愈酚維林片的溶出度測(cè)定方法研究

李筱玲，劉 敏，李美芳，李玉蘭，王鐵杰（深圳藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/深圳市藥品檢驗(yàn)研究院，深圳518057）

愈酚維林片的溶出度測(cè)定方法研究

李筱玲＊，劉 敏，李美芳，李玉蘭#，王鐵杰（深圳藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/深圳市藥品檢驗(yàn)研究院，深圳518057）

目的：建立愈酚維林片溶出度的測(cè)定方法，并比較不同廠家制劑的差異。方法：采用漿法進(jìn)行溶出，以水為溶出介質(zhì)，體積為1 000 mL，轉(zhuǎn)速為75 r/min，取樣時(shí)間為45 min；采用高效液相色譜法測(cè)定制劑中枸櫞酸噴托維林和愈創(chuàng)甘油醚的溶出度：色譜柱為CAPCELL PAK C18MGⅡS-5，流動(dòng)相為乙腈-磷酸三乙胺緩沖溶液（pH 2.6±0.05）（33∶67，V/V），流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為215 nm（枸櫞酸噴托維林）、275 nm（愈創(chuàng)甘油醚），柱溫為35 ，進(jìn)樣量為20 μL。結(jié)果：枸櫞酸噴托維林、愈創(chuàng)甘油醚檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍分別為5.091 6～50.915 5 μg/mL（r＝0.999 9）、29.999 5～299.995 2 μg/mL（r＝0.999 9）；精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)的RSD＜2.0%；加樣回收率分別為97.90%～100.68%（RSD＝0.95%，n＝9）、97.09%～101.85%（RSD＝1.32%，n＝9）。6個(gè)廠家樣品中枸櫞酸噴托維林的平均累積溶出度分別為12%、98%、66%、97%、91%、32%（n＝3），愈創(chuàng)甘油醚分別為8%、95%、68%、90%、93%、18%（n＝3）。結(jié)論：該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、靈敏度高、專屬性強(qiáng)，適于愈酚維林片的溶出度測(cè)定；不同廠家樣品及同一廠家同批次樣品間的溶出度均存在較大差異。

高效液相色譜法；愈酚維林片；溶出度；漿法；枸櫞酸噴托維林；愈創(chuàng)甘油醚

愈酚維林片為復(fù)方止咳祛痰藥，主要含有枸櫞酸噴托維林和愈創(chuàng)甘油醚兩種成分。其中，枸櫞酸噴托維林具有中樞及外周性鎮(zhèn)咳作用，其鎮(zhèn)咳作用強(qiáng)度約為可待因的1/3，除對(duì)延髓的呼吸中樞有直接的抑制作用外，還有輕度的阿托品樣作用，可使痙攣的支氣管平滑肌松弛，降低氣道阻力[1]；愈創(chuàng)甘油醚為惡心性祛痰藥[2]，兩藥合用具有祛痰止咳作用。愈酚維林片為《國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)·化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)》（第十五冊(cè)）收載的品種[3]，國(guó)內(nèi)外藥典均未收載。現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)未對(duì)愈酚維林片設(shè)置溶出度檢查項(xiàng)，且目前國(guó)內(nèi)也尚未見(jiàn)愈酚維林片溶出度測(cè)定方法的報(bào)道。為了更好地控制該制劑的內(nèi)在質(zhì)量，更加全面地評(píng)價(jià)其生產(chǎn)工藝，完善藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[4-7]，以保障用藥安全，筆者參照2015年版《中國(guó)藥典》（四部）“溶出度與釋放度測(cè)定法”（漿法）[8]和《普通口服固體制劑溶出度試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》[9]中的相關(guān)要求，對(duì)愈酚維林片進(jìn)行了溶出度考察，建立了采用高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定愈酚維林片中枸櫞酸噴托維林和愈創(chuàng)甘油醚溶出度的檢查方法。

1 材料

1.1 儀器

RCZ-8MD型智能溶出試驗(yàn)儀（天津天大天發(fā)科技有限公司）；U-3000型HPLC儀，包括二級(jí)管陣列檢測(cè)器（美國(guó)Dionex公司）；XS205DU型電子天平（瑞士Mettler-Toledo公司）。

1.2 藥品與試劑

愈酚維林片（廠家A，批號(hào)：20130901；廠家B，批號(hào)：20130801；廠家C，批號(hào)：130101；廠家D，批號(hào)：130201；廠家E，批號(hào)：120303；廠家F，批號(hào)：120501，規(guī)格均為：每片含愈創(chuàng)甘油醚0.15 g、枸櫞酸噴托維林25 mg）；枸櫞酸噴托維林對(duì)照品（批號(hào)：100432-200702，純度：98%）、愈創(chuàng)甘油醚對(duì)照品（批號(hào)：10058-201303，純度：≥98%）；乙腈、三乙胺為色譜純，其余試劑均為分析純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：CAPCELL PAK C18MGⅡS-5（250 mm× 4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-磷酸三乙胺緩沖溶液（pH 2.6±0.05）（33∶67，V/V）；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：215 nm（枸櫞酸噴托維林）、275 nm（愈創(chuàng)甘油醚）；柱溫：35 ；進(jìn)樣量：20 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 混合對(duì)照品溶液 精密稱取枸櫞酸噴托維林對(duì)照品0.012 78 g，置于50 mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并定容，搖勻，作為枸櫞酸噴托維林對(duì)照品貯備液；精密稱取愈創(chuàng)甘油醚對(duì)照品0.015 06 g，置于50 mL量瓶中，加10 mL枸櫞酸噴托維林對(duì)照品貯備液，加流動(dòng)相定容，搖勻，作為混合對(duì)照品貯備液。取上述混合對(duì)照品貯備液10 mL，置于50 mL量瓶中，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液 取樣品適量，采用2015年版《中國(guó)藥典》（四部）“溶出度與釋放度測(cè)定”第二法（漿法），以水為溶出介質(zhì)，體積為1 000 mL，轉(zhuǎn)速為75 r/min，溫度為（37±5 ），依法操作，于45 min時(shí)取溶出液10 mL，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

取“2.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液、供試品溶液和溶出介質(zhì)水各20 μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜，詳見(jiàn)圖1。由圖1可知，在該色譜條件下，各成分均能達(dá)到基線分離，分離度＞1.5；理論板數(shù)以枸櫞酸噴托維林峰計(jì)≥2 000，保留時(shí)間為14.436 min。結(jié)果表明，其他成分對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。

2.4 線性關(guān)系考察

圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatogram

精密稱取“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液2.00、4.00、 6.00、8.00、10.00、20.00 mL，分別置于20 mL量瓶中，加流動(dòng)相定容，搖勻，即得系列混合對(duì)照品溶液。取上述系列混合對(duì)照品溶液各適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以待測(cè)成分質(zhì)量濃度（x，μg/mL）為橫縱標(biāo)、峰面積（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得枸櫞酸噴托維林、愈創(chuàng)甘油醚回歸方程分別為y＝11 906x－4 845.4（r＝0.999 9）、y＝13 809x－14 208（r＝0.999 9）。結(jié)果表明，枸櫞酸噴托維林、愈創(chuàng)甘油醚檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍分別為5.091 6～50.915 5、29.999 5～299.995 2 μg/mL。

2.5 精密度試驗(yàn)

取“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果，枸櫞酸噴托維林、愈創(chuàng)甘油醚峰面積的RSD分別為0.1%、0.2%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液（批號(hào)：20130801）適量，分別于室溫下放置0、4、8、12、24 h時(shí)按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果，枸櫞酸噴托維林、愈創(chuàng)甘油醚峰面積的RSD均為0.1%（n＝5），表明供試品溶液在室溫放置24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取樣品（批號(hào)：20130801）適量，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果，枸櫞酸噴托維林、愈創(chuàng)甘油醚峰面積的RSD分別為1.8%、1.6%（n＝6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

取樣品（批號(hào)：20130801）適量，共9份，分別置于100 mL量瓶中，加入低、中、高質(zhì)量的枸櫞酸噴托維林對(duì)照品和愈創(chuàng)甘油醚對(duì)照品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）Tab 1 Results of recovery tests（n＝9）

2.9 溶出介質(zhì)的選擇

取6個(gè)廠家的樣品各適量，按2015年版《中國(guó)藥典》（四部）“通則0931”第二法（漿法），分別以水、0.1 mol/L鹽酸溶液、pH 4.0醋酸鹽緩沖溶液和pH 6.8磷酸鹽緩沖溶液為溶出介質(zhì)，體積為1 000 mL，轉(zhuǎn)速為75 r/min，在5、10、15、20、30、45、60 min時(shí)取樣，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，考察不同廠家樣品在4種溶出介質(zhì)中的累積溶出曲線，結(jié)果見(jiàn)圖2。不同廠家樣品在水中的累積溶出曲線見(jiàn)圖3。

由圖2可知，6個(gè)廠家的樣品在4種溶出介質(zhì)中的溶出行為均相似。考慮到枸櫞酸噴托維林和愈創(chuàng)甘油醚兩種主成分均為水溶性物質(zhì)且均對(duì)pH不敏感，同時(shí)從圖3中可以看出，不同廠家的樣品在溶出介質(zhì)水中溶出行為差異較大，一致性較差，綜合考慮操作簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)環(huán)保等因素，選擇水為溶出介質(zhì)。

2.10 溶出轉(zhuǎn)速的確定

取圖2、圖3中溶出行為較差廠家A的樣品及溶出行為較好的廠家B的樣品各1批。采用漿法，以水為溶出介質(zhì)，體積為1 000 mL，轉(zhuǎn)速分別為50、75 r/min，在5、10、15、20、30、45、60 min時(shí)取樣，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，考察樣品在不同轉(zhuǎn)速、不同時(shí)間點(diǎn)的平均累積溶出度，結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可知，不同廠家的溶出行為差異較大。綜合考慮，選擇參考漿法推薦的50～75 r/min的較高轉(zhuǎn)速75 r/min作為擬定轉(zhuǎn)速。

圖2 不同廠家樣品在4種溶出介質(zhì)中的累積溶出曲線Fig 2 Accumulative dissolution curve of samples from different manufactures in 4 types of dissolution medium

圖3 不同廠家樣品在水中的累積溶出曲線Fig 3 Accumulative dissolution curve of samples from different manufactures in water

2.11 取樣時(shí)間及溶出限度的確定

取6個(gè)廠家的樣品適量，采用漿法，以水為溶出介質(zhì)，體積為1 000 mL，轉(zhuǎn)速為75 r/min，在5、10、15、20、30、45、60 min時(shí)取樣，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，考察不同廠家樣品不同時(shí)間點(diǎn)的平均累積溶出度，結(jié)果見(jiàn)表3、表4。

表2 廠家A、廠家B樣品在不同轉(zhuǎn)速及不同時(shí)間測(cè)定的平均累積溶出度（n＝6，%）Tab 2 Average accumulative dissolution of samples fr-om manufacture A or B at different rotation speed and different time（n＝6，%）

表3 6個(gè)廠家樣品枸櫞酸噴托維林不同時(shí)間點(diǎn)的平均累積溶出度（n＝3，%）Tab 3 Average accumulative dissolution of pentoxyve rine citrate of samples from 6 manufactures at different time（n＝3，%）

表4 6個(gè)廠家樣品愈創(chuàng)甘油醚不同時(shí)間點(diǎn)的平均累積溶出度（n＝3，%）Tab 4 Average accumulative dissolution of guaifenesin of samples from 6 manufactures at different time（n＝3，%）

由表3、表4可知，廠家A、廠家C和廠家F的樣品，在60 min時(shí)，兩種主成分的平均累積溶出度均＜85%，因此在設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)時(shí)不考慮這3個(gè)廠家的產(chǎn)品情況。根據(jù)廠家B、廠家D和廠家E樣品的試驗(yàn)結(jié)果，在45 min時(shí)，3個(gè)廠家樣品的兩種主成分的平均累積溶出度均＞85%，廠家D和廠家E的樣品為首次＞85%。因此，擬定取樣時(shí)間為45 min。同時(shí)，3個(gè)廠家樣品的兩種主成分在45 min時(shí)的平均累積溶出度在92%～96%之間，依據(jù)《普通口服制劑溶出度試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》，限度擬訂為75%[9]。

2.12 濾膜吸附試驗(yàn)

取“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液適量，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液1、2、3、5、6 mL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果，0.45 μm微孔濾膜對(duì)枸櫞酸噴托維林、愈創(chuàng)甘油醚的吸附量均＜2.0%（n＝5），符合規(guī)定[9]。

2.13 樣品溶出度測(cè)定

取6批樣品各適量，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算枸櫞酸噴托維林、愈創(chuàng)甘油醚的溶出度，結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 樣品溶出度試驗(yàn)結(jié)果（n＝3，%）Tab 5 Results of dissolution tests of different samples （n＝3，%）

3 討論

對(duì)于口服固體制劑，溶出度作為一種控制藥品質(zhì)量的重要指標(biāo)，已廣泛應(yīng)用于藥品的研發(fā)、生產(chǎn)和監(jiān)督檢驗(yàn)中[10]。溶出度試驗(yàn)是評(píng)價(jià)口服固體制劑質(zhì)量的一種重要手段，有望成為檢測(cè)口服固體制劑質(zhì)量的簡(jiǎn)易、有效、可行的方法。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，同一廠家同批次的樣品差異較大，溶出度離散性大，溶出行為一致性差；不同廠家的樣品，差異均較大，因此極其有必要增訂溶出度檢查項(xiàng)（注：擬定方法已上報(bào)國(guó)家藥典委員會(huì)）。

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[10] 國(guó)家藥典委員會(huì).國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)：化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)：第五冊(cè)[S].2002：270-272.

（編輯：劉 柳）

Study on Determination Method for Dissolution of Pentoxyverine Citrate and Guaifenesin Tablets

LI Xiaoling，LIU Min，LI Meifang，LI Yulan，WANG Tiejie（Shenzhen Key Laboratory of Drug Quality Standard Research/Shenzhen Institute for Drug Control，Guangdong Shenzhen 518057，China）

OBJECTIVE：To establish a method for the dissolution determination of Pentoxyverine citrate and guaifenesin tablets，and to compare the difference of preparations from different manufactures.METHODS：The paddle method was used to determine the dissolution，using water as medium with medium volume of 1 000 mL and rotation speed of 75 r/min，sampling at 45 min. HPLC method was used to determine the accumulative dissolution of pentoxyverine citrate and guaifenesin：CAPCELL PAK C18MG ⅡS-5 column；mobile phase of acetonitrile-triethylamine phosphoric buffer solution（pH 2.6±0.05）（33∶67，V/V），flow rate of 1.0 mL/min，detection wavelength of 215 nm（pentoxyverine citrate）and 275 nm（guaifenesin），column temperature of 35 ，sample size of 20 μL.RESULTS：The linear range of pentoxyverine citrate and guaifenesin were 5.091 6-50.915 5 μg/mL（r＝0.999 9）and 29.999 5-299.995 2 μg/mL（r＝0.999 9），respectively.RSDs of precision，stability and reproducibility tests were all lower than 2.0%.Average recoveries were 97.90%-100.68%（RSD＝0.95%，n＝9）and 97.09%-101.85%（RSD＝1.32%，n＝9）.Average accumulative dissolution of pentoxyverine citrate in 6 manufactures of samples were 12%，98%，66%，97%，91%，32%（n＝3）；those of guaifenesin were 8%，95%，68%，90%，93%，18%（n＝3），respectively.CONCLUSIONS：The method is simple，accurate，sensitive，specific and suitable for the dissolution determination of Pentoxyverine citrate and guaifenesin tablets.The dissolution of samples between different manufactures and the same manufactures different batches are quite different.

HPLC；Pentoxyverine citrate and guaifenesin tablets；Dissolution；Paddle method；Pentoxyverine citrate；Guaifenesin

R927.2

A

1001-0408（2017）12-1702-05

2016-05-02

2017-01-11）

＊主管藥師，碩士。研究方向：藥物分析。電話：0755-26031735。E-mail：20505695@qq.com

#通信作者：主任藥師，博士。研究方向：藥物分析。電話：0755-26031736。E-mail：liyulan@szda.gov.cn

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.12.33