絞股藍水提物對束縛水浸應激性胃潰瘍模型大鼠的預防作用

遲 棟（南陽醫學高等專科學校藥學院，河南南陽 473061）

絞股藍水提物對束縛水浸應激性胃潰瘍模型大鼠的預防作用

遲 棟＊（南陽醫學高等專科學校藥學院，河南南陽 473061）

目的：考察絞股藍水提物對應激性胃潰瘍模型大鼠的預防作用。方法：將60只大鼠隨機分為正常組、模型組、陽性組（三九胃泰顆粒，3.69 g/kg）和絞股藍水提物高、中、低劑量組（4.0、2.0、1.0 g/kg，以生藥計），每組10只，ig給藥，每天1次，連續1周。給藥結束2 h后，除正常組外，其余各組大鼠均采用束縛水浸法復制應激性胃潰瘍模型。造模3 h后，測定潰瘍指數（UI）、潰瘍抑制率，測定血清中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）以及胃黏膜組織中腫瘤壞死因子α（TNF-α）、前列腺素E2（PGE2）、一氧化氮（NO）、內皮素1（ET-1）水平。結果：與正常組比較，模型組大鼠血清中SOD水平降低、MDA水平升高（P＜0.05），胃黏膜組織中PGE2、NO水平降低，TNF-α、ET-1水平升高（P＜0.05）；與模型組比較，各給藥組大鼠UI明顯降低、上述指標均明顯改善，且具有一定的劑量依賴性，其中絞股藍水提物高劑量組大鼠胃黏膜組織中PGE2、ET-1改善較陽性組更明顯，差異均有統計學意義（P＜0.05）。結論：絞股藍水提物可通過調控血清SOD-MDA平衡和胃黏膜組織NO-ET-1平衡、減輕胃黏膜損傷程度等方式發揮其預防胃潰瘍的作用。

絞股藍水提物；束縛水浸法；應激性胃潰瘍；超氧化物歧化酶；丙二醛；大鼠

應激性胃潰瘍是指機體在應激狀態下（如訓練比賽、長跑等）發生的以炎癥糜爛、淺表性潰瘍及胃腸道出血為特征的急性胃黏膜病變。此時，胃黏膜自身的保護屏障遭到破壞，內、外源性炎癥因子的綜合作用使得胃黏膜內皮細胞加速凋亡，導致胃黏膜細胞代謝紊亂、黏膜血液循環障礙等一系列病變的發生[1-2]。目前，對于應激性胃潰瘍的發生機制尚不完全清楚，國內外學者普遍認為胃液pH值降低、黏膜受損、炎癥因子過度表達等是其發生的主要原因[3]。

絞股藍為葫蘆科、絞股藍屬植物絞股藍[Gynostemma pentaphyllum（Thunb.）Makino]的干燥全草，其味甘、苦，性微寒，歸脾、肺經，主要功能為益氣健脾、化痰止咳、化濁降脂，對脾胃氣虛、倦怠食少、高脂血癥等有明顯的療效[4]。據報道，絞股藍乙酸乙酯提取物能顯著改善乙酸燒灼法復制的大鼠胃潰瘍癥狀、促進大鼠潰瘍面的愈合[5]，但目前對應激性胃潰瘍尚未做相關的研究。從化學成分看，絞股藍中主要含四環三萜類皂苷（如絞股藍皂苷A、人參皂苷Rb1等）和黃酮類（如蕓香苷、商陸苷等）成分，以絞股藍水提取物作為考察對象更貼近于中藥傳統的臨方應用，且更能反映出絞股藍在臨床的應用效果。束縛水浸應激性胃潰瘍是機體的一種自我防御反應，受多種神經遞質的調控，是機體自然形成的一種潰瘍性疾病，該模型更符合臨床發病情況。基于此，本研究采用束縛水浸法建立應激性胃潰瘍大鼠模型，并通過測定大鼠血清中氧化指標、胃黏膜組織中炎癥指標及潰瘍指數（UI）等來考察絞股藍水提物對應激性胃潰瘍的預防作用，為其臨床應用提供參考。

1 材料

1.1 儀器

UV-2401紫外-可見分光光度計（日本島津公司）；1-15K低溫冷凍離心機（美國Sigma公司）。

1.2 藥材、藥品與試劑

絞股藍飲片（產地：安徽亳州，批號：20131105）購自張仲景大藥房，經河南中醫學院第一附屬醫院藥劑科李學林主任藥師鑒定為葫蘆科、絞股藍屬植物絞股藍的干燥全草；三九胃泰顆粒（湖南三九南開藥業有限公司，批號：1209018N，規格：20 g/袋）；前列腺素E2（PGE2）、內皮素1（ET-1）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）、一氧化氮（NO）檢測試劑盒（南京建成生物試劑有限公司，批號：20140301A、20140412、20140107、20140107、20140311、20140307）；羧甲基纖維素鈉（CMC-Na，國藥集團化學試劑有限公司，批號：F20051103）。

1.3 動物

SPF級SD大鼠60只，♂，體質量為（200±10）g，由河南省動物實驗中心提供，許可證號：SCXK（豫）2013-0001。大鼠適應性飼養1周，期間自由飲水、進食，飼養環境溫度為（24±1）℃、濕度為（55±5）%。

2 方法

2.1 絞股藍水提物的制備

取絞股藍飲片700 g，加入10倍量水浸泡30min后回流提取2次，每次1.5 h，合并提取液，濃縮，測得絞股藍總皂苷含量為18.39%、出膏率為23.14%，減壓干燥即得絞股藍水提物。臨用前以0.5%CMC-Na溶解，制備成所需質量濃度的混懸液。

2.2 分組、給藥與造模

將60只大鼠隨機分為正常組、模型組、陽性組和絞股藍水提物高、中、低劑量組，每組10只。正常組和模型組大鼠ig 0.5%CMC-Na溶液，陽性組小鼠ig三九胃泰膠囊3.69 g/kg（由人臨床等效劑量換算而得），絞股藍水提物高、中、低劑量組小鼠ig提取物4.0、2.0、1.0 g/kg（以生藥計，分別由人臨床劑量的2、1、0.5倍換算而得），給藥體積均為10m L/kg，每天給藥1次，連續7 d。末次給藥2 h后，除正常組外，其余各組大鼠均用乙醚麻醉，固定四肢，浸入20℃的恒溫水槽中，持續浸水3 h，液面保持在大鼠胸骨劍突位置，以復制應激性胃潰瘍模型[6-7]。

2.3 血清中SOD、MDA水平測定

水浸3 h后，采用10%水合氯醛將大鼠深度麻醉，腹主動脈取血，以2 770×g離心10min，取上清備用。按照試劑盒說明書操作測定血清中SOD、MDA水平。

2.4 胃黏膜組織中TNF-α、PGE2、NO、ET-1水平測定

打開大鼠腹腔，摘取全胃，置于冰臺上，沿胃大彎剪開，輕輕沖洗胃壁，采用滅菌載玻片將胃體黏膜刮下，置于液氮中凍存。臨用時稱質量，用冰生理鹽水制成10%胃黏膜組織勻漿液，低溫離心（2 770×g）10min，取上清液，按照試劑盒說明書操作測定胃黏膜組織中TNF-α、PGE2、NO、ET-1水平。

2.5 UI與潰瘍抑制率測定

放大鏡觀察胃腺區條索狀損傷，當胃腺區出現條索狀損傷長度≥1mm者，每1mm計1分；2mm≤損傷寬度≤3mm者，計分加倍；3mm＜損傷寬度≤4mm者，按照3倍計分，以此類推；長度和寬度均小于1mm者，計0.5分。將計分相加即為該大鼠的UI，潰瘍抑制率＝（模型組UI－給藥組UI）/模型組UI×100%[8-9]。

2.6 統計學方法

采用SPSS 17.0統計軟件進行統計學分析。計量資料以±s表示，符合正態分布且方差齊者，采用LSD法進行組間比較；符合正態分布但方差不齊者，采用Dunnett’s T3法進行組間比較；數據不服從正態分布時采用秩轉換，仍然不服從正態分布時采用非參數檢驗進行組間比較。P＜0.05表示差異有統計學意義。

3 結果

3.1 大鼠血清中SOD、MDA水平測定結果

與正常組比較，模型組大鼠血清中SOD水平降低、MDA水平升高（P＜0.05）。與模型組比較，各給藥組大鼠血清中SOD水平升高、MDA水平降低，且絞股藍水提物的作用具有明顯的量效關系，差異均有統計學意義（P＜0.05）；其中絞股藍水提物高劑量組大鼠血清中SOD、MDA水平與陽性組比較差異無統計學意義（P＞0.05），絞股藍水提物中、低劑量組大鼠血清中SOD、MDA水平高于陰性組（P＜0.05），結果詳見表1。

表1 各組大鼠血清中SOD、MDA水平測定結果（±s，n＝10）Tab 1 Results of SOD，MDA levels in serum of rats in each group（±s，n＝10）

表1 各組大鼠血清中SOD、MDA水平測定結果（±s，n＝10）Tab 1 Results of SOD，MDA levels in serum of rats in each group（±s，n＝10）

注：與正常組比較，＊P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05；與陽性組比較，ΔP＜0.05；與絞股藍水提物高劑量組比較，☆P＜0.05；與絞股藍水提物中劑量組比較，※P＜0.05Note：vs.normalgroup，＊P＜0.05；vs.model group，#P＜0.05；vs. positive group，ΔP＜0.05；vs.G.pentaphyllum water extract high-dose group，☆P＜0.05；vs.G.pentaphyllum water extractmedium-dose group，※P＜0.05

組別正常組模型組陽性組絞股藍水提物高劑量組絞股藍水提物中劑量組絞股藍水提物低劑量組MDA，nmol/L 3.36±0.33 7.94±0.71＊3.33±0.46＊#2.95±0.21＊#4.78±0.33＊#Δ☆6.00±0.36＊#Δ☆※劑量，g/kg 3.69 4.0 2.0 1.0 SOD，U/L 168.15±8.52 93.51±4.49＊144.24±4.55＊#142.21±4.28＊#122.55±5.80＊#Δ☆111.72±6.10＊#Δ☆

3.2 大鼠胃黏膜組織中PGE2、TNF-α水平測定結果

與正常組比較，模型組大鼠胃黏膜組織中PGE2水平降低、TNF-α水平升高（P＜0.05）。與模型組比較，各給藥組大鼠胃黏膜組織中PGE2水平升高、TNF-α水平降低，且絞股藍水提物的作用具有明顯的量效關系，差異均有統計學意義（P＜0.05）；其中絞股藍水提物高劑量組大鼠胃黏膜組織中PGE2水平高于陽性組（P＜0.05），TNF-α水平與陽性組比較差異無統計學意義（P＞0.05），絞股藍水提物中、低劑量組大鼠胃黏膜組織中PGE2、TNF-α水平低于陽性組（P＜0.05），結果詳見表2。

3.3 大鼠胃黏膜組織中NO、ET-1水平測定結果

與正常組比較，模型組大鼠胃黏膜組織中NO水平降低、ET-1水平升高（P＜0.05）。與模型組比較，各給藥組大鼠胃黏膜組織中NO水平升高、ET-1水平降低，且絞股藍水提物的作用具有明顯的量效關系，差異均有統計學意義（P＜0.05）；其中絞股藍水提物高劑量組大鼠胃黏膜組織中NO水平與陽性組比較差異無統計學意義（P＞0.05），絞股藍水提物各劑量組大鼠胃黏膜組織中ET-1水平低于陽性組（P＜0.05），絞股藍中、低劑量組大鼠胃黏膜組織中NO水平低于陽性組（P＜0.05），結果詳見表3。

表2 各組大鼠胃黏膜組織中PGE2、TNF-α水平測定結果（±s，n＝10）Tab 2 Resultsof PGE2，TNF-αlevels in gastricmucosal tissueof rats in each group（±s，n＝10）

表2 各組大鼠胃黏膜組織中PGE2、TNF-α水平測定結果（±s，n＝10）Tab 2 Resultsof PGE2，TNF-αlevels in gastricmucosal tissueof rats in each group（±s，n＝10）

注：與正常組比較，＊P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05；與陽性組比較，ΔP＜0.05；與絞股藍水提物高劑量組比較，☆P＜0.05；與絞股藍水提物中劑量組比較，※P＜0.05Note：vs.normal group，＊P＜0.05；vs.model group，#P＜0.05；vs. positive group，ΔP＜0.05；vs.G.pentaphyllum water extract high-dose group，☆P＜0.05；vs.G.pentaphyllum water extractmedium-dose group，※P＜0.05

劑量，g/kg PGE2，pg/mg 461.92±31.58 317.44±24.58＊411.36±22.68＊#438.87±23.08＊#Δ388.74±20.73＊#Δ☆373.18±22.62＊#Δ☆組別正常組模型組陽性組絞股藍水提物高劑量組絞股藍水提物中劑量組絞股藍水提物低劑量組3.69 4.0 2.0 1.0 TNF-α，μg/g 0.056±0.007 0.099±0.009＊0.068±0.006＊#0.071±0.005＊#0.083±0.004＊#Δ☆0.093±0.005＊#Δ☆※

表3 各組大鼠胃黏膜組織中NO、ET-1水平測結果（±s，n＝10）Tab 3 Results of NO，ET-1 levels in gastric mucosal tissue of rats in each group（±s，n＝10）

表3 各組大鼠胃黏膜組織中NO、ET-1水平測結果（±s，n＝10）Tab 3 Results of NO，ET-1 levels in gastric mucosal tissue of rats in each group（±s，n＝10）

注：與正常組比較，＊P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05；與陽性組比較，ΔP＜0.05；與絞股藍水提物高劑量組比較，☆P＜0.05；與絞股藍水提物中劑量組比較，※P＜0.05Note：vs.normal group，＊P＜0.05；vs.model group，#P＜0.05；vs. positive group，ΔP＜0.05；vs.G.pentaphyllum water extract high-dose group，☆P＜0.05；vs.G.pentaphyllum waterextractmedium-dose group，※P＜0.05

組別正常組模型組陽性組絞股藍水提物高劑量組絞股藍水提物中劑量組絞股藍水提物低劑量組ET-1，pg/mg 13.42±0.76 29.23±1.97＊15.24±1.35#12.54±0.66#Δ17.25±1.48＊#Δ☆23.35±0.93＊#Δ☆※劑量，g/kg 3.69 4.0 2.0 1.0 NO，μmol/g 238.57±8.39 92.03±6.13＊233.91±5.37#233.76±7.05#159.54±6.35＊#Δ☆119.94±5.73＊#Δ☆※

3.4 大鼠UI及潰瘍抑制率測定結果

與模型組比較，陽性組和絞股藍水提物高、中、低劑量組大鼠的UI均明顯降低，且絞股藍水提物的作用具有明顯的量效關系，差異均有統計學意義（P＜0.05）；其中絞股藍水提物高劑量組大鼠的UI與陽性組比較差異無統計學意義（P＞0.05），絞股藍水提物中、低劑量組大鼠的UI高于陽性組（P＜0.05），結果詳見表4。

4 討論

炎癥因子的異常表達貫穿在胃潰瘍的發生發展過程中，其表達水平的變化可反映胃潰瘍發展的嚴重程度。其中，TNF-α可促進白細胞尤其是中性粒細胞的活化、趨化和黏附，在機體中主要介導抗腫瘤及免疫調節，同時參與炎癥演變和疾病的發生發展過程。PEG2由花生四烯酸或亞油酸在環氧化酶的催化下合成，具有促進黏膜上皮細胞分泌黏液、維持黏膜完整性、抑制胃酸分泌和刺激組織修復，進而促進潰瘍面愈合的作用[10]。血管內皮功能的調節對胃黏膜功能的改進有積極作用，其中NO的舒血管作用和ET-1的縮血管作用構成了胃黏膜局部血流動力學的動態平衡[11]。氧自由基是形成應激性胃潰瘍的因素之一，其通過攻擊生物膜中多種多聚不飽和脂肪酸形成一系列脂質過氧化物及其降解產物（如MDA），使膜蛋白質和酶分子聚合、交聯，造成細胞代謝和功能形態的改變，進而導致組織黏膜損傷，在應激狀態下SOD的活性體現為改善自由基損傷、保護受損組織[12-13]。三九胃泰顆粒具有清熱燥濕、行氣活血、柔肝止痛、理氣健脾之功效，主要用于上腹疼痛、飽脹、反酸、惡心嘔吐等癥；現代藥理學研究證實，其能顯著調節胃腸功能紊亂狀態、抑制胃蛋白酶、修復損傷的胃黏膜，在臨床中對應激性胃潰瘍及功能性消化不良的各種癥狀均有較好的改善作用[14]，故本研究以其為陽性對照。

表4 各組大鼠UI及潰瘍抑制率測定結果（±s，n＝10）Tab 4 Results of UI and ulcer inhibition rate of rats in each group（±s，n＝10）

表4 各組大鼠UI及潰瘍抑制率測定結果（±s，n＝10）Tab 4 Results of UI and ulcer inhibition rate of rats in each group（±s，n＝10）

注：與模型組比較，#P＜0.05；與陽性組比較，ΔP＜0.05；與絞股藍水提物高劑量組比較，☆P＜0.05；與絞股藍水提物中劑量組比較，※P＜0.05Note：vs.modelgroup，#P＜0.05；vs.positive group，ΔP＜0.05；vs. G.pentaphyllum water extract high-dose group，☆P＜0.05；vs.G.pentaphyllum water extractmedium-dosegroup，※P＜0.05

組別模型組陽性組絞股藍水提物高劑量組絞股藍水提物中劑量組絞股藍水提物低劑量組劑量，g/kg 潰瘍抑制率，% 37.78 37.58 27.11 16.20 3.69 4.0 2.0 1.0 UI 42.34±1.74 26.35±1.12#26.43±3.92#30.86±1.16#Δ☆35.48±.0.56#Δ☆※

在本研究中，3個不同劑量的絞股藍水提物均可明顯升高胃潰瘍模型大鼠胃黏膜組織中PGE2水平，提示其能不同程度地促進潰瘍模型大鼠上皮細胞合成PGE2。其中高劑量絞股藍水提物作用明顯，效果優于陽性藥物，提示其可通過升高胃潰瘍模型大鼠胃黏膜組織中PGE2水平，而增強胃黏膜的防御功能，提高黏膜的再生能力，進而促進損傷的胃黏膜的修復。MDA-SOD動態平衡的紊亂會導致胃黏膜細胞因子的代謝失衡，絞股藍水提物可不同程度地升高血清中SOD水平、降低血清中MDA水平，提示其能增強胃潰瘍模型大鼠的抗氧化能力，進而抑制胃潰瘍的發生發展。絞股藍水取物可提高潰瘍模型大鼠胃黏膜組織中NO水平、降低胃黏膜組織中ET-1水平，提示其在改善NO-ET-1動態平衡方面有積極作用。此外，絞股藍水提物還可降低潰瘍模型大鼠胃黏膜組織中TNF-α水平，抵抗過量的TNF-α對胃黏膜的持續損傷。

綜上所述，絞股藍水提物可有效提高應激性胃潰瘍模型大鼠血清中SOD水平和胃黏膜組織中PGE2、NO水平，并降低血清中MDA水平和胃黏膜組織中TNF-α、ET-1水平，進而維持SOD-MDA、NO-ET-1動態平衡，減輕胃黏膜損傷、增強胃黏膜的防御功能、降低脂質過氧化作用，從多種角度預防潰瘍形成。

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（編輯：林 靜）

Preventive Effect of Gynostemma pentaphyllum Water Extract on M odel Rats w ith Water Immersion Stress-induced Gastric Ulcer

CHIDong（School of Pharmacy，Nanyang Medical College，Henan Nanyang 473061，China）

OBJECTIVE：To investigate the preventive effect of Gynostemma pentaphyllum water extract on model rats w ith stress-induced gastric ulcer.METHODS：60 rats were random ly divided into normal group，model group，positive group（Sanjiu weitai granules，3.69 g/kg）and G.pentaphyllum water extract high-dose，medium-dose，low-dose groups（4.0，2.0，1.0 g/kg，calculated by crude drug），10 in each group.A ll rats were intragastrically adm inistrated，once a day，for one week.A fter 2 h of administration，except for normal group，rats were induced to stress gastric ulcermodel by water immersion method in other groups. A fter 3 h of modeling，ulcer index（UI），ulcer inhibition rate were detected；superoxide dismutase（SOD）and malondialdehyde（MDA）in serum，tumor necrosis factor-α（TNF-α），prostaglandin E2（PGE2），nitric oxide（NO）and endothelin-1（ET-1）levels in gastric mucosal tissue were determined.RESULTS：Compared w ith normal group，SOD level in model group was decreased，while MDA level was increased in serum（P＜0.05）；PGE2，NO levels were decreased，TNF-α，ET-1 levels were increased in gastric mucosal tissue（P＜0.05）.Compared w ith model group，UI in administration groups were obviously decreased，above-mentioned indexes were obviously improved，which showed certain dose-dependence.And the levels of PEG2，ET-1 of gastric mucosaltissue in G.pentaphyllum water extract high-dose group improved more obviously than positive group，w ith statistical significances（P＜0.05）.CONCLUSIONS：G.pentaphyllum water extract plays a role in preventing gastric ulcer by regulating serum SOD-MDA balance，gastricmucosal tissue NO-ET-1 balance and reduce the degree of gastricmucosa injury，etc.

Gynostemma pentaphyllum water extract；Water immersion method；Stress-induced gastric ulcer；Superoxide dismutase；Malondialdehyde；Rats

R285.5

A

1001-0408（2017）13-1773-04

2016-10-18

2017-01-10）

＊講師，碩士。研究方向：中藥的提取與分離。電話：0377-63529370。E-mail：chidong1984@126.com

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.13.13