芐達賴氨酸脂質體的制備

段竣鵬，王洪光

(青島科技大學化工學院，山東 青島 266042)

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芐達賴氨酸脂質體的制備

段竣鵬，王洪光*

(青島科技大學化工學院，山東 青島 266042)

以芐達賴氨酸、大豆卵磷脂、膽固醇為原料制備了芐達賴氨酸脂質體。以包封率為主要指標，選取藥脂比、超聲時間、水相pH值和孵育溫度4個因素進行正交實驗優(yōu)化制備工藝，用紫外分光光度計測定包封率，用粒度和Zeta電位分析儀測定所制備脂質體的粒徑分布及Zeta電位。確定最佳制備工藝條件為：藥脂比 1∶5(g∶g)、超聲時間15 min、水相pH值5、孵育溫度60 ℃，在該條件下所制得的3批芐達賴氨酸脂質體的平均包封率為81.54%，平均粒徑為(99.85±9.60) nm，平均Zeta電位為(-30.6±1.8) mV，體外釋放實驗證明釋放速度慢于市售制劑。表明所制備的芐達賴氨酸脂質體包封率高、穩(wěn)定性好。

芐達賴氨酸；脂質體；包封率；粒徑分布

藥物脂質體(liposome)的基本結構是由磷脂包裹主藥組成，該結構內(nèi)部為被包封的藥物，磷脂分子定向排列于四周。脂質體在藥學領域應用廣泛，被磷脂所包裹的特殊結構使其擁有靶向性和細胞相容性的優(yōu)點。藥物包裹于磷脂分子層之中，減少與介質的接觸，因而增強了藥物穩(wěn)定性、降低了藥物毒性并且?guī)砹司忈屝Ч鸞1]。

芐達賴氨酸(L-賴氨酸乙酸鹽)是一種眼科常用藥，能夠預防和治療早期老年性白內(nèi)障等疾病。白內(nèi)障是糖尿病患者最常見并發(fā)癥，發(fā)病原因由于醛糖還原酶在晶狀體中使葡萄糖轉化。芐達賴氨酸可以抑制人體多個器官中醛糖還原酶的活性，從而達到治療白內(nèi)障的療效。但市售的芐達賴氨酸滴眼液，在使用時對眼睛有強烈的刺激性并且需要一日3次，使用不便。將芐達賴氨酸制成脂質體，能降低其刺激性又帶來適當?shù)木忈屝Ч黾踊颊呤褂玫囊缽男訹2]。作者以包封率為指標，采用正交實驗優(yōu)化芐達賴氨酸脂質體的制備工藝條件，并對優(yōu)化工藝條件下所制備的脂質體的平均粒徑和Zeta電位進行測定，同時與市售滴眼液比較緩釋效果，為下一步制備滴眼液打下基礎。

1 實驗

1.1 試劑與儀器

滴眼液，市售。

芐達賴氨酸(含量99%)，武漢天盟化工有限責任公司；大豆卵磷脂(化學純)、磷酸氫二鈉(含量99%)，天津博迪化工股份有限公司；膽固醇、磷酸二氫鉀(分析純)，國藥集團化學試劑有限公司；氯仿(分析純)，煙臺三和化學試劑有限公司；甲醇(色譜純)，天津科密歐化學試劑有限公司；磷酸二氫鈉(含量99%)，天津登科化學試劑有限公司。

UV1000型紫外分光光度計，北京萊伯泰科有限公司；IT-09A5型恒溫磁力攪拌器，上海一恒科學儀器有限公司；Zetasizer Nano ZS90型納米粒度和Zeta電位及分子量分析儀，英國馬爾文儀器有限公司；RE52CS型旋轉蒸發(fā)器、S-220型恒溫水浴鍋，上海亞榮生化儀器廠；透析袋，國藥集團化學試劑有限公司。

1.2 方法

1.2.1 芐達賴氨酸脂質體的制備

分別稱取芐達賴氨酸、大豆卵磷脂、膽固醇于燒杯中，加氯仿，在磁力攪拌器上攪拌至溶液呈透明狀態(tài)。將pH值 8.0的磷酸鹽緩沖液緩慢加入到燒杯中，超聲，溶液呈乳白色乳液。于旋轉蒸發(fā)儀上旋蒸出現(xiàn)凝膠狀薄膜，然后用磷酸鹽緩沖液調(diào)節(jié)至適宜濃度，轉移后在60 ℃水浴鍋中孵育1 h，過0.22 μm濾膜3次得芐達賴氨酸脂質體[3]。

1.2.2 標準曲線的繪制

精密稱定0.612 g芐達賴氨酸置于100 mL容量瓶中，加少量蒸餾水超聲溶解，定容至100 mL。移取1 mL到25 mL容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度。分別取3 mL、4 mL、5 mL、6 mL、7 mL和8 mL稀釋液置于50 mL容量瓶中，用蒸餾水定容、搖勻，于308 nm處測定吸光度(A)。以吸光度(A)對濃度(c)進行線性回歸，擬合后得回歸方程A=0.0117c+0.0312，R2=0.9994[4]。

1.2.3 正交實驗設計

根據(jù)前期單因素實驗結果，選取藥脂比(A)、超聲時間(B)、水相pH值(C)和孵育溫度(D)為考察因素，每個因素取3個水平進行正交實驗，其因素與水平見表1。

表1 正交實驗的因素與水平

Tab.1 The factors and levels of orthogonal experiment

1.2.4 包封率測定

取適量新制芐達賴氨酸脂質體溶液置于離心管中，于12 000 r·min-1下離心10 min。 取適量上清液進行紫外測定，同時取沉淀物適量，加甲醇超聲破乳，測其吸光度。其中上層是沒有被包封的芐達賴氨酸，下層沉淀物為包封的芐達賴氨酸。包封率按下式計算[5]：

1.2.5 藥物體外釋放實驗

取市售滴眼液和自制脂質體各7 mL，置于透析袋中，將兩個透析袋分別放入裝有500 mL蒸餾水的燒杯中，將燒杯放于磁力攪拌器上，以30 r·min-1的速度攪拌，分別在1 h、2 h、4 h、6 h、8 h和12 h時取樣5 mL (每次取樣后立即補充5 mL蒸餾水)，用紫外分光光度計測定樣品的吸光度，并計算累積藥物釋放度，以時間為橫坐標、累積藥物釋放度為縱坐標繪制藥物的體外釋放曲線。

2 結果與討論

2.1 回收率實驗

精密稱取處方量80%、100%、120%的芐達賴氨酸，向其中加入處方量空白脂質體溶液，混合均勻后，甲醇超聲破乳，蒸餾水定容后，測定芐達賴氨酸量。經(jīng)計算，3組實驗的回收率分別為(99.3±1.4)%、(101.1±3.1)%、(100.3±2.5)%(n=3)。表明，所選膜材大豆卵磷脂、膽固醇等輔料對主藥無影響，回收率符合實驗要求。

2.2 正交實驗結果與分析(表2)

由表2可知，各因素對包封率的影響順序為：B>C>D>A，最優(yōu)組合為A1B3C3D3，即藥脂比1∶5(g∶g)、超聲時間15 min、水相pH值5、孵育溫度60 ℃。

表2 正交實驗結果與分析

Tab.2 Results and analysis of orthogonal experiment

pH值梯度法制備脂質體是利用脂質體內(nèi)外水相中H+梯度進行載藥，合理pH值為5.0～7.0。按《中國藥典》(2010版)中的方法測定芐達賴氨酸的pH值為6.0，呈弱酸性。因此，選擇pH值梯度法制備脂質體[6]。

按最優(yōu)工藝條件制備3批芐達賴氨酸脂質體樣品，測試其包封率分別為80.25%、82.05%、82.33%，平均包封率為81.54%，達到脂質體的包封率標準[7]。

2.3 脂質體的測試

2.3.1 平均粒徑

芐達賴氨酸脂質體的納米粒徑分布圖如圖1所示。

圖1 納米粒徑分布圖Fig.1 Nano particle size distribution

由圖1可以看出，芐達賴氨酸脂質體的粒徑分布符合正態(tài)分布，3批芐達賴氨酸脂質體樣品的平均粒徑為(99.85±9.60)nm。

2.3.2 Zeta 電位(圖2)

圖2 Zeta 電位分布圖Fig.2 Zeta potential distribution

Zeta電位常常用來衡量脂質體系統(tǒng)的穩(wěn)定性，一般認為其數(shù)值介于-30～50 mV之間狀態(tài)較穩(wěn)定。由圖2可以看出，所得的芐達賴氨酸脂質體的平均 Zeta電位為(-30.6±1.8) mV，符合穩(wěn)定性標準[8]。

2.3.3 藥物體外釋放(圖3)

圖3 體外釋放曲線Fig.3 The release curves of bendazac lysine in vitro

由圖3可以看出，市售滴眼液的體外釋放速度要明顯快于自制的脂質體，說明制備的芐達賴氨酸脂質體具有良好的緩釋效果，從而可以減少滴眼液的使用次數(shù)，降低藥物的刺激性。

3 結論

以芐達賴氨酸、大豆卵磷脂、膽固醇為原料制備了芐達賴氨酸脂質體。以包封率為主要指標，選取藥脂比、超聲時間、水相pH值和孵育溫度4個因素進行正交實驗優(yōu)化制備工藝，用紫外分光光度計測定包封率，用粒度和Zeta電位分析儀測定所制備脂質體的粒徑分布及Zeta電位。確定最佳制備工藝條件為：藥脂比 1∶5(g∶g)、超聲時間15 min、水相pH值5、孵育溫度60 ℃，在該條件下所制得的3批芐達賴氨酸脂質體的平均包封率為81.54%，平均粒徑為(99.85±9.60)nm，平均Zeta電位為(-30.6±1.8) mV，體外釋放實驗證明釋放速度慢于市售制劑。表明所制備的芐達賴氨酸脂質體包封率高、穩(wěn)定性好。

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Preparation of Bendazac Lysine Liposome

DUAN Jun-peng,WANG Hong-guang*

(CollegeofChemicalEngineering,QingdaoUniversityofScienceandTechnology,Qingdao266042,China)

Bendazac lysine liposome was prepared using bendazac lysine，soybean lecithin，and cholesterol as raw materials.With the encapsulation rate as the main index，the preparation process were optimized by an orthogonal experiment with four factors，i.e.，ratio of drug to lipid，ultrasonic time，pH value of water phase and incubation temperature.The encapsulation rate of the liposome was detected by UV spectrophotometry，and the particle size distribution and Zeta potential were determined by a particle size and Zeta potential analyzer.The optimal preparation conditions were as follows: ratio of drug to lipid of 1∶5(g∶g)，ultrasonic time of 15 min，pH value of water phase of 5，and incubation temperature of 60 ℃.Under the optimal conditions，the average encapsulation rate of three batches bendazac lysine liposomes was 81.54%，the average particle size was (99.85±9.60) nm and the average Zeta potential was (-30.6±1.8) mV.Release experimentinvitroshowed the release rate was slower than that of commercial preparations.The liposome has high encapsulation rate and good stability.

bendazac lysine；liposome；encapsulation rate；particle size distribution

2016-11-19

段竣鵬(1992-)，男，山東青島人，碩士研究生，研究方向：緩控釋制劑和新劑型研究，E-mail：13001662006@163.com；通訊作者：王洪光，教授，E-mail:whongg1@yeah.net。

10.3969/j.issn.1672-5425.2017.05.013

R988.1

A

1672-5425(2017)05-0058-03

段竣鵬，王洪光.芐達賴氨酸脂質體的制備[J].化學與生物工程，2017，34(5)：58-60,70.