四種滅菌方法對鹽酸丁卡因注射液質量影響的比較＊

劉云云，孫旭，張世曉，李興東，馬曉昱，陳瑤，趙勇

藥學

四種滅菌方法對鹽酸丁卡因注射液質量影響的比較＊

劉云云，孫旭，張世曉，李興東，馬曉昱，陳瑤，趙勇＊

目的規范鹽酸丁卡因注射液的滅菌方法，確保鹽酸丁卡因注射液的安全有效。方法采用不同滅菌方法對鹽酸丁卡因注射液滅菌，運用滴定法和HPLC法分別測定鹽酸丁卡因注射液中鹽酸丁卡因的含量，無菌試驗檢查滅菌后鹽酸丁卡因注射液的無菌性。結果鹽酸丁卡因宜采用流通蒸汽滅菌30 min進行滅菌。結論流通蒸汽滅菌30 min即可保證鹽酸丁卡因注射液的無菌性，又可確保其含量的穩定性，是較為理想的滅菌方法。

鹽酸丁卡因；滅菌方法；質量控制

《中國人民解放軍醫療機構制劑規范》［1］（簡稱《軍規》）2002年版收載鹽酸丁卡因注射液，規格分為0.25%，0.3%，0.5%，1%和2%，用于局部麻醉，如表面麻醉、神經傳導阻滯及椎管內阻滯，該制劑《軍規》所采用的滅菌方法為100℃流通蒸汽滅菌30 min，含量測定方法為分光光度法或滴定法。《中國藥典》［2］2010年版二部附錄XVII滅菌法，濕熱滅菌條件通常采用121℃×15 min，121℃×30 min或者116℃×40 min，也可采用其他參數，但必須能保證物品滅菌后SAL≤10-6。已有文獻報道采用HPLC法測定鹽酸丁卡因的含量。因此，為探討鹽酸丁卡因注射液滅菌工藝的合理性，本文分別采用上述4種滅菌方法對鹽酸丁卡因注射液進行滅菌，比較了滴定法和HPLC法測定4種滅菌參數條件（溫度和時間）下鹽酸丁卡因含量變化，并對4種滅菌法的無菌保證進行檢查，以期為保證鹽酸丁卡因注射液的安全有效提供科學數據和理論依據。

1 儀器與試藥

蒸汽滅菌柜（R20120046，24 m3，哈爾濱宏光容器設備有限公司），溫度驗證儀（S16型，深圳市研工科技有限公司），UV2501型紫外可見分光光度計（日本島津），安捷倫1100型高效液相色譜儀（美國安捷倫）。鹽酸丁卡因標準品（100456-2000301，中國食品藥品檢定研究所，100%），鹽酸丁卡因注射液（解放軍159醫院制劑室，規格：0.25%、0.3%、0.5%、1%和2%，批號：20130916、20131019、20131020、20131021、20131022、20131023、20131024、20131025、20131026、20131027、20131028），甲醇、乙腈、庚烷磺酸鈉（色譜純）；三乙胺、磷酸二氫鉀（分析純）；水（高純水）。

2 方法與結果

2.1 滅菌方法及無菌檢查取新鮮配制規格分為0.25%、0.3%、0.5%、1%和2%的鹽酸丁卡因注射液樣品，采用《中國人民解放軍醫療機構制劑規范》的100℃流通蒸汽30 min滅菌；《中國藥典》二部附錄XVII滅菌法，濕熱滅菌121℃熱壓滅菌15 min；121℃熱壓滅菌30 min或者116℃熱壓滅菌40 min方法進行滅菌；分光光度法和HPLC法分別測定滅菌后鹽酸丁卡因注射劑中丁卡因的含量；《中國藥典》二部附錄XIH無菌檢查法檢查無菌。

2.2 含量測定方法

2.2.1 滴定法精密量取本品適量（約相當于鹽酸丁卡因50 mg），加對酚酞指示液顯中性的乙醇-氯仿（1∶1）混合液20 ml，酚酞指示液2滴，用氫氧化鈉滴定液（0.02 mol/L）滴定至水層顯微紅色。每1 ml的氫氧化鈉滴定液相當于6.017 mg的C15H24N2O2·HCl［1］。

2.2.2HPLC法色譜柱：Agilent Eclipse Plus C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：水-甲醇-乙腈（45∶45∶10，v/v，含0.02%庚烷磺酸鈉、0.34%磷酸二氫鉀，三乙胺調pH至7.0）；流速：1.0 ml/min；檢測波長：310 nm；柱溫：室溫；進樣量：20 μl。在該色譜條件下，理論塔板數按鹽酸丁卡因峰計算為11000，保留時間約13.5 min，色譜行為良好［2-4］。見圖1、2。

圖1 鹽酸丁卡因對照品

圖2 鹽酸丁卡因注射液樣品

2.2.2.1 溶液制備精密稱取鹽酸丁卡因標準品25.13 mg，置于50 ml棕色容量瓶中，用50%的甲醇溶解并稀釋至刻度，作為對照品貯備液；精密量取該溶液2 ml，置50 ml容量瓶，用50%甲醇稀釋至刻度，作為對照品溶液。精密量取樣品5 ml，置100 ml容量瓶中，用50%甲醇稀釋至刻度，精密量取2 ml，置50 ml容量瓶中，用50%甲醇稀釋至刻度，作為供試品溶液。精密量取缺鹽酸丁卡因的0.72%氯化鈉溶液0.1 ml，置50 ml容量瓶中，用50%甲醇稀釋至刻度，作為陰性對照品溶液。

2.2.2.2 方法學考察（1）線性關系考察。精密量取對照品貯備液0.5、1.0、2.0、4.0、8.0和16.0 ml，分別置50 ml容量瓶，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，在上述色譜條件下進樣，記錄色譜圖，以鹽酸丁卡因峰面積A對進樣濃度C進行線性回歸，得回歸方程：A=26.17C-6.6153（r=0.9999，n=6）。結果表明鹽酸丁卡因質量濃度在5.026～160.832 μg/ml范圍內與峰面積線性關系良好。（2）精密度試驗。取0.02mg/ ml的對照品溶液，連續進樣5次，20 μl/次，以峰面積計算，得出RSD=0.25%（n=5）。（3）穩定性試驗。取同一供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、10、12、24 h進樣20 μl。結果峰面積RSD=0.62%（n=8），表明供試品溶液在24 h內穩定。（4）重現性試驗。取同一批的樣品5份，依法測定。結果平均為，RSD=0.35%（n= 5）。（5）鹽酸丁卡因加樣回收試驗。精密量取已知含量的樣品0.1 ml共6份，置50 ml容量瓶中，分別精密加入對照品貯備液各0.5、1.0、2.0 ml，各2份。用流動相稀釋至刻度。依法測定含量，以外標法計算回收率，結果見表1。

表1 鹽酸丁卡因注射液加樣回收試驗結果（n=6）

2.2.2.3 樣品含量測定取規格為0.25%、0.3%、0.5%、1%和2%的鹽酸丁卡因注射液樣品，分別采用100℃流通蒸汽滅菌30 min；121℃熱壓滅菌15 min；121℃熱壓滅菌30 min和116℃熱壓滅菌40 min方法進行滅菌；冷卻后按照2.2溶液制備項下制備供試品溶液。取對照品溶液和供試品溶液各進樣20 μl，按照外標法進行含量測定，并與《中國人民解放軍醫療機構制劑規范》和《中國藥典》中的滴定方法比較，結果見表2和表3。

3 討論

試驗結果顯示，鹽酸丁卡因注射液分別采用100℃流通蒸汽滅菌30 min；121℃熱壓滅菌15 min；121℃熱壓滅菌30 min和116℃熱壓滅菌40 min，其溶液的顏色、pH沒有顯著變化；無菌檢查結果亦表明這4種滅菌方法均能保證鹽酸丁卡因注射液的無菌性。因此，外觀、pH和無菌這三項檢查表明此4種滅菌方法均可用于鹽酸丁卡因注射液。

紫外掃描結果顯示，鹽酸丁卡因在波長310 nm處有最大吸收，因此，在HPLC方法中采用的檢測波長為310 nm。本研究比較了不同文獻HPLC法測定鹽酸丁卡因含量的效果，得到HPLC色譜條件為：色譜柱Agilent Eclipse Plus C18柱，流動相為水-甲醇-乙腈（45∶45∶10，v/v，含0.02%庚烷磺酸鈉、0.34%磷酸二氫鉀，三乙胺調pH至7.0），流速為1.0 ml/min，檢測波長為310 nm，柱溫為室溫；進樣量為20 μl時線性關系、穩定性、精密度和重現性均較好，能在理想的時間內得到穩定、對稱、峰寬較窄、高靈敏度的色譜峰，表明該方法可行。

從鹽酸丁卡因注射液的含量測定結果可看出，4種滅菌方法主藥的含量基本符合規定，但是隨著滅菌溫度的升高，滅菌時間的增長，主藥含量呈現出逐漸降低的趨勢。濃度越低，含量降低得越明顯，0.25%鹽酸丁卡因注射液使用121℃滅菌，HPLC法測定鹽酸丁卡因含量為0.234和0.231，分別低于標示量的95.0%，出現不合格現象（結果見表3）。這些數據表明滅菌溫度是影響鹽酸丁卡因注射劑含量的主要因素，其次為滅菌時間，滅菌溫度越高，時間越長，則鹽酸丁卡因的含量降低越多。相對于116℃和121℃滅菌，采用流通蒸汽滅菌30 min，外觀、主藥穩定性和無菌均符合要求。因此，在保證無菌的條件下，為減少主藥降解，宜采用滅菌溫度較低的滅菌方法，即首選《軍規》的流通蒸汽滅菌30 min進行滅菌。統計數據表明，HPLC法的含量測定結果與滴定法無顯著性差異，但從靈敏度和準確度上，HPLC法優于滴定法，是更加準確的測定方法。

表2 不同滅菌方法對鹽酸丁卡因注射液含量的影響

表3 鹽酸丁卡因的含量應為標示量的95.0%～105.0%

［1］中國人民解放軍總后勤部衛生部.中國人民解放軍醫療機構制劑規范［S］.北京：人民軍醫出版社，2002：306.

［2］國家藥典委員會編.《中國藥典》2010年版二部［S］.北京：中國醫藥科技出版社，2010：630.

［3］李昂，胡翮，郭丙炎.鹽酸丁卡因注射液中鹽酸丁卡因的含量測定［J］.中國藥業，2008，17（24）：23.

［4］吳洪文，王超華.HPLC測定鹽酸丁卡因注射液的含量［J］.中國現代應用藥學雜志，2008，25（5）：442-443.

［2016－08－15收稿，2016－09－13修回］［本文編輯：劉一洋］

Influence of four different sterilization methods on the injection quality of tetracaine hydrochloride：Comparative studyComparative study

LIU Yun-yun①，SUN Xv，ZHANG Shi-xiao，et al.①Institute for Drug and Instrument Control of Jinan Military Region，Jinan，Shandong 250022，China

ObjectiveTo validate the sterilization methods of tetracaine hydrochloride injection so as to ensure its safety and effective ness.MethodsDifferent kinds of methods were used to sterilize the tetracaine hydrochloride injection，then the content of tetracaine hydrochloride were determined by titration method and HPLC，and the sterility of tetracaine hydrochloride injection was measured.ResultsFlow-steam sterilized for 30min is suitable for the sterilization of tetracaine hydrochloride injection.ConclusionFlow-steam sterilized for 30mins not only ensure the sterility of tetracaine hydrochloride injection，but also can keep its content stability，thus it is more ideal sterilization method.

Tetracaine hydrochloride injection；Sterilization methods；Quality control

R971.2

A

10.14172/j.issn1671-4008.2017.03.021

軍隊醫療機構制劑標準提高科研專項課題計劃（13ZJZ21-2）

250022山東濟南，濟南軍區聯勤部藥品儀器檢驗所（劉云云，孫旭，李興東，馬曉昱，陳瑤）；463000河南駐馬店，解放軍159醫院（張世曉）；250014山東濟南，原濟南軍區聯勤部疾病預防控制中心（趙勇）

趙勇，Email：475769669@qq.com