列整齊、均勻，無間質水腫。MCAO組缺血周邊大腦組織結構水腫明顯，神經元、膠質細胞細胞數目銳減，細胞間隙增寬，神經纖維網呈空泡樣變，隨著缺血時間增加，神經元胞漿及胞膜形態不規則，邊界不清，胞核濃縮程度加重，部分細胞腫脹顯著；尤其在缺血48 h前后，神經元胞體體積明顯增大，細胞水腫顯著，見圖3。

Figure 3.The pathological changes of the hippocampus of the MCAO rats observed with HE staining (×100).

8 Western blot檢測MCAO大鼠腦組織相關蛋白表達

Western blot條帶及灰度定量分析結果可見，MCAO模型組各時點AQP4蛋白表達升高，其中MCAO-24 h及48 h蛋白表達升高顯著，與sham組存在顯著性差異(P<0.01)；與MCAO-6 h組相比較，MCAO-24 h及48 h組，AQP4蛋白表達增加顯著(P<0.05)，MCAO-12 h組表達增加不顯著，見圖4。

MCAO模型組各時點MMP-9蛋白表達持續升高，與sham組差異存在統計學顯著性(P<0.05)；與MCAO-6 h組相比較，MCAO-12 h及24 h組MMP-9蛋白表達量略有增加，差異無統計學顯著性，MCAO-48 h組MMP-9蛋白表達水平增加顯著(P<0.05)，見圖5。

如圖6結果所示，sham組的SIRT1蛋白呈較高水平表達，MCAO模型組中，隨著缺血時間的延長，SIRT1蛋白表達水平持續降低。與sham組比較，MCAO-12 h、24 h及48 h組SIRT1蛋白表達水平均降低顯著，差異存在統計學顯著性(P<0.05)；MCAO-6 h組降低不明顯；與MCAO-6 h組相比較，MCAO-24 h及48 h組的SIRT1蛋白表達均顯著降低，差異具有統計學顯著性(P<0.05)；MCAO-12 h組SIRT1的表達水平略有降低，但差異無統計學顯著性。

Figure 4.The expression of AQP4 in brain tissues of the MCAO rats at different time points. Mean±SD. n=8. #P<0.05, ##P<0.01 vs sham; *P<0.05 vs MCAO-6 h.

Figure 5.The expression of MMP-9 in the brain tissues of the MCAO rats at different time points. Mean±SD. n=8. #P<0.05, ##P<0.01 vs sham; *P<0.05 vs MCAO-6 h.

討 論

Figure 6.The expression of SIRT1 in the brain tissues of the MCAO rats at different time points. Mean±SD. n=8. #P<0.05, ##P<0.01 vs sham; *P<0.05 vs MCAO-6 h.

缺血性腦損傷過程中，除缺氧和能量代謝衰竭外，由缺血誘導的一系列瀑布樣效應是導致神經元死亡的重要機制[10]。AQP4是膜水通道蛋白家族的一員，在腦組織中廣泛表達，是控制水進出腦組織的通道，在腦組織水平衡、 星形細胞遷移、神經興奮及炎癥等方面均起著重要作用[11]。SIRT1是一種煙酰胺腺嘌呤二核苷酸依賴的蛋白去乙酰化酶類，在抑制炎癥級聯反應，抑制氧化應激，調節內皮細胞穩態，介導基因組沉默，減少蛋白表達、代謝及能量消耗，抑制細胞凋亡等途徑發揮神經保護作用[12-13]。在大鼠腦缺血模型中，白藜蘆醇通過增加SIRT1的活性實現對缺血預處理大鼠模型海馬CA1區神經元的保護作用[14]；先前研究發現，SIRT1參與了肺泡巨噬細胞對MMP-9表達的調控作用，進而在慢性阻塞性肺病的發生發展中起保護性作用[15]。MMP-9是腦缺血后過度表達的炎癥因子。研究證實，MMP-9可以通過降解閉合蛋白(occludin)等緊密連接蛋白，導致血腦屏障通透性增加[16-17]。更有研究證實[7]，在腦缺血早期，MMP-9可以通過調節AQP4的表達水平，參與腦水腫的發生過程。但是在腦缺血的早期發生發展過程中，SIRT1、MMP-9及AQP4的變化仍鮮有探討。

本實驗結果顯示，MCAO模型大鼠各時點神經功能評分都增加，且隨著時間延長，神經功能評分也就越高，學習認知能力也不斷降低；隨后的腦組織取材研究中也顯示，無論是腦組織含水量還是腦梗死體積分數都隨著時間的延長而進行性加重。HE染色選取海馬腦組織觀察，顯示神經細胞水腫進行性加重。

本研究通過免疫組化及Western blot等技術手段研究缺血區AQP4蛋白的表達水平及腦組織分布特征，結果表明AQP4蛋白表達水平隨著時間的延長迅速的增加，在MCAO-48 h達到最大表達水平。伴隨著腦水腫程度加重，AQP4蛋白的表達增強，這一結果表明AQP4的表達變化與MCAO模型腦水腫的形成密切相關。為進一步闡明腦水腫發生過程中TJPs表達降低的具體病理生理過程，我們檢測了MMP-9蛋白的表達水平。結果顯示MCAO后隨著腦損傷的加劇，MMP-9的表達也是相伴增加的。而SIRT1蛋白在MCAO模型早期則顯示出持續降低的表達水平。

由此，我們推測MCAO后伴隨著腦組織損傷而產生的腦水腫可能是因為在缺血狀態下SIRT1信號分子表達受到抑制，對MMP-9蛋白表達抑制作用減弱，引起MMP-9的過表達，破壞了血腦屏障的結構與功能，引發后續信號通路中AQP4蛋白的表達增加，使得腦組織水及電解質轉運紊亂，各種炎性介質也隨之進入腦組織，從而導致腦水腫的發生與不斷的發展。本部分研究內容從分子角度初步探究了腦缺血及其繼發腦水腫早期的病理生理過程，為進一步藥物干預研究提供了研究基礎和理論依據，也為臨床預防和治療腦水腫提供重要的參考。

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(責任編輯： 林白霜， 羅 森)

Effect of SIRT1 on dynamic expression of AQP4 in early stage of cerebral ischemia in rats

HE Wei, ZHAN Hong-gang

(TaishanHospitalofShandongProvince,Tai’an271000,China.E-mail:zhhgang@126.com)

AIM: To investigate the pathological changes of aquaporin 4 (AQP4) and related proteins in the rats with focal cerebral ischemia injury, and to observe the effect of silent information regulator 1 (SIRT1) on the AQP4 expression in order to explore the pathological mechanism of cerebral ischemia and brain edema. METHODS: Adult male SD rats were randomly divided into sham group and middle cerebral artery occlusion (MCAO) model group. The MCAO model group was divided into the 4 time point (6 h, 12 h, 24 h and 48 h) subgroups. The animal model of MCAO was established by suture method in mature SD rats. The neural symptom score was measured at the corresponding time points. Morris water maze test was used to study the cognitive function. The cerebral infarction volume was evaluated by TTC staining. The changes of brain water content was analyzed by a dry/wet weight method. The morphological changes of the brain tissues were observed under microscope with HE staining. The protein expression of SIRT1, MMP-9 and AQP4 was determined by Western blot. RESULTS: Compared with sham group, the neural function score of the rats in MCAO model group was significantly elevated. With the increasing reperfusion time, the cerebral infarction volume, brain tissue permeability and the brain water content were also increased. The increases in the protein levels of AQP4 and the related proteins showed apparent changes. The protein expression of SIRT1 was decreased, while the MMP-9 expression was increased. The most obvious differences of the protein level changes in MCAO-48 h model group were observed (P<0.01). CONCLUSION: Accompanied with the aggravating cerebral injury after cerebral ischemia, the process of AQP4 expression is activated with the increasing expression levels of MMP-9 and SIRT1. These factors are combined to induce the formation of brain edema.

Cerebral ischemia; Cerebral edema; Silent information regulator 1; Aquaporin 4

1000- 4718(2017)03- 0455- 07

2016- 09- 20

2016- 11- 15

△通訊作者 Tel: 13335298880; E-mail： zhhgang@126.com

R363.2

A

10.3969/j.issn.1000- 4718.2017.03.012