甘孜州殺螺植物資源的篩選及活性研究

劉建文

(四川省甘孜州職業技術學校，四川 瀘定 626100)

甘孜州殺螺植物資源的篩選及活性研究

劉建文

(四川省甘孜州職業技術學校，四川 瀘定 626100)

本試驗以8種植物為對象，研究其不同提取物對福壽螺的毒殺活性，并篩選出具有明顯殺螺效果的植物提取物，進一步測定其LC50值，以期為開發和合理利用植物源殺螺劑提供參考。

甘孜州；植物資源；殺螺活性；篩選

近年來，福壽螺(Pomacea canaliculata)對我國農業生產的危害和生物安全的威脅越來越嚴重。如何有效控制福壽螺的危害，已經成為社會關注的焦點。目前，福壽螺的防治技術逐漸趨于多樣化，但化學防治法由于方便快捷，成本低，控螺效果明顯，一直是農民控制福壽螺危害的主要方式。常用殺螺劑主要有五氯酚鈉、貝螺殺、百螺殺、百螺敵、硫酸銅等。化學殺螺劑的使用或多或少都有副作用，如硫酸銅是重金屬鹽，會嚴重污染水體[1]。多數殺螺產品使用過程中產生的環境污染、人畜中毒、殺傷天敵、破壞生態平衡等一系列公害問題，導致化學農藥在實際應用中有很大局限性[2-4]。因此，探索高效、經濟、安全的植物源殺螺劑，將是未來防控福壽螺的有效途徑。本試驗利用甘孜州豐富的特種植物資源，開展植物源殺螺植物的篩選，為進一步開發植物源滅螺劑提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 供試植物 通過查閱文獻資料和民間走訪調查，以具有毒性和醫用價值的植物資源為取樣方向，從四川省甘孜州境內采集8種潛在殺螺植物樣品，將樣品置于室溫下晾干后備用。植物名錄如下：

狼毒(Stellerachamaejasme)

厚樸(MagnoliaofficinalisRehd. et Wils.)

川牛膝(CyathulaofficinalisKuan)

麻牛膝(CyathulacapitataMoq)

秦艽(GentianamacrophyllaPall.)

澤漆(EuphorbiahelioscopiaLinn.)

毛葉薔薇(RosamaireiLevl.)

DZN-1

1.1.2 供試福壽螺 福壽螺(Pomaceacanaliculata)：市場購買后于實驗室標準化飼養7d后，剔除掉活性較差個體，保留活力較好個體用于實驗。

1.1.3 供試溶劑 甲醇(A.R.)、乙酸乙酯(A.R.)、石油醚(A.R.)、二甲基亞砜(A.R.60～90℃)等，以上溶劑均由成都市科龍化工試劑廠提供。

1.1.4 儀器 儀器設備如表1所示。

表1 儀器

1.2 試驗方法

1.2.1 植物提取物的制備 采用索氏提取法，選用極性差異較大的3種提取溶劑(甲醇、乙酸乙酯、石油醚)依次對植物樣本進行提取[5]：將植物樣本用粉碎機粉碎至20目，稱取一定量裝于提取器中，用甲醇提取3次，將提取液過濾，濾液裝于旋轉蒸發儀中減壓濃縮，待濃縮液較粘稠時，倒入燒杯，放進烘箱內烘干至恒重，稱重后計算提取率，然后將提取物放入冰箱4℃冷藏備用。甲醇提過的植物樣本繼續用乙酸乙酯提取3次，后續參考甲醇。接著用石油醚提取植物樣本3次，后續參考甲醇。

提取率(%)=[濃縮后各分離成分的質量/植物材料質量]×100%

1.2.2 殺螺活性植物的篩選 參考駱悅等[6]試驗方法，采用浸殺法。設置各植物提取液的濃度200μg/mL的懸浮液，進行浸殺實驗。每次殺螺活性測定均設置3次重復，取500mL燒杯，然后在燒杯中倒入300mL配好的藥液。每個燒杯中放入20只大小均勻，長勢相同的福壽螺。并設置對照，清水對照(對照甲醇提取物)，二甲亞砜和清水混合液對照(對照乙酸乙酯提取物)，石油醚和清水混合液對照(對照石油醚提取物)。最后用紗布將燒杯封口，避免福壽螺逃逸，放在室內培養(溫度為25～28℃)。測定處理48h后福壽螺死亡率，以初步篩選具有殺螺活性的植物提取物。選取殺螺活性較高的植物提取物，用200μg/mL提取物懸浮液進行浸殺實驗，分別測定24h、48h、72h后福壽螺死亡率，進一步確定其殺螺活性，若在72h死亡率為100%的提取物則進入復篩。復篩配制濃度分別為10μg/mL，50μg/mL，100μg/mL的植物提取物藥液進行實驗。分別在24h，48h和72h觀察各燒杯福壽螺的死亡情況，并做好記錄。

表2 各植物提取物對福壽螺的毒殺活性

福壽螺死亡標準[7]：在清水中不伸出觸須或腳墊爬行，觸碰上浮至水面的福壽螺并不下沉，厴殼完全張開露出頭角等部位，觸碰也不關閉厴殼。

1.2.3 毒力測定 采用浸殺法。設置提取物濃度分別為10μg/mL，20μg/mL，40μg/mL，80μg/mL，160μg/mL，進行實驗。分別在24h和48h觀察各燒杯福壽螺的死亡情況，并做好記錄，計算校正死亡率。根據結果，建立毒力回歸方程，并計算植物提取物的LC50。

2 結果與分析

2.1 植物提取物殺螺活性的初步篩選

采用浸殺法對8種植物提取物進行了殺螺活性的初步篩選，并以福壽螺的校正死亡率為指標。由表2可知，狼毒、厚樸、川牛膝、麻牛膝、秦艽、澤漆、毛葉薔薇、DZN-1這8種植物樣本甲醇、乙酸乙酯、石油醚提取率大小依次為：甲醇>乙酸乙酯>石油醚，其中石油醚對厚樸、秦艽、毛葉薔薇的提取率為0。

用200μg/mL的24種提取物懸浮液對福壽螺進行浸殺處理。在甲醇提取物中，麻牛膝的甲醇提取物殺螺活性最高，達到了73.66%，遠高于其他植物甲醇提取物；其次為狼毒，殺螺活性為20.51%；而川牛膝甲醇提取物對福壽螺的校正死亡率為0，表明該植物甲醇提取物對福壽螺并沒有任何影響。乙酸乙酯提取物中，川牛膝和麻牛膝的乙酸乙酯提取物殺螺活性較高，分別為40.85%和56.23%，其余6種植物乙酸乙酯提取物的殺螺活性都較低，24h校正死亡率小于10%。石油醚對各植物的提取率較低，且其基本無殺螺活性。綜上所述，川牛膝乙酸乙酯提取物和麻牛膝甲醇、乙酸乙酯提取物表現出明顯的殺螺活性。

2.2 牛膝植物不同提取物對福壽螺的毒殺活性

根據活性初篩結果確定川牛膝乙酸乙酯提取物和麻牛膝甲醇、乙酸乙酯提取物有較高的殺螺活性，因此，設置3種提取物濃度為200μg/mL，進一步對福壽螺進行浸殺實驗，測定牛膝不同提取物處理24h、48h、72h后福壽螺死亡率，其校正死亡率測定結果如下表3所示。

表3 不同提取物作用下福壽螺的校正死亡率

根據表3可知，牛膝不同提取物的殺螺活性大小為：麻牛膝甲醇提取物>麻牛膝乙酸乙酯提取物>川牛膝乙酸乙酯提取物。其中，在麻牛膝甲醇提取物處理72h后福壽螺校正死亡率為100%，故對麻牛膝甲醇提取物進行復篩，設置麻牛膝甲醇提取物的濃度為10μg/mL，50μg/mL，100μg/mL，進一步測定其對福壽螺的毒殺活性，測定結果如下表4所示。

表4 麻牛膝甲醇提取物對福壽螺的校正死亡率

注：同列中字母不同者，表示在0.05水平上差異性顯著(Duncan新復極差法)

根據表4結果所示，處理濃度為10μg/mL、50μg/mL、100μg/mL時，這3個不同濃度之間福壽螺死亡率差異性顯著，并且隨著濃度的增加，死亡率顯著提高。參考表4數據，設置麻牛膝甲醇提取物濃度為10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL、160μg/mL，測定麻牛膝甲醇提取物對福壽螺的毒力。

2.3 麻牛膝甲醇提取物對福壽螺的毒力測定

設置麻牛膝甲醇提取物濃度為10μg/mL，20μg/mL，40μg/mL，80μg/mL，160μg/mL，測定提取物對福壽螺的毒力。測定結果如表5所示。

表5 麻牛膝甲醇提取物對福壽螺的毒力測定結果

根據表5可知，麻牛膝甲醇提取物處理福壽螺24h，LC50值為76.15μg/mL，處理福壽螺48h，LC50為53.36μg/mL。

3 討論

甘孜州因其獨特的地形地貌與氣候特征，具有豐富的植物資源，尤以橫斷山區被譽為植物資源的寶庫。已有大量植物用于動物和昆蟲方面的研究，并成效顯著，但至今尚未報道對福壽螺的活性研究。通過多種途徑，積極挖掘、篩選新的殺螺植物，不僅充分利用了甘孜州豐富的植物資源優勢，而且對于進一步開發高效、經濟、安全的植物源殺螺劑有著積極的參考價值。

植物源殺螺劑作為目前生物滅螺研究的一個重要方向，已得到學者們的廣泛重視。如今對福壽螺有毒殺作用的植物提取物已達上千種，但絕大多數植物提取物因殺螺效果差而未能進一步開發成商品在生產實踐中加以利用。因此，在今后的一段時間內，篩選高活性植物滅螺材料是促進植物滅螺劑產業化開發的重要方向。本試驗，在四川甘孜州境內采集了8種具有潛在殺螺活性的植物樣品，進行殺螺活性研究與毒力測定，成功篩選出具有明顯殺螺活性的植物——麻牛膝。麻牛膝既是常用中藥材，又是重要的出口品種，具有逐瘀通經、通利關節、利尿通淋等功效。目前已有報道麻牛膝在動物和昆蟲方面的研究，而尚未見麻牛膝的滅螺活性報道。因此，我們人為麻牛膝的甲醇提取物具有較高的殺螺活性，值得深入進行毒力測定、明確其活性成分及毒理機制研究。

[1]李小慧，胡隱昌，宋紅梅，等.中國福壽螺的入侵現狀及防治方法研究進展[J].中國農學通報，2009,25(14):229-232.

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[3]潘禮增，陳紹平，潘容花，等.85%殺螺快防治水稻田福壽螺藥效試驗[J].廣東農業科學，2004(2):39-40.

[4]肖漢祥，張揚，黃炳超.70%殺螺胺乙醇胺鹽可濕性粉劑防治水稻福壽螺藥效試驗[J].植物醫生，2005,18(2):33-34.

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