PON-1基因多態性與PCI術后主要心血管事件相關性研究*

辛 宏，李程亮，蔡天志，張科林，張安吉

1.西安醫學院第一附屬醫院心內科(西安710077),2.西安醫學院第一附屬醫院血液腎病科(西安710077)

·臨床研究·

PON-1基因多態性與PCI術后主要心血管事件相關性研究*

辛 宏1，李程亮2，蔡天志1，張科林1，張安吉1

1.西安醫學院第一附屬醫院心內科(西安710077),2.西安醫學院第一附屬醫院血液腎病科(西安710077)

目的：探討影響經皮冠狀動脈介入術(PCI)預后的危險因素，并分析冠狀動脈介入術患者PON-1基因多態性與PCI術后主要心血管事件(MACE)的相關性。方法： 選取冠狀動脈介入術患者362 例，采用聚合酶鏈式反應-限制性片段長度多態性技術(PCR-RFCP)檢測各組PON1 Q192R基因的多態性，統計分析患者住院期間與術后6個月隨訪期間患者MACE的發生情況，分析PON1基因Q192R多態性與PCI術后MACE發生的相關性。結果：PON1基因Q192R的多態性與MACE發生無明顯相關。結論：PON1基因Q192R的多態性與冠心病患者PCI術后主要心血管事件發生的危險因素無關，但需要更多的研究證實。

經皮冠狀動脈介入術(Percutaneous coronary intervention，PCI)目前是重建冠心病血運的最適方法[1]，阿司匹林和氯吡格雷聯合抗血小板治療是PCI術后抑制血小板聚集金標準 ，可明顯降低術后心血管不良事件的再發率，但臨床中應用氯吡格雷時仍有 4%～30%的患者在常規劑量治療中達不到預期的抗血小板作用，嚴重者導致血栓、再次心肌梗死、死亡等心血管不良事件。PON1酶由人體肝臟合成，被認為是氯吡格雷代謝過程中的關鍵酶，在氯吡格雷由中間產物轉化為活性終產物的過程中發揮重要作用。已有研究表明，PON1的基因多態性能夠會影響氯吡格雷藥效，改變其抗血小板的實際效果[2-3]，尤其是 PON1 Q192R的多態性。據報道，PON1 Q192R易感位點在中國漢族人群突變率為62.7%，但是其單一位點基因多態性與氯吡格雷抗血小板作用的相關性研究結果仍存在爭議。本研究擬運用PCR-RFLP基因分析法檢測冠心病患者PON1 基因Q192R多態性，探討影響 PCI 預后的臨床危險因素，并分析PCI 術后患者MACE的發生與PON1 基因Q192R多態性的關聯。

對象和方法

1 對 象 選取2015年1～12月期間來本院就診的冠狀動脈介入術患者為研究對象，共362 例，包括不穩定型心絞痛(Unstable angina pectoris，UAP)患者172例 、 非 ST 段抬高型心肌梗死(Non-ST segment elevated myocardialinfarction，NSTEMI)患者190例。UAP 和 NSTEMI受試者均符合中華醫學會《UAP 和 NSTEMI 診斷與治療指南》。所有納入的受試者均可安全使阿司匹林與氯吡格雷治療[4]；并簽署知情同意書。362 例患者包括UAP患者172例，其中男性92例,女性80例 ； NSTEMI患者190例，男性102例，女性88例。患者基本資料見表1。

表1 納入患者基本資料比較(±s)

2 隨 訪 所有入組患者術后隨訪6個月，記錄主要不良心血管事件的發生情況。主要不良心血管事件包括心源性死亡、心肌梗死、再次血運重建、支架血栓。根據發生主要心血管事件情況，將患者分為事件組和非事件組。

3 PON1基因多態性分析 PON1基因多態性通過聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態性技術實現， 實驗儀器、試劑和步驟如下。

3.1 儀 器：PTC2150 型 PCR 儀(MJRESEARCH INC公司 美國)；JM2250 型電泳儀 (捷邁公司 大連) ；9700PCR 儀(Applied Bi-osystems 公司)。

3.2 試 劑：Taq DNA 聚合酶、10* PCR mix，DNA Mark (北京天恩澤公司) ；全血基因組DNA 提取試劑盒(天恩澤公司 北京) ；Bam HⅠ、SmaⅠ限制性內切酶及其緩沖液(天恩澤公司 北京)；引物由上海捷瑞公司合成。

3.3 基因組DNA提取和擴增:①基因組 DNA 提取：抽取靜脈血 2 ml，使用Gentra Puregene Blood Kit(QIA-GEN 上海)根據說明書操作步驟提取基因組DNA，若其 A260 /A280大于 1.8則符合要求。②基因擴增：使用普通 PCR儀分別對提取的基因組進行目的基因擴增。引物序列如下：上游：5'-AGTGAG-GAGGACGAAGG-3'，下游：5'-TTACAGT- TGGAAGGAGCA-3'。③PON1基因多態性分析：1%瓊脂糖凝膠電泳后純化PCR產物后去5 μL產物，加入限制性內切酶酶切過夜，10%非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測酶切產物，根據酶切片段大小進行PON1基因多態性分析，可以辨明3種基因型：QQ型、QR型和RR型。

4 統計學方法 選用SPSS 20.0統計學軟件，計量數據以均數±標準差，Kolmogorov-Smirnov 方法進行正態分布檢驗；組間對比采用t檢驗完成，組內比較為卡方檢驗，P<0.05為有統計學差異。

結 果

1 主要心血管事件發生情況 所有患者在住院和隨訪期內共有34例發生主要心血管不良事件，其中10例(2.8%)患者發生心源性死亡，3例(0.9%)發生支架內血栓，6例(1.6%)需要再次血運重建，15例(4.1%)患者發生心肌梗死,見表2。

表2 PCI后主要心血管不良事件發生情況[例(%)]

2 PON1 Q192R基因多態性情況 通過PCR擴增和酶切片段長度分析發現，PON1 Q192R存在三種基因型，分別為QQ、QR和RR，UPA組和STEMI組基因型和等位基因頻率分別見表3。統計分析發現，2組間Q192R基因型分布及等位基因頻率差異無統計學意義。

表3 Arg192 基因型及等位基因頻率比較

注：兩組間基因型比較，χ2=1.412 ，P=0.55；兩組間等位基因頻率比較，χ2=0.389，P=0.571

3 PON1 Q192R基因多態性對PCI后MACE發生的影響 共34例PCI患者在隨訪過程中發生MACE，其中RR組中共14例患者發生MACE(9.4%)，QR組15例患者發生MACE(9%),QQ組5位患者發生MACE(10.6%)，分析發現，PON1 Q192R基因多態性與PCI后MACE發生關聯不明顯。

討 論

近年來，我國ACS的發病率逐年升高[5]，每年大約有110萬人死于冠心病。PCI是治療ACS的最有效的療法。同時，伴隨著介入技術的進步，接受 PCI 治療的 ACS 患者冠脈病變愈加復雜。氯吡格雷和阿司匹林雙重抗血小板治療已成為指南推薦的標準治療。然而，術前規范使用氯吡格雷抗血小板治療的患者PCI術后仍然會出現術后血小板再活化(HPPR)現象，部分患者對氯吡格雷規范治療存在不同程度的低反應性，如果PCI 治療后患者出現較嚴重的HPPR現象，其術后主要心血管事件(MACE)的發生風險將會增加[6-8]，這種現象稱為氯吡格雷抵抗現。

個體對氯吡格雷反應性是由患者的遺傳特性決定的。氯吡格雷本身是一種無活性的前體藥物，需通過代謝后才能為活性形式(即氯吡格雷的硫醇衍生物)，發揮抗血小板作用，PON1基因是氯吡格雷生物活化的一種關鍵酶。人PON1基因位于 7 號染色體 7q21-22，基因表達產物含 355 個氨基酸殘基，相對分子質量約 44 000，具有糖基化修飾。廣泛分布于多種組織和器官，如肝臟、血液、腎臟、脾臟及腦組織等。PON1 基因第192 位氨基酸殘基是影響 PON1 酶活性的重要部位，故PON1Q192R 基因多態性對氯吡格雷的代謝活性可能產生重要影響。本研究通過采集病人標本，運用PCR和限制性內切片段長度分析技術檢測了ACS患者中PON1 Q192R的基因型，并分析了其與PCI后主要心血管不良事件的關系，我們發現PON1 Q192R基因多態性與PCI術后MACE的發生并沒有顯著相關性。但是本研究仍存在部分局限性，一是納入的樣本量有限；二是隨訪時間較短，尚需要大樣本的研究進一步驗證。

綜上所述，我們研究發現PON1 Q192R基因多態性與PCI后MACE的發生無顯著相關性，還需要更多的研究來證實二者的相關性。

[1] 鮑東來，黃偉劍，單培仁. 血漿CysC及BNP水平對冠心病患者經皮冠狀動脈介入術預后的評估價值[J]. 中國老年學雜志，2015, 35(16) : 4516-4518.

[2] 康彥紅，勞海燕，陳秀云，等. PON1 基因啟動子多態性及非遺傳因素對PCI 術后抗血小板治療臨床效應的影響[J]. 中國藥理學通報, 2012, 28 (12) : 1682-1686.

[3] 趙亞子，許杜娟，李 駿. 中國冠心病患者 PON1 Q192R基因多態性對氯吡格雷臨床療效影響的 Meta分析[J]. 中國臨床藥理學與治療學, 2016, 21(9) : 1018-1023.

[4] 易光兆，羅素新，文俊杰，等. sTWEAK，hsCRP 在急性冠脈綜合征的表達及臨床意義[J]. 重慶醫科大學學報，2014, 39(1): 64-68.

[5] 李翔東，劉曉堃. 不同劑量阿托伐他汀對急性冠脈綜合征高敏 C- 反應蛋白的影響[J].世界最新醫學信息文摘，2015, 15(75) : 58-60.

[6] 冷文修，范 利. 氯吡格雷治療后血小板高反應性研究現狀[J]. 中華老年心腦血管病雜志, 2013, 15(5): 701-706.

[7] 劉 震，李韶南，羅 義. 細胞色素P450 2C19 基因多態性與急性冠脈綜合征患者PCI 治療后血小板再活化及預后的關系[J]. 嶺南心血管病雜志, 2015, 21(1) : 32-36.

[8] Liu XL, Wang ZJ, Yang QL,etal. Impact of CYPZC19 polymorphism and smoking on response to clopidogrel in patients with stable coronary artery disease[J]. Chin Med J, 2010, 123(22) : 3178-3183.

(收稿：2016-11-10)

Correlation between PON1 gene polymorphism and major cardiovascular events after PCI

Xin Hong,Li Chengliang,Cai Tianzhi,et al.

Department of Cardiology, The First Affiliated Hospital of Xi’an Medical University(Xi’an 710077)

Objective: To investigate the risk factors influencing the prognosis of patients with coronary artery intervention, and analyze the correlation between PON-1 gene polymorphism and the major adverse cardiovascular events after PCI. Methods: 362 patients with PCI were selected, PON1 Q192R polymorphism was detected with polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) technology. All the patients were followed up 6 months, the incidence of MACE during the period was monitored and recorded. The correlation between PON1 gene polymorphism and MACE was analyzed. Results：The incidence of MACE after PCI was not significantly correlated with PON1 gene polymorphism. Conclusion：There is no correlation between MACE and PON1 gene polymorphism, but more high quality investigation is in need.

Percutaneous Coronary Intervention @PON1 @Major adverse cardiovascular events

*陜西省教育廳基金資助項目(12JK0771)

經皮冠狀動脈介入治療 @PON-1 血小板聚集 @主要心血管事件

R541.4

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2017.04.003