清腦片對小鼠鎮痛效果的實驗研究＊

李重先，謝國旗，時敏秀，高延玲，張旭輝，孔學軍，李獻玉，朱秀卓，張正臣

疼痛是一種不愉快的感覺和情緒上的感受，伴有或具有潛在的組織損傷［1］，是臨床最常見的癥狀之一，涉及臨床各科，見于多種急、慢性疾病過程之中。疼痛在心理、生理、精神及社會多個方面都嚴重影響著患者的生活質量，已成為全球性的公共健康問題。因而對各種疼痛癥的研究和治療日益受到全球醫藥界的重視。探討疼痛的發病機理，尋求有效防治痛癥的途徑、方法和藥物是當前醫藥界的重要任務之一。

清腦片為復方制劑，主要由白芷、當歸、川芎、勾藤、細辛、龍骨、薄荷等組成。功能主治：活血、行氣通竅、鎮痛、清利頭目。用于頭痛、頭暈、腦震蕩后遺癥。為探討其鎮痛作用，觀察了清腦片對小鼠尾根加壓的影響。

1 材料與方法

1.1 試劑與藥品 清腦片（主要成分：白芷、當歸、川芎、勾藤、細辛、龍骨、薄荷；功能主治：活血、行氣通竅、鎮痛、清利頭目。用于頭痛、頭暈、腦震蕩后遺癥；用法用量：口服，3 次/d，3～5 片/次），中國人民解放軍第371中心醫院提供，批號20141125；暈痛定膠囊（陽性藥）：生產廠家：河南龍都藥業有限公司；規格：0.4g×27 粒/盒；生產批號：150309；生理鹽水，河南雙鶴華利藥業有限公司生產，批號130909 06B；醫用乙醇，新鄉市三偉消毒制劑有限公司，批號20140105；純凈水，新鄉娃哈哈食品有限公司，批號20130811；醋酸溶液，天津市致遠化學試劑有限公司，批號20131205

1.2 儀器 JM 1000電子秤，余姚記銘稱重校驗設備有限公司；AL204電子天平，梅特勒－托利多儀器（上海）有限公司；YLS－3E電子壓痛儀，濟南義延科技發展有限公司。

1.3 動物 50只小鼠為昆明種，清潔級，濟南朋悅實驗動物繁育有限公司，合格證編號：37009200000 905。實驗動物使用許可證號SYXK（豫）2015－005。

1.4 實驗方法

1.4.1 清腦片對小鼠尾部壓痛實驗的影響 取50只小鼠，18～22 g，雌雄各半，實驗室正常飼養3 d。預先篩選痛閾正常小鼠50只，隨機分為5組，每組10只，雌雄各半，即清腦片大、中、小劑量組及暈痛定組、生理鹽水組。用尾壓測痛儀測定小鼠給藥前痛閾，即基礎痛閾，方法是：將小鼠尾（約尾尖1/3處）置于壓痛儀操作臺上，施加連續遞增壓力，當小鼠出現掙扎退縮或嘶叫反應時，顯示器讀出的壓力值即為痛閾指標。然后分別灌服大、中、小劑量的清腦片混懸液（2.24 g/kg、1.12 g/kg、0.56 g/kg；相當于臨床劑量的30倍、15倍、7.5倍），暈痛定混懸液（0.9 g/kg，相當于臨床劑量的15倍）及同體積生理鹽水，各實驗組小鼠給藥體積為0.1 ml/10 g，灌胃給藥1次/d，連續7 d，于末次給藥后1 h后測定痛閾值。痛閾提高值=給藥后痛閾－給藥前痛閾，凡痛閾提高值為負數時，按0計。并按下式計算痛閾值提高百分率（%）：閾值提高百分率（%）=［（給藥后痛閾值－給藥前痛閾值痛）/給藥前痛閾值］×100%［2，3］。結果見表1。

1.4.2 清腦片對醋酸致小鼠扭體模型的影響 再取小鼠50只，體重18～21 g，雌雄各半，實驗室正常飼養3 d，隨機分為5組，即模型組、暈痛定組、大、中、小劑量清腦片組，每組10只。分別灌服大、中、小劑量清腦片混懸液 （2.24 g/kg、1.12 g/kg、0.56 g/kg，0.22 g/ml、0.11 g/ml、0.056 g/ml，0.1 ml/10g）、暈痛定膠囊混懸液（0.9 g/kg，0.09 g/ml，0.1 ml/10g）及同體積的生理鹽水（0.1 ml/10g），給藥 1次/d，連續給藥3 d，于末次給藥1 h時，每只小鼠腹腔注射新配制的0.5%醋酸蒸餾水液0.1 ml/10 g，立即觀察小鼠首次出現扭體反應的潛伏期及10 min內的扭體次數。每組結果以均數±標準差表示，計算鎮痛百分率。鎮痛百分率=（對照組扭體次數－給藥組扭體次數）/對照組扭體次數。結果見表2。

1.5 統計學分析 采用SPSS 21軟件統計系統進行統計處理，各組計量資料以均值±標準差（±s）表示，組間差異采用t檢驗方法；計數資料采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異顯著的標準。

2 結果

2.1 清腦片對尾根加壓法小鼠疼痛反應的影響給藥前各組基礎痛閾無明顯差異（P＞0.05），說明分組均勻。與生理鹽水組比，大、中、小劑量清腦片組和暈痛定組均可顯著提高小鼠痛閾、使痛閾提高值顯著升高（P＜0.01）。 見表 1。

2.2 清腦片對醋酸致小鼠扭體反應的影響 與生理鹽水組對比，大、中劑量清腦片組及暈痛定膠囊組均可顯著延長小鼠首次扭體的潛伏期（P＜0.01）、顯著減少10 min內扭體次數（P＜0.01），小劑量清腦片組可明顯延長小鼠首次扭體的潛伏期 （P＜0.05）、明顯減少 10 min 內扭體次數（P＜0.05）。 見表2。

表1 清腦片對尾根加壓法小鼠疼痛反應的影響（±s，n=10）

表1 清腦片對尾根加壓法小鼠疼痛反應的影響（±s，n=10）

注：與生理鹽水組比，＊P＜0.05；#P＜0.01。

痛閾提高百分率（%）生理鹽水組 － 270.39±25.48 7.58暈痛定組 0.90 267.35±20.67 99.64大劑量清腦片組 2.24 266.43±21.00 99.63中劑量清腦片組 1.12 264.68±32.27 85.08小劑量清腦片組 0.56 267.70±30.13 72.93組別 給藥劑量（g/kg） 基礎痛閾（g） 給藥后痛閾（g） 痛閾提高值（g）342.21±22.95 71.82±15.98 532.46±36.76 265.11±25.63#528.99±24.55 262.56±28.88#486.04±30.17 221.36±14.77#459.44±36.60 191.74±28.92#

表2 清腦片對醋酸致小鼠扭體反應的影響（±s，n=10）

表2 清腦片對醋酸致小鼠扭體反應的影響（±s，n=10）

注：與生理鹽水組比較，＊P＜0.05，#P＜0.01。

鎮痛率（%）生理鹽水組 － 3.41±0.57 33.6±4.14 －暈痛定膠囊組 0.90 5.01±0.56# 19.9±4.07# 40.77清腦片大劑量組 2.24 4.82±0.71# 21.7±5.10# 35.42中劑量組 1.12 4.48±0.60# 24.3±4.67# 27.68小劑量組 0.56 4.17±0.66＊ 27.6±5.46＊ 17.86分組 劑量（g/kg）潛伏期（min）10 min內扭體次數（次）

3 討論

清腦片方中白芷為君藥，辛、溫，具有解表散風、通竅鎮痛的作用。當歸，辛、溫，具有補血、活血、鎮痛的作用。川芎，辛、溫，具有活血行氣、祛風鎮痛的作用。勾藤，甘、微寒，具有息風止痙、清熱平肝的作用。細辛，辛、溫，具有祛風散寒、通竅鎮痛的作用。四藥合用為臣藥。龍骨，甘、澀，具有鎮靜安神、收斂固澀的作用，為佐藥。薄荷辛、涼，具有疏散風熱，清利頭目的作用，為使藥，以上七藥合用具有活血行氣、通竅鎮痛的作用。可有效緩解腦震蕩后頭痛癥狀。臨床應用取得了較好的療效［12］，前期的藥效學實驗也證明了該制劑具有活血、抗平衡失調的作用［13－15］。為驗證其鎮痛作用進行了該實驗。動物模型是研究疾病的發病機理以及尋求開發新藥物或更有效治療手段的基礎，理想的疼痛模型應該具備：（1）致痛原因近似臨床實際情況；（2）動物的疼痛行為反應以及逃避疼痛刺激的反射活動與某種或某些慢性疼痛癥狀相似，可以客觀檢測；（3）便于進行疼痛發生機制的研究；（4）模型制作簡便，成功率高，可重復性強；（5）反復刺激幾乎不引起或只引起極小的組織損傷。

目前國內外篩選鎮痛藥常用的鎮痛方法有物理（熱、電、機械）和化學刺激法，其中物理法多用于篩選較強鎮痛藥，化學法主要用于篩選具有抗炎作用的鎮痛藥，但這些方法都各有優缺點。另外動物實驗結果與臨床試驗結果的平行關系也是未知的，因此對清腦片的藥效學實驗設計了多種鎮痛實驗方法。其中小鼠尾根加壓法屬反射性測通模型，本方法的優點在于同一小鼠痛閾變化很小，相近重量小鼠變異系數很小，重復性好，對強弱鎮痛藥均有效，所以輔以機械刺激實驗以確保清腦片的鎮痛作用，實驗結果表明，其具有明顯的對抗機械壓力引起的疼痛，疼痛提高百分率可達98.55%。腹腔注射醋酸引起小鼠長時間的疼痛刺激，從而導致扭體反應，即腹部內凹、軀干與后腿伸張、臀部高起。觀察給予醋酸10 min內發生扭體反應“扭體”次數。此實驗方法具有敏感、簡便、重復性好等特點，也是篩選鎮痛藥物經典動物模型之一。本實驗結果表明清腦片大、中、小劑量均能減少醋酸所致小鼠扭體反應次數，說明清腦片對醋酸所致小鼠有鎮痛作用。以大、中劑量清腦片的鎮痛療效最優。

綜上可知，清腦片具有鎮痛作用，可以對抗機械刺激引起的傷害性反應，且有量效關系，但對其有效成分以及鎮痛機制尚有待于進一步的研究探討。由實驗結果可知尾根加壓法和扭體反應鎮痛率隨著劑量的增加而效果逐步增強，再增大劑量已無顯著療效，目前實驗中的最佳劑量即為當前大劑量，在大劑量的范圍內目前無明顯的不良反應。

志謝 本實驗在河南中醫藥大學苗明三教授指導下完成，特此致謝。

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