紫菜屬臘葉標本DNA提取方法的研究

摘 要 本文通過優化比較兩種標本DNA的提取方法，最終選擇改良后的試劑盒法對紫菜屬臘葉標本進行DNA提取，并獲得滿足下一步實驗需要的紫菜標本DNA。

關鍵詞 紫菜屬 臘葉標本 DNA 提取

中圖分類號：G642.0 文獻標識碼：A

紫菜隸屬于紅藻門（Rhodophyta） ，原紅藻綱（Bangiophyceae） ，紅毛菜目（Bangiales），紅毛菜科（Bangiaceae），廣泛分布在世界各地海域。紫菜臘葉標本是珍貴的歷史材料，承載著豐富的物種信息，具有重要的研究價值。近年來隨著分子技術的發展，對植物蠟葉標本的研究也上升到分子水平，應用在基礎的分類鑒定、物種遺傳多樣性以及物種的系統進化關系等各個層次的研究中。

從模式標本上進行 DNA 取樣，不必擔心物種鑒定帶來的問題。當然必須杜絕因為DNA取樣而造成的標本損壞。隨著 DNA 的提取和基因測序技術的發展，可能只需微量 DNA 樣品就可實現有效擴增和測序，這將進一步提高模式標本使用的安全性和有效性。

1植物標本DNA提取存在的問題

1.1 DNA的純度問題和濃度問題

DNA的純度被認為是臘葉標本提取DNA中的主要問題之一，直接影響到后續的分子操作。對于紫菜屬，本研究認為DNA濃度問題是首要問題，在DNA濃度保障的情況下，DNA純度對后續PCR反應也造成一定影響。

1.2水浴的溫度和時間

臘葉標本染色體中與DNA結合的核蛋白不易分離，需要降低水浴溫度并延長水浴時間，或加入蛋白酶，才能夠讓足夠多的 DNA游離出來。紫菜屬臘葉標本的水浴溫度進一步降低為45℃，水浴至1h。

1.3標本的存放時間

一般認為存放時間越久，臘葉標本中DNA降解的越嚴重；但最近的研究表明其影響要比不同植物類群及不同制作方法造成的影響小得多。

2兩種DNA提取方法的優化及比較

在對所提 DNA 進行檢測的過程中，采用了 Qubit2.0 定量和普通凝膠電泳檢測兩種方式，Qubit2.0 定量可以看出 DNA 濃度低，在0.1-2.5ng/€%eL之間，普通的凝膠電泳檢測不到 DNA 的存在，選擇 PCR 檢測。

提取的DNA樣品都能用作PCR特異性擴增，樣品長期-20攝氏度保存后也可以繼續用作PCR特意擴增。

3結論

將兩種提取方法進行統一比較可知，兩種提取方法都可以得到一定量的標本DNA，也都可以滿足后續 PCR的需求，但是試劑盒法還具有純度比較高，污染少的優勢，而且操作簡單節省時間。

作者簡介：劉春蓉，1991年7月31日，女，山東省濰坊市人，中國海洋大學海洋生命學院 年級碩士三年級，專業：遺傳學，研究方向，藻類遺傳學。

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