蘆筍老莖中蘆丁的提取和含量測定

馬凱

摘 要：采用超聲法和索氏提取法對蘆筍老莖中蘆丁進行提取，高效液相色譜法對蘆丁的含量進行測定。索氏提取法提取的蘆丁含量高于超聲法。高效液相色譜法方便、簡單、快捷、準確，可用于蘆筍老莖中蘆丁含量測定。

關鍵詞：蘆筍；蘆丁；索氏；超聲；高效液相

蘆丁，屬于黃酮苷類化合物，又稱蕓香苷、槲皮苷，為淡黃色粉末或極細的淡黃色針狀結晶，無臭無味。蘆丁廣泛用于醫藥、保健食品中，具有抗菌消炎、抗輻射、調節毛細血管壁的滲透和對紫外線具有極強的吸收以及很好的抗氧化等作用。蘆筍，學名石刁柏，具有很高的營養保健價值，是一種食藥兼用的名貴蔬菜。蘆筍過了收獲季節后有大量的老莖無法利用，其中含有豐富的黃酮類化合物。本課題研究用超聲和索氏提取的方法，從蘆筍老莖中提取蘆丁，可為蘆丁的提取提供新的資源和工藝，擴大蘆筍老莖的綜合利用，變廢為寶。

1儀器與試劑

1.1儀器。美國Waters公司Waters2695高效液相色譜儀；Waters2996二極管陣列檢測器；WatersXTerra?MSC18色譜柱（2.1mm×150mm3.5?m）；電子天平（上海恒平）；WK-1200A高速藥物粉碎機（青州精誠）；0.45?m有機相濾膜（上海興亞）；

1.2材料和試劑。蘆筍（采集于秋季農田）；蘆丁標準品（中國藥品生物制品鑒定所）；甲醇為色譜醇（美國天地）；水為純凈水（娃哈哈純凈水經20℃超聲處理）；石油醚（天津永大）；無水乙醇（天津廣成）；石油醚、無水乙醇均為分析純。

2實驗方法與結果

2.1材料處理。蘆筍老莖洗凈，自然晾干后，置于干燥箱中60℃恒溫干燥24h，稱其總重量，再放入烘箱中繼續干燥，反復稱量至恒重，粉碎成粉末后保存備用。

2.2蘆筍老莖中蘆丁的提取

2.2.1去除色素。精密稱取粉末10g，置索氏提取器中，加石油醚250ml，水浴回流提取5h，棄去石油醚液，將樣品中殘存的石油醚全部揮去。

2.2.2蘆丁的提取。將樣品分成兩等份，每一份相當于原料5g。超聲提取法提取：將另一份樣品置具塞錐形瓶中，加無水乙醇30ml，超聲提取2h，濾過，收集濾液，濾渣再加無水乙醇30ml，重復提取3次，合并濾液置500ml圓底燒瓶中，減壓旋轉蒸發。得樣品1。索氏提取法提取：將其中一份樣品加無水乙醇250ml，再置索氏提取器中提取5h，放涼，濾過，置500ml圓底燒瓶中，減壓旋轉蒸發。得樣品2。

2.3樣品含量測定

2.3.1對照品溶液的配制。精密稱取蘆丁對照品0.2mg，置10ml容量瓶中用甲醇定容至刻度，搖勻得蘆丁對照品溶液0.02mg/ml。

2.3.2樣品溶液的配制。向樣品1和樣品2圓底燒瓶中加入甲醇使樣品溶解在甲醇中，濾過，微孔濾膜過濾，置50ml容量瓶中定容至刻度，搖勻得樣品溶液0.1g/ml。

2.3.3色譜條件。采用XTerra?MSC18色譜柱（2.1mm×150mm×3.5?m）；流速：0.20ml/min；柱溫：室溫；波長掃描范圍：260nm～280nm。Waters2996二極管陣列檢測器；工作站：MassLynxV4.0系統；流動相：甲醇-0.2%磷酸溶液梯度洗脫。

2.3.4標準曲線的測定。將蘆丁對照品溶液0.02mg/ml配置成0.00125mg/ml，0.0025mg/l，0.005mg/ml，0.02mg/ml的溶液各2ml，過0.45m機相濾膜后置于4個進樣瓶中，高效液相進樣量為10 1，在紫外波長為260nm～280nm范圍內掃描檢測蘆丁標準品溶液，測定峰面積分別為161987，330961，668672，2092391，4227087得蘆丁標準品在0.0125～0.4g范圍內線性關系良好，線性回歸方程為Y=10339265.8x+74569.3，R=0.9995。

2.3.5最低檢出限。將蘆丁對照品溶液0.02mg/ml不斷稀釋，得到檢測蘆丁的最低濃度。S/N>3，最低檢出限為0.05mg。

2.3.6穩定性試驗。精密量取樣品1溶液，分別于2h、12h、24h、36h、48h進樣10 1，測定蘆丁峰面積以考察樣品溶液的穩定性，結果顯示蘆丁在10h內穩定，RSD=0.58%。

2.3.7加樣回收試驗。精密量取樣品1和樣品2溶液各3份，分別加入蘆丁對照品溶液0.1mg，測得峰面積得出回收率為樣品1為95.28%，樣品2為98.54%。

2.3.8樣品含量測定。取配制好的樣品溶液2ml于進樣瓶中，按色譜條件進樣10 1，連續進樣3次，得到峰面積算出含量樣品1為1.126mg/g，樣品2為1.726mg/g。

3討論

3.1色譜條件的選擇。根據文獻報道蘆丁在200～600nm的范圍內進行掃描，在213nm、258nm、360nm處出現3個吸收峰，取標準品溶液于260～280nm區間內掃描，得出的主峰高，分離效果好。

梯度洗脫法可以改變流動相中各溶劑組成的比例，使樣品種的所有組分可在最短時間內實現最佳分離。很多文獻報道是采用一種色譜體系，對于組分復雜的樣品，很難得到理想的分離結果。要么分離時間太長，要么分離度太差。而在液相中采用梯度洗脫，可以縮短時間，提高柱效。

3.2超聲法和索氏提取法的比較。超聲波提取法是近年來藥典收載應用較多的一種樣品處理方法，具有提取效率高，處理時間短，操作簡便等優點。索氏提取法是利用溶劑回流及虹吸原理，使固體物質連續不斷地被純溶劑萃取，既節約溶利萃取效率又高。但最大的不足就是耗時太長。本實驗中采用索氏提取法提取的蘆丁含量略高于超聲法，由此可見索氏提取法在本實驗中提取的蘆丁含量高，方法較佳，且節省試劑。

4結論

使用高效液相色譜法測定蘆筍老莖中蘆丁含量，該方法快速、簡便、準確、重復性好，結果可靠，超聲法提取的蘆丁含量為1.126mg/g，索氏提取法提取的蘆丁含量為1.726mg/g。

蘆丁是我國一種豐富的天然藥物資源，我們在臨床應用方面有著豐富的經驗積累，從而為蘆丁的開發奠定了良好的基礎。面對目前蘆丁在醫藥臨床方面的巨大作用但原料不足的情況，我們從天然藥物中提取蘆丁，擴大蘆丁的原料來源，更好的促進蘆丁在心腦血管等方面的作用，改善人類的身體健康狀況，具有巨大的現實意義。

參考文獻：

[1]韓英華，秦元璋.蘆丁研究現狀[J].山東中醫雜志，2003，22（22）：635-637.

[2]徐天玲.HPLC法測定百花膏中蘆丁的含量[J].湖北中醫雜志，2009，31（8）：73-74.

[3]姜虹玉，于軍華，呂文海.槐角痔瘡膏中蘆丁的HPLC含量測定[J].中國實驗方劑學雜志，2006，12（2）：18-20.

作者簡介：

馬凱（1987—），男，本科，畢業院校泰山醫學院，研究方向：分析檢測工作。