野生和林下種植金線蓮的體外抗氧化活性研究

闞永軍 趙 立 楊彬君 龐文生 胡 娟,*.福建省中醫藥研究院，福建 福州 350003；.福建中醫藥大學，福建 福州 350

野生和林下種植金線蓮的體外抗氧化活性研究

闞永軍1趙 立1楊彬君2龐文生2胡 娟1,2*
1.福建省中醫藥研究院，福建 福州 350003；2.福建中醫藥大學，福建 福州 350122

目的：研究野生和林下種植金線蓮的體外抗氧化活性。方法：采用紫外分光光度法，檢測野生金線蓮和林下種植金線蓮水提液及醇提液對DPPH自由基的清除能力。結果：野生金線蓮和林下種植金線蓮對DPPH自由基具有一定的清除作用，其活性均為水提液優于醇提液；野生金線蓮與林下種植金線蓮對DPPH自由基的清除活性總體差異不大。結論：林下種植可以作為緩解金線蓮資源緊張的重要途徑。

金線蓮；林下種植；抗氧化活性

金線蓮(Anoectochilusroxburghii)為蘭科開唇蘭屬(Anoectochilus)地生型多年生草本植物，是民間常用的珍稀草藥，享有“藥王”、“金草”等美稱。金線蓮以全草入藥，性平、味甘，具有清熱、涼血、解毒、祛風除濕的功效[1]?，F代研究發現金線蓮具有降低低密度脂蛋白的氧化易感性、清除活性氧自由基等抗氧化活性[2-3]。

金線蓮的種子發芽率低，生長繁殖也較為緩慢，近年來掠奪式的開采使金線蓮生長的植被遭到破壞，棲息地減少，導致金線蓮野生資源銳減，處于瀕危狀態[4]?！秶抑攸c保護野生植物名錄》(第二批)將其列為二級保護植物[5]。金線蓮的野生資源亟待保護，為了拯救瀕危植物，解決金線蓮資源緊張問題。設施栽培、林下種植和盆栽等人工栽培模式被應用于金線蓮的種植。林下種植金線蓮是以林地資源為依托，利用林木枝葉適當的遮蔭效果，形成有利于金線蓮生長的環境進行栽培種植[6]。其具有充分利用林地資源空間，不占用糧食用田，單位生產成本較低等特點，林下種植金線蓮正日益增多。本研究采用DPPH自由基清除法，以水和乙醇為提取溶劑，對野生和林下種植金線蓮進行比較分析，評價抗氧化活性的差異。

1 儀器與材料

1.1 儀器 UV-3200型紫外分光光度計(上海美譜達儀器有限公司)；AE240S電子分析天平(梅特勒-托利多上海有限公司)；L-530低速離心機(湖南湘儀實驗室儀開發有限公司)；KQ2200DE型數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；恒溫水浴鍋(上海精宏實驗設備有限公司)。

1.2 材料 野生金線蓮1號購于泉州葉之典生物科技有限公司；野生金線蓮2號購于福建虎伯寮生物集團有限公司；林下種植金線蓮1號產自仙游金線蓮林下種植示范基地，林下種植6個月，購于仙游中青生物科技有限公司；林下種植金線蓮2號產自武平梁野山林下種植金線蓮基地，林下種植6個月，購于福建金草生物集團股份有限公司；1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)購于美國Sigma公司；L-抗壞血酸(VC)、乙醇均為分析純，購于國藥集團化學試劑有限公司。

2 方法

2.1 金線蓮水提液的制備 稱取金線蓮5g，加水350mL浸泡10min，煎煮5min，過濾取上清液；藥渣加水200mL，繼續煎煮5min，過濾；第三次加少許水煎煮5min，最后合并濾液至500mL；即得濃度為0.01g/mL的金線蓮水提液。

2.2 金線蓮醇提液的制備 稱取金線蓮1g，加入30mL乙醇浸泡30min，使藥材與溶劑充分接觸，超聲提取2h后，離心(4000r/min，10min)，取上清液，藥渣重復提取2次，合并上清液，乙醇定容至100mL；即得濃度為0.01g/mL的金線蓮醇提液。對醇提液進行濃縮，分別取上述制備的金線蓮醇提液50mL，放入蒸發皿中，65℃水浴揮發濃縮，轉移至10mL容量瓶中乙醇定容，得到濃度為0.05g/mL的金線蓮醇提液。

2.3 清除自由基活性測定 分別取金線蓮水提取液0.0、300、600、900μL于具塞試管中，加水至1mL，分別加入DPPH溶液2mL，搖勻，得到金線蓮水提液濃度分別為0、1、2、3mg/mL的待測樣品溶液，室溫下避光靜置30min；分別取金線蓮醇提液0.0、300、600、900μL于具塞試管中，加無水乙醇至1mL，分別加入DPPH 2mL，搖勻，同樣得到金線蓮醇提液濃度分別為0、1、2、3mg/mL的待測樣品溶液，室溫下避光靜置30min。用2mL無水乙醇代替2mL DPPH溶液作空白對照，采在517nm波長處測定吸光度，以下式計算清除率。

DPPH清除率計算公式：DPPH清除率=[A0-(A1-A2)]/A0×100%

公式中Ao為空白對照吸光度；A1為樣品溶液吸光度；A2為樣品對照吸光度。

3 結果

3.1 野生和林下種植金線蓮水提液對DPPH自由基清除活性的影響 通過實驗對4個金線蓮樣品水提液的DPPH自由基清除活性進行測定，結果見表1。在實驗研究的質量濃度范圍內，4種樣品對DPPH自由基的清除能力隨質量濃度的增大而上升。林下種植金線蓮與野生金線蓮水提液對DPPH自由基的清除活性相比相差不大，其IC50值均在2～3mg/mL。

表1 野生和林下種植金線蓮水提液對DPPH自由基清除活性的影響 (n=4)

3.2 野生和林下種植金線蓮醇提液對DPPH自由基清除活性的影響 通過實驗對4個金線蓮樣品醇提液的DPPH自由基清除活性進行測定，結果見表2。在實驗研究的質量濃度范圍內，4種樣品醇提液對DPPH自由基的清除能力隨質量濃度的增大而上升。林下種植金線蓮醇提液對DPPH自由基的清除活性優于野生金線蓮醇提液，但兩者IC50值均大于10mg/mL。

表2 野生和林下種植金線蓮醇提液對DPPH自由基清除活性的影響 (n=4)

野生金線蓮和林下種植金線蓮水提液及醇提液均具有一定的DPPH自由基清除活性，且呈現一定的劑量依賴性。野生金線蓮和林下種植金線蓮水提液對DPPH自由基清除活性的IC50分別為2.28、2.95、2.56和2.15mg/mL；其醇提液分別為16.68、15.05、10.82和11.09mg/mL。野生金線蓮和林下種植金線蓮對DPPH自由基清除活性均為水提液優于醇提液。

4 討論

4.1 提取時間的選擇 實驗對金線蓮不同提取時間得水提液的DPPH自由基清除率進行比較，提取時間依次為1、3、5、10、15、20、30、40min。結果發現1～15min內其對DPPH自由基清除率逐漸增加。提取時間為15min時其清除率最高，當金線蓮濃度為2mg/mL時，其清除率為42.02%。提取時間超過15min后DPPH自由基清除率逐漸降低。金線蓮在長時間的煎煮時，可能使其抗氧化活性成分被破壞。因此，以金線蓮作為茶飲時，其煎煮時間不宜過長，以15min為宜。

4.2 實驗濃度的選擇 實驗過程中金線蓮水提液濃度在3mg/mL時，其對DPPH自由基清除率已達到50%，而金線蓮醇提液的清除率僅為15%左右，對其進行濃縮。當金線蓮醇提液濃度在15mg/mL時，其對DPPH自由基清除率才高于50%。因此，金線蓮醇提液的實驗濃度為1～15mg/mL。由此也可以看出金線蓮水提液清除DPPH自由基效果高于醇提液，這也符合金線蓮在民間以水煎作為茶飲的食用習慣。并且其水煎液色澄明味清香，受到廣大人民的青睞。實驗結果為金線蓮的資源開發提供一定理論依據。

隨著金線蓮健康產業的發展，其需求量不斷上升。林下種植金線蓮可以充分利用林地資源空間，不占用糧食用田，降低單位生產成本。有利于金線蓮實現規?；?，產業化的發展。該研究發現野生金線蓮與林下種植金線蓮對DPPH自由基的清除活性總體差異不大。林下種植可以作為緩解金線蓮資源緊張的重要途徑和手段，同時也有利于其野生資源的保護。實驗結果為金線蓮林下種植產業的發展提供了一定的依據和基礎。

[1]王國強. 全國中草藥匯編[M]. 3版.北京：人民衛生出版社, 2014: 594.

[2]張春妮，許國平，汪俊軍，等. 金線蓮體外抑制LDL氧化的實驗研究[J]. 醫學研究生學報, 2006(02): 117-120.

[3]林麗清，黃麗英，鄭艷潔，等. 金線蓮多糖的提取及清除氧自由基作用的研究[J]. 福建中醫學院學報, 2006, 16(5): 37-39.

[4]邵清松，周愛存，黃瑜秋，等. 不同移栽條件對金線蓮組培苗成活率及生長的影響[J]. 中國中藥, 2014(6): 955-958.

[5]洪琳，邵清松，周愛存，等. 金線蓮產業現狀及可持續發展對策[J]. 中國中藥, 2016(3): 553-558.

[6]邵清松，葉申怡，周愛存，等. 金線蓮種苗繁育及栽培模式研究現狀與展望[J]. 中國中藥, 2016(2): 160-166.

Comparison of Antioxidant Activity of Wild and Understory PlantAnoectochilusroxburghii

KAN Yongjun1ZHAO Li1YANG Binjun2PANG Wensheng2HU Juan1,2*

1. FuJian Academy of Traditional Chinese Medicine, Fuzhou 350003, China;2. FuJian University of Traditional Chinese Medicine, Fuzhou 350122, China;

Objective To research the antioxidant activities in vitro of wild and understory plantAnoectochilusroxburghii. Methods To detect the scavenging effect on DPPH· ability of water and alcohol extraction of wild and understory plantAnoectochilusroxburghiiby UV. Results Both wild and understory plantingAnoectochilusroxburghiihave the ability of scavenging effect on DPPH·. The activity of scavenging effect on DPPH of water extraction is better than alcohol extraction. The scavenging effect on DPPH· ability of wild and understory plantAnoectochilusroxburghiiis semblable. Conclusion Planting mode in forest can be used as an important way to alleviate the shortage ofAnoectochilusroxburghii.

Anoectochilusroxburghii; Understory Plant; Antioxidant Activity

中藥及健康產品研究開發專業技術服務平臺(14C26243501795)。

闞永軍(1990-)，男，漢族，碩士，研究實習員，研究方向為中藥化學。E-mail：kanyongjun@126.com

胡娟(1962-)，女，土家族，博士，教授，研究方向為中藥化學。E-mail：huj@fjtcm.edu.cn

R284

A

1007-8517(2017)06-0015-03

2017-01-13 編輯：穆麗華)