雙氫青蒿素對(duì)人膽管癌裸鼠移植瘤抑制作用研究

相淑芳，邵志堅(jiān)，朱建明，鄒俊濤

（1.廣東省廣州市海珠區(qū)中醫(yī)醫(yī)院中藥房，廣東 廣州 510220；2.廣州市海珠區(qū)瑞寶街社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心檢驗(yàn)科，廣東 廣州 510220；3.中山大學(xué)解剖教研室，廣東 廣州 510220）

論 著

雙氫青蒿素對(duì)人膽管癌裸鼠移植瘤抑制作用研究

相淑芳1，邵志堅(jiān)1，朱建明2，鄒俊濤3

（1.廣東省廣州市海珠區(qū)中醫(yī)醫(yī)院中藥房，廣東 廣州 510220；2.廣州市海珠區(qū)瑞寶街社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心檢驗(yàn)科，廣東 廣州 510220；3.中山大學(xué)解剖教研室，廣東 廣州 510220）

目的：觀察雙氫青蒿素（DHA）對(duì)裸鼠膽管癌細(xì)胞株（QBC939）皮下移植瘤生長(zhǎng)的抑制作用。方法：14只裸鼠建立人膽管癌裸鼠皮下移植瘤模型，隨機(jī)分成兩組各7只。每周檢測(cè)各組裸鼠皮下移植瘤體積及體質(zhì)量的變化，21天后處死裸鼠檢測(cè)各組轉(zhuǎn)移瘤重量，兩組裸鼠均作心、肝、肺、腎等主要臟器病理切片。結(jié)果：DHA組的移植瘤體積和重量小于對(duì)照組（P＜0．05），兩組裸鼠體質(zhì)量變化比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05），兩組裸鼠心、肝、肺、腎組織病理切片未見結(jié)構(gòu)異常。結(jié)論：雙氫青蒿素對(duì)腫瘤生長(zhǎng)有一定的抑制作用，未見明顯毒副作用。

裸小鼠；膽管癌；雙氫青蒿素；抑制作用

膽管癌是起源于膽管上皮細(xì)胞的惡性腫瘤，由于其解剖位置特殊，起病隱匿，確診時(shí)往往已到晚期，失去根治性切除機(jī)會(huì)，預(yù)后極差。大樣本研究顯示［1］，1377例未能行手術(shù)及放化療的膽管癌總體平均生存期3.9～7.8個(gè)月。對(duì)大多數(shù)患者而言，更重要的是獲得更好的姑息性療效［2］。因此，開發(fā)有效而毒性低的藥物對(duì)延長(zhǎng)患者生存期和提高生活質(zhì)量具有重要意義。青蒿素是從菊科植物黃花蒿中提取的一種含內(nèi)過氧化基團(tuán)的倍半萜內(nèi)酯化合物，國(guó)內(nèi)多個(gè)研究初步顯示青蒿素及其衍生物尤其是雙氫青蒿素（DHA）具有廣泛的抗腫瘤活性，我們的前期研究［3］也發(fā)現(xiàn)青蒿素對(duì)膽管癌細(xì)胞增殖有抑制作用。本研究利用雙氫青蒿素對(duì)膽管癌荷瘤裸鼠進(jìn)行干預(yù)，報(bào)道如下。

1 材料與方法

主要材料：Balb/c裸小鼠18只，購(gòu)于中山大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，4周齡、體質(zhì)量14～16g、SPF級(jí)。10%小牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司），0.25%胰酶（美國(guó)Sigma公司），RPMI-1640（Gibco公司），雙氫青蒿素（重慶華立武陵山制藥廠）。

細(xì)胞培養(yǎng)：QBC939人膽管癌細(xì)胞培養(yǎng)于含10%小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)瓶，置于恒溫37℃、飽和濕度、CO2濃度為5%的培養(yǎng)箱中作細(xì)胞增殖培養(yǎng)。當(dāng)培養(yǎng)的細(xì)胞總數(shù)經(jīng)細(xì)胞計(jì)數(shù)達(dá)5×107以上用胰酶消化、離心收集各瓶細(xì)胞制成1×107/mL細(xì)胞懸液實(shí)驗(yàn)備用。

荷瘤模型建立：每只裸鼠于背部皮下注射濃度為1×107/mL的細(xì)胞懸液0.15mL，約2～3周后取成瘤短徑0.6cm以上腫瘤形態(tài)相近的裸鼠14只。

分組：成瘤裸鼠14只，隨機(jī)分成兩組各7只。A組為空白對(duì)照，不作任何干預(yù)。B組為DHA組，用食用植物油溶解藥物制成DHA溶液，按每100mgDHA配以食用植物油13mL，采用灌胃給藥方式，劑量為80mg/kg。每天1次。

移植瘤體積測(cè)定：游標(biāo)卡尺分別測(cè)量種植瘤長(zhǎng)徑（a）和短徑（b），根據(jù)公式腫瘤體積V＝1/2長(zhǎng)徑×短徑2。每7天測(cè)量1次腫瘤長(zhǎng)、短徑并計(jì)算體積。

每隔7天測(cè)量裸鼠體質(zhì)量，觀察裸鼠的生長(zhǎng)、活動(dòng)情況及有無藥物的毒性情況。

標(biāo)本采集：用藥3周，末次給藥24h后頸椎脫臼法處死裸鼠，剝離出完整的移植瘤組織，測(cè)量移瘤裸瘤重量。

2 結(jié) 果

兩組裸鼠移植瘤體積比較見表1。

表1 兩組裸鼠移植瘤體積比較 （cm3，±s）

表1 兩組裸鼠移植瘤體積比較 （cm3，±s）

注：與對(duì)照組比較，△P＜0.05。

組別 第1天 第7天 第14天 第21天A組 0.178±0.0370.393±0.0660.979±0.1251.742±0.226 B組 0.202±0.0490.449±0.0910.876±0.1951.440±0.271△

兩組移植瘤質(zhì)量比較見表2。

表2 兩組移植瘤質(zhì)量比較

兩組裸鼠體質(zhì)量比較見表3。

表3 兩組裸鼠質(zhì)重比較 （g，±s）

表3 兩組裸鼠質(zhì)重比較 （g，±s）

組別 第1天 第7天 第14天 第21天A組 20.277±0.79020.563±0.95721.076±0.93721.521±0.932 B組 20.643±0.67520.973±0.64521.401±0.64621.724±0.620

3 討 論

目前體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)青蒿素及其衍生物抗腫瘤的主要途徑有：鐵離子介導(dǎo)的活性氧殺滅腫瘤細(xì)胞，細(xì)胞周期阻滯，誘導(dǎo)凋亡，抑制腫瘤血管新生，抑制腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移等。雙氫青蒿素是青蒿素類化合物體內(nèi)主要活性代謝物之一，也是目前所知的該類化合物中療效較好的抗腫瘤候選化合物［4］。陸金健等［5］報(bào)道DHA對(duì)體外培養(yǎng)的肝癌、胃癌、白血病、結(jié)腸癌、胰腺癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、骨肉瘤、橫紋肌肉瘤和神經(jīng)母細(xì)胞瘤等腫瘤增殖均具有一定的抑制作用。青蒿素及其衍生物在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，對(duì)正常細(xì)胞的毒性較小，劉奕明等［6］報(bào)道DHA靜滴在中國(guó)健康受試者體內(nèi)較安全。本實(shí)驗(yàn)在連續(xù)DHA用藥3周后實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的健康狀況基本無惡化，證實(shí)DHA較為安全。

［1］ JONGHA PARK，MYUNG-HW AN KIM，Kyu-pyo Kim ．Natural History and rognostic Factors of Advanced Cholangiocarcinoma without Surgery，Chemotherapy，or Radiotherapy：A Large-Scale Observational Study［J］．Gut Liver，2009，3（4）：298-305．

［2］ 黃志強(qiáng)．肝門部膽管癌外科治療效果有待提高［J］．臨床外科雜志，2006，14（2）：65-66．

［3］ 鄭夢(mèng)薇，邵志堅(jiān)．青蒿素對(duì)人膽管癌細(xì)胞的體外抑制作用［J］．藥物研究，2008，17（11）：15．

［4］ EFFERTH T． Willmar Schwabe Award 2006：antiplasmodial and antitumor activity of artemisininfrom bench to bedside［J］．Planta Med，2007，73（4）：299-309．

［5］ 陸金健，黃鳴清，陳修平，等．二氫青蒿素抗腫瘤作用及其機(jī)制研究進(jìn)展［J］．中國(guó)藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志，2012，26（3）：397-401．

［6］ 劉亦明，曾星，鄧遠(yuǎn)輝，等．單次靜滴雙氫青蒿素在健康人體的藥代動(dòng)力學(xué)和安全性［J］．中國(guó)臨床藥理學(xué)雜志，2009，25（3）：231-234．

Objective：To study the inhibition effect of dihydroartemisinin（DHA）on cholangiocarcinoma cell line QBC939 subcutaneous transplantation tumor. Method: 14 nude mice subcutaneous tumor models of human bile duct cancer were established，then were divided into 2 group evenly in random. The changes of volume and weight of both groups nude rice were detected every week. After 21 days，the nude mice were sacrificed to detect the weight of xenograft of each group. The main organs，such as the heart，the liver，the lung and the kidney of both groups nude mice were made into paraffin section. Result: The volume and weight of xenograft of DHA group was less than that of the control group（P＜0.05）. There was no statistical significance in weight changes between the two groups of nude mice（P＞0.05）. NO structural abnormalities were observed in pathological section of the heart, the liver，the lung and the kidney tissues of both groups nude mice. Conclusion：DHA has certain inhibition effect on tumor growth. No significant toxicity and side effect was observed.

Nude mouse；Cholangiocarcinoma；Dihydroartemisinin（DHA）；Inhibition effect

R273.58

B

1004-2814（2017）04-0345-02

2016-12-26

廣州市海珠區(qū)科技計(jì)劃項(xiàng)目：2014-yl-03