急性白血病患者血清PDGF、HMGB1及相關血管內皮生長因子表達水平研究*

田 淼，晁 旭，何春玲，劉晶晶，田林濤，董昌虎△

1.陜西中醫藥大學 (咸陽 712046)，2.陜西中醫藥大學第二附屬醫院(咸陽 712046)

急性白血病患者血清PDGF、HMGB1及相關血管內皮生長因子表達水平研究*

田 淼1，2，晁 旭1，2，何春玲2，劉晶晶2，田林濤2，董昌虎1，2△

1.陜西中醫藥大學 (咸陽 712046)，2.陜西中醫藥大學第二附屬醫院(咸陽 712046)

目的：探究急性白血病患者血清血小板衍生因子(PDGF)、高遷移率族蛋白1(HMGB1)及相關血管內皮生長因子表達水平。方法：選擇46例急性白血病患者為觀察組，且選擇同期健康體檢者30例為對照組，再測定對觀察組、對照組血清PDGF、HMGB1及相關血管內皮生長因子表達水平，并給予統計分析。結果：初診組、復發組的PDGF、HMGB1水平均顯著高于完全緩解組(P<0.05)。完全緩釋組PDGF、HMGB1水平較初診組顯著降低，與對照組對比無顯著差異(P>0.05)。在急性白血病患者中，VEGF-C在初診組、完全緩解組及對照組中均不表達。初診組VEGF-A、VEGF-R1、VEGF-R3均顯著高于完全緩解組(P<0.05)，完全緩解組與對照組對比(P>0.05)；初診組、完全緩解組VEGF-R2均顯著高于對照組(P<0.05)。初診患者血清PDGF與VEGF-A、VEGF-R1、VEGF-R2、VEGF-R3相關分析，結果無相關；血清HMGB1與VEGF-A、VEGF-R1、VEGF-R2、VEGF-R3相關分析，結果無相關。結論：急性白血病進展與血清PDGF、HMGB1及相關血管內皮生長因子表達水平密切相關，可通過檢測血清PDGF、HMGB1及相關血管內皮生長因子水平評估患者預后效果。

白血病表現為機體造血組織中白血病細胞不斷惡性增殖，且浸潤到組織與各臟器進而阻礙正常造血細胞發揮作用，其屬于造血干細胞惡性克隆性疾病[1-2]。患者通常表現為發熱、貧血、淋巴結腫大。目前針對白血病發病機制尚未明確，但相關研究指出，血清血小板衍生因子(PDGF)、高遷移率族蛋白1(HMGB1)及相關血管內皮生長因子等在其發生、發展中發揮重要作用[3-4]。隨臨床深入研究，逐漸采用現代分子生物學、遺傳學檢測方法從基因、細胞分子水平上有效抑制以有效治療白血病[5]。本研究旨在探究急性白血病患者血清PDGF、HMGB1及相關血管內皮生長因子表達水平,現報告如下。

資料與方法

1 一般資料 選擇2014年9月至2016年9月我院收治46例急性白血病患者為觀察組，其中男25例，女21例，年齡15～77歲，平均年齡為(51.4±4.2)歲，26例為初診患者， 10例完全緩解，10例為復發患者。全部患者均符合《血液病診斷及療效標準》，排除伴有其他惡性腫瘤、感染性疾病、相關免疫性疾病等患者。再選擇同期20例我院健康體檢者為對照組，其中男12例，女8例，年齡16～78歲，平均年齡為(52.4±6.7)歲。兩組在一般資料上無統計學差異(P>0.05)，具有可比性。

2 儀器與試劑 PDGF-ABELISA 試劑盒(廠家：上海西唐公司)、HMGB1ELISA試劑盒(廠家：武漢優爾生公司生產)、血管內皮生長因子-A(VEGF-A) ELISA試劑盒(廠家：深圳達科為生物技術有限公司)、VEGF-C ELISA試劑盒(廠家：武漢優爾生公司生產)、VEGF-R1試劑盒(廠家：武漢優爾生公司生產)、VEGF-R2試劑盒(廠家：武漢優爾生公司生產)、VEGF-R3試劑盒(廠家：武漢優爾生公司生產)。檢驗中所需離心管、量筒、燒杯、移液器頭均經滅菌，避免污染。主要儀器：低速離心機、37℃孵育箱、超低溫冰箱、酶標儀。

3 標本收集 清晨抽取患者2 ml肘靜脈空腹血，以9∶1經129 mmol/L枸緣酸鈉抗凝，行10 min 2000 r/min離心，分離血清至EP管，后在-80℃冷藏備用。

4 檢驗方法 采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法(ELISA)對血清中PDGF、HMGB1、VEGF-A、VEGF-C、VEGF-R1、VEGF-R2、VEGF-R3進行測定。所有標本均需按試劑盒說明進行操作。ELISA基礎即為抗體固相化與酶標記，在固相載體表面抗體上結合，且能夠保持免疫學活性。酶標記抗體一方面可保留免疫學活性，又可保障酶活性。測定期間，受檢標本、固相載體表面抗體發生反應。采用洗滌方式分離固相載體上抗原抗體復合物及液體中其他物質。這時固相酶量、標本中受檢物質量存在比例關系。再加入酶反應底物，其會在酶的催化下生成有色產物，其產物量和標本受檢物量存在直接關系，因此能夠通過呈色深淺給予的定性或定量分析。

5 統計學方法 采用SPSS 17.0統計學軟件，計量資料經均數±標準差表示，且經t檢驗，P<0.05表明差異具有統計學意義。

結 果

1 急性白血病患者血清中PDGF、HMGB1表達水平 初診組、復發組的PDGF、HMGB1水平均顯著高于完全緩解組，具有統計學差異(P<0.05)。完全緩釋組PDGF、HMGB1水平較初診組顯著降低，與對照組對比無統計學差異(P>0.05),見表1。

表1 急性白血病患者血清中PDGF、HMGB1含量(pg/ml)

2 急性白血病患者血清中VEGF-A、VEGF-C、VEGF-R1、VEGF-R2、VEGF-R3表達水平 在急性白血病患者中，VEGF-C在初診組、完全緩解組及對照組中均不表達。初診組VEGF-A均顯著高于完全緩解組，具有統計學差異(P<0.05)，完全緩解組與對照組對比，無統計學差異(P>0.05)；初診組、完全緩解組VEGF-R2均顯著高于對照組，具有統計學差異(P<0.05),見表2。

表2 急性白血病患者血清中VEGF-A、VEGF-R1、VEGF-R2、VEGF-R3表達水平(pg/ml)

3 急性白血病初診患者血清中PDGF、HMGB1與VEGF-A、VEGF-R1、VEGF-R2、VEGF-R3相關性分析 初診患者血清PDGF與VEGF-A、VEGF-R1、VEGF-R2、VEGF-R3相關分析，結果無相關(r=-0.342,r=-0.089,r=-0.053;r=0.078,P>0.05)；血清HMGB1與VEGF-A、VEGF-R1、VEGF-R2、VEGF-R3相關分析，結果無相關(r=-0.530,r=-0.079,r=-0.047;r=0.094,P>0.05)。

討 論

急性白血病發生、發展具有一定連續性，步驟與環節較為繁瑣。近些年研究指出高遷移率族蛋白I能夠在未成熟細胞與實體腫瘤組中豐富表達，是重要炎癥因子[6]。其能夠對腫瘤細胞發生發展起到調節作用，參與到腫瘤轉移與擴散中，此外還可對炎癥反應、細胞免疫等進行調控[7]。

在惡性腫瘤發生發展期間血管新生發揮著重要作用，對于原發腫瘤或轉移性腫瘤在生長、擴散期間均依賴血管生成，若未生成新生血管，則腫瘤所需營養物質與氧只由細胞外基質通過彌散的方式基于，因此導致控制其生長。但當血管形成前期到達血管形成期后腫瘤則會表現為不可控制生長。多數研究[8]表明，腫瘤血管生成與惡性腫瘤侵襲性緊密相關，其中生長、轉移均對血管生成存在依賴性。腫瘤血管生成過程受到正負調控因子調控的過程。

在腫瘤新生血管生成的過程中VEGF發揮著重要作用。大量研究顯示，對于急性白血病、多發性骨髓瘤、骨髓異常增生等疾病中均伴有血管新生，HMGB1可在血液惡性腫瘤中表達，其還能夠經旁分泌引發淋巴瘤細胞增殖侵襲與轉移。HMGB1高表達狀態下，可導致白血病細胞凋亡，增強細胞侵襲、轉移的能力[9]。此外還在腫瘤浸潤、轉移期間發揮著重要作用，可對腫瘤轉移潛能、生物學行為產生嚴重影響，且與預后相關。因此的推測HMGB1與血管新生相關因子間具有一定關聯，可促進急性白血病發生與發展。PDGF屬血管生成因子，其與的腫瘤發生、發展有著密切聯系。當腫瘤細胞釋放PDGF后即可使得平滑肌細胞、血管內皮細胞遷移，此外還能夠促進該類細胞增殖，直接影響到腫瘤血管的發生。同時PDGF還能提高VEGF表達水平，間接誘導生成血管，表明腫瘤中PDGF可通過自分泌、旁分泌加快腫瘤細胞生長，浸潤周圍基質，刺激血管再生。PDGF激活能夠顯著增強組織間壓力，繼而對組織吸收抗癌藥物產生影響，進而影響療效[10]。

本研究中，選擇46例急性白血病患者為觀察組，健康體檢者30例為對照組，結果顯示，初診組、復發組PDGF、HMGB1水平均顯著高于完全緩解組。完全緩釋組PDGF、HMGB1水平較初診組顯著降低。表明PDGF、HMGB1在急性白血病患者中表達水平較高。在急性白血病患者中，VEGF-C在初診組、完全緩解組及對照組中均不表達。初診組VEGF-A、VEGF-R1、VEGF-R3均顯著高于完全緩解組；初診組、完全緩解組VEGF-R2均顯著高于對照組。表明VEGF-A、VEGF-R1、VEGF-R3在急性白血病患者中表達水平較高。初診患者血清PDGF與VEGF-A、VEGF-R1、VEGF-R2、VEGF-R3相關分析，結果無相關；血清HMGB1與VEGF-A、VEGF-R1、VEGF-R2、VEGF-R3相關分析，結果無相關。

綜上所述，急性白血病進展與血清PDGF、HMGB1及相關血管內皮生長因子表達水平密切相關，可通過檢測血清PDGF、HMGB1及相關血管內皮生長因子水平評估患者預后效果，為臨床靶向治療急性白血病提供了新方向。

[1] 王 燕,吳廣勝.急性白血病患者血清血小板衍生生長因子檢測及臨床意義[J].臨床薈萃,2012,27(19):1663-1666.

[2] Jin P, Zhou Q, Song S,etal.Elevated preoperative HMGB1 as predictor of myocardial injury post-percutaneous coronary intervention[J].Medicine (Baltimore),2016,95(46):5149-5152.

[3] 劉現民.臨床分析急性白血病血小板衍生生長因子的測定[J].中國實用醫藥,2015,17(4):80-80,81.

[4] 張晨光,牛志國,王 輝,等.HTLV-1 Tax 蛋白對T細胞中HMGB1調控的影響[J].中華微生物學和免疫學雜志,2013,13(7):501-506.

[5] Assimos DG.Re: HMGB1/TLR4 Signaling Induces an Inflammatory Response following High-Pressure Renal Pelvic Perfusion in a Porcine Model[J].J Urol,2016,196(6):1818-1819.

[6] 張 文,宋冠華,張之勇,等.HMGB1與白血病細胞分化的關系及其作用的實驗研究[J].醫學信息(下旬刊),2013,26(8):393-394.

[7] Zhang J, Xia J, Zhang Y,etal.HMGB1-TLR4 signaling participates in renal ischemia reperfusion injury and could be attenuated by dexamethasone-mediated inhibition of the ERK/NF-κB pathway[J].Am J Transl Res,2016,8(10):4054-4067.

[8] 胡亞會,楊 璐,張晨光,等.HMGB1-血液惡性腫瘤治療的潛在靶點[J].中國實驗血液學雜志,2014,22(2):560-564.

[9] 李向平,牛志國,韓靜賢,等.rhHMGB1對HTLV-1+MT2細胞中HMGB1相關受體表達的影響[J].中華微生物學和免疫學雜志,2014,34(1):47-50.

[10] 王國川,周曉璐,譚安超,等.急性白血病血小板衍生生長因子的測定[J].吉林醫學,2015,36(5):906-908.

(收稿：2016-10-17)

*陜西省中醫藥管理局中醫藥科研課題(15-SCJH018)

白血病 @血小板衍生因子 @高遷移率族蛋白1 血管內皮生長因子

R557

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2017.04.044

△通訊作者