武漢地區宮頸感染人乳頭瘤病毒患者年齡分布及感染類型特征

肖 晗，孫 紅，向飛艷，夏 倩，劉秀珍，向 贇

(華中科技大學同濟醫學院附屬武漢兒童醫院 武漢市婦幼保健院, 湖北 武漢 430016)

·論著·

武漢地區宮頸感染人乳頭瘤病毒患者年齡分布及感染類型特征

肖 晗，孫 紅，向飛艷，夏 倩，劉秀珍，向 贇

(華中科技大學同濟醫學院附屬武漢兒童醫院 武漢市婦幼保健院, 湖北 武漢 430016)

目的 了解武漢地區宮頸感染人乳頭瘤病毒(HPV)患者年齡分布、HPV感染亞型，為HPV感染及宮頸癌的預防和治療提供科學依據。方法 對2015年1月—2016年3月武漢市婦女兒童醫療保健中心婦產科送檢的9 915份宮頸刷取物標本進行HPV基因分型檢測(21種亞型)，對1 732例HPV陽性病例的臨床數據進行統計分析。結果 ≤25、26～、36～、46～和≥56歲年齡組HPV陽性率分別為22.15%、15.90%、17.04%、19.97%和17.57%，各組差異具有統計學意義(χ2=36.587，P<0.01)，≤25和46～歲年齡組的陽性率均高于其他各組。不同年齡組患者單一感染和多重感染率比較，差異均有統計學意義(χ2值分別為14.39、36.51，均P<0.05)，單一感染以46～和≤25組最高，分別為15.41%、15.24%；多重感染以≤25和≥56年齡組最高，感染率分別為6.90%和5.86%。單一感染和多重感染所占比率分別為 75.58%、24.42%，單一感染以HPV高危亞型為主(84.34%)，多重感染以高危-高危復合型和高危-低危復合型為主，分別占60.52%、38.77%。以單一感染為主導的有HPV高危亞型33、68、31、16型和HPV低危亞型11型，其所致單一感染/多重感染的比值分別為3.13、2.03、1.71、1.67和2.00。結論 武漢地區宮頸 HPV感染率以≤25和46～歲年齡組較高，單一感染和多重感染HPV各亞型分布具有差異。

人乳頭瘤病毒； 宮頸癌； 多重感染； 導流雜交技術

[Chin J Infect Control，2017，16(5)：399-403]

人乳頭瘤病毒(humanpapillomavirus，HPV)為嗜上皮病毒，已發現并鑒定出100余種亞型，其中40余種能侵入人體皮膚黏膜，導致其復層鱗狀上皮增殖而引發良性或惡性病變。根據不同HPV亞型感染致癌危險性的高低，可將HPV分為低危型和高危型。持續性的高危型HPV感染被認為是女性宮頸癌最主要危險因素[1]，絕大多數宮頸癌組織均可檢測到高危型HPV。宮頸癌的腫瘤類型，如鱗癌或腺癌，與感染的HPV亞型有關[2-3]。HPV亞型與宮頸癌的預后相關[4-9]，不過此結論目前還存在爭議[10-11]。因此，HPV感染的檢測及亞型鑒定對預防宮頸癌的發生,以及制定相應的防治措施具有重要意義。不同地區、人群有各自HPV優勢流行亞型和感染類型特征[12]。本研究將2015年1月—2016年3月武漢市婦女兒童醫療保健中心婦產科宮頸HPV陽性患者分型結果報告如下，旨在為本地區防治女性HPV感染和宮頸癌提供科學依據。

1 資料與方法

1.1 資料 2015年1月—2016年3月武漢市婦女兒童醫療保健中心接受HPV分型檢測的女性患者9 915例，其中1 732例HPV陽性。

1.2 方法

1.2.1 標本采集 標本于非月經期內采集，采集前3 d無陰道用藥或陰道沖洗，24 h內無性行為。采集時充分暴露宮頸，宮頸刷置于宮頸口處輕搓并順時針旋轉5圈，小心取出宮頸刷，裝入加有專用細胞保存液的取樣管中，4℃或-20℃保存，2周內完成檢測。

1.2.2 試劑與儀器 人乳頭瘤病毒分型檢測試劑盒(PCR+膜雜交法)由廣東潮州凱普生物化學有限公司生產。該試劑盒由HPV核酸擴增試劑、HPV雜交檢測試劑等組成，采用基因擴增技術及導流雜交原理，對15種高危型(16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68)和6種低危型(6、11、42、43、44、CP8304)的HPV亞型進行基因分型檢測。核酸擴增使用美國ABI公司7500型核酸擴增儀，核酸雜交使用凱普公司配套的醫用核酸分子快速雜交儀(HybriMax)。

1.2.3 檢測方法 嚴格按照試劑說明書依次進行DNA分離提取、PCR擴增、PCR產物雜交、顯色和結果判定等實驗。陰性對照點為陰性，Biotin點和IC點為陽性時，即可根據膜條HPV基因亞型分布圖，判讀對應點所代表的HPV亞型為陽性。

1.3 統計學分析 應用SPSS 20.0統計軟件對計數資料進行χ2檢驗，P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同年齡組HPV陽性率 將9 915例受檢者按照年齡大小分為≤25、26～、36～、46～和≥56歲共5個年齡組，各年齡組HPV陽性率分別為22.15%、15.90%、17.04%、19.97%和17.57%，各組相比，差異具有統計學意義(χ2=36.587，P<0.001)，≤25和46～歲年齡組患者陽性率分別為22.15%、19.97%，均高于其他各組。≤25、26～、36～、46～和≥56歲各年齡組陽性病例占總陽性病例的比率分別為20.38%、48.67%、20.61%、8.08%和2.25%，陽性病例主要集中在26～歲年齡組，其次是36～和≤25歲年齡組。不同年齡組患者單一感染和多重感染率比較，差異均有統計學意義(χ2值分別為14.39、36.51，均P<0.05)，單一感染以46～和≤25組最高，分別為15.41%、15.24%；多重感染以≤25和≥56年齡組最高，分別為6.90%和5.86%。見表1。

表1 不同年齡組HPV陽性率及感染類型

Table 1 HPV positive rates and infection types in different age groups

年齡(歲)檢測例數陽性例數陽性率(%)單一感染多重感染≤25159435322.15243(15.24)110(6.90)26～530384315.90646(12.18)197(3.71)36～209535717.04286(13.65)71(3.39)46～70114019.97108(15.41)32(4.56)≥562223917.5726(11.71)13(5.86)合計9915173217.471309(13.20)423(4.27)

2.2 HPV單一感染和多重感染情況 不同年齡組單一感染和多重感染的構成比比較，差異有統計學意義(χ2=15.033，P=0.005)。單一感染以HPV高危亞型為主，各年齡組所占比率為76.92%～86.53%。多重感染病例以高危-高危復合型(HR-HR)和高危-低危復合型(HR-LR)為主，不同年齡組所占比率為分別為23.08%～63.96%、35.46%～76.92%,僅檢測出3例(0.71%)低危-低危復合型(LR-LR)。見表2。

2.3 單一感染和多重感染HPV各亞型分布 單一感染和多重感染HPV各亞型分布比較，差異具有統計學意義(χ2=62.427，P<0.01)。以單一感染為主導的有HR-HPV 33、68、31、16型和LR-HPV 11型，其所致單一感染/多重感染的比值分別為3.13、2.03、1.71、1.67和2.00。見表3。

表2 1 732 例HPV陽性患者單一感染和多重感染情況

HR:為HPV高危亞型；LR：為HPV低危亞型

表3 HPV各亞型的感染類型分布

3 討論

HPV是一種球形雙鏈環狀DNA病毒，可引發皮膚黏膜的復層鱗狀上皮增殖，導致良性病變，如尋常疣、生殖器疣等，同時HPV也與多種惡性病變，如宮頸癌、乳腺癌[13]、肛門癌、結直腸癌[14]和膀胱癌[15]的發生緊密相關。良性病變多由低危型HPV引起，包括6、11、42、43、44等亞型；惡性病變則主要與高危型HPV相關，包括16、l8、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68等亞型。研究[16-17]證明，宮頸感染高危型HPV者患宮頸癌的風險是未感染者的50倍。

宮頸癌是三大高發的女性惡性腫瘤之一[18]，嚴重威脅著全球女性的健康和生命。從HPV感染到發展為浸潤性宮頸癌通常需經歷8～10年或更長時間，分為潛伏期或亞臨床期、臨床癥狀期和HPV相關性腫瘤病變期，是一個緩慢而漸進的過程。70%～90%的女性宮頸HPV感染是一過性的，無明顯臨床癥狀，在臨床上又稱之為潛伏期或亞臨床期。被感染個體的免疫系統一般可在6～24個月內清除掉HPV病毒顆粒；若被感染個體的免疫力低下時，HPV病毒顆粒可造成宮頸的持續性感染，如高危型HPV病毒基因整合到宮頸上皮細胞，被感染的細胞存活并增生活躍，分化不良，導致非典型增生，有可能發展為癌前病變，即不同級別的宮頸上皮內瘤變(CIN)。CIN可持續數年，其轉歸可恢復正常，也可進一步發展為原位癌乃至浸潤癌。潛伏期、亞臨床感染期都可以檢測到HPV，因此，對高危型HPV感染的早期檢測和早期治療，阻斷CIN的形成，對宮頸癌的防治具有重要意義。

以往研究[19]表明，女性宮頸HPV感染狀況具有顯著的年齡特征。本研究中≤25和46～歲年齡組陽性率高于其他各組，表明武漢地區女性宮頸HPV感染率的高峰并不在26～45歲的性活躍期，而是存在著兩個年齡高峰，低齡組和高齡組的感染率更高，與何彩華等[20]的研究結果基本一致，而黃澤棋等[21]研究表明，廣東地區的男性HPV感染高峰則出現在20～40歲的性活躍期，提示HPV感染的兩性年齡特征可能不同。另外，武漢地區女性宮頸HPV多重感染率的高峰也分布在年齡軸的兩端，多重感染以≤25和≥56年齡組最高，感染率分別為6.90%和5.86%，高于中間各年齡組，此結果與張利婭等[22]報道的浙江地區結果相似。HPV感染率及多重感染比例的高峰分布于年齡軸的兩端，提示HPV的感染并不主要與性活躍程度有關，而更多的與性活動的衛生狀況以及自身宮頸局部免疫力狀態有關[23]，當然，該結論也可能與本研究納入人群為醫院婦產科的就診患者而非體檢人群有關。

不同亞型HPV的致癌能力有明顯差異，研究者認為，宮頸癌主要由HPV16與HPV18引起[24]，更多專家認為同一高危亞型HPV的持續性感染才是發生宮頸癌最重要的危險因素，也有專家認為HPV多重感染可能增加持續感染的風險。本研究比較了不同HPV亞型引起的單一感染與多重感染的比例，發現該比例在不同HPV亞型具有差異，如高危型中的33型、68型、31型、16型和低危型中的11型引起單一亞型感染比例更高，此結論暫未在國內的其他文獻中報道。因此，在評估不同亞型HPV的致癌能力以及開發和接種HPV疫苗[25]時應充分考慮不同感染類型因素的影響。

目前，宮頸感染HPV病毒與宮頸癌相關已達成廣泛的共識，HPV病毒檢測在國內外的宮頸癌篩查指南中均得到了普遍的重視[26-28]，HPV核酸分型檢測從宮頸癌篩查的補充手段逐漸成為宮頸癌初篩的首選方法之一。HPV核酸分型檢測技術如何在宮頸癌篩查應用中實現最大的效益和效率，達到既能有效篩查又不過度檢查，仍然是需要深入研究和探討的問題。尤其是隨著HPV疫苗的廣泛應用，HPV檢測在宮頸癌中的篩查策略也應進行相應的調整，使得這一檢測技術以更經濟更高效的方式保護女性宮頸的健康[29-30]。

本研究采用HPV核酸分型檢測技術檢測了大樣本量的武漢地區女性宮頸的HPV病毒感染狀況，為制定本地區的篩查策略提供了參考依據。

[1] Roden R, Wu TC. How will HPV vaccines affect cervical cancer[J]. Nat Rev Cancer, 2006, 6(10): 753-763.

[2] Clifford GM, Smith JS, Plummer M, et al.Humanpapillomavirustypes in invasive cervical cancer worldwide: a meta-analysis[J]. Br J Cancer, 2003, 88(1): 63-73.

[3] Lai CH, Chang CJ, Huang HJ, et al. Role ofhumanpapillomavirusgenotype in prognosis of early-stage cervical cancer undergoing primary surgery[J]. J Clin Oncol, 2007, 25(24): 3628-3634.

[4] Burger RA, Monk BJ, Kurosaki T, et al.Humanpapillomavirustype 18: association with poor prognosis in early stage cervical cancer[J]. J Natl Cancer Inst, 1996, 88(19): 1361-1368.

[5] Wright JD, Li J, Gerhard DS, et al.Humanpapillomavirustype and tobacco use as predictors of survival in early stage cervical carcinoma[J]. Gynecol Oncol, 2005, 98(1): 84-91.

[6] Schwartz SM, Daling JR, Shera KA, et al.Humanpapillomavirusand prognosis of invasive cervical cancer: a population-based study[J]. J Clin Oncol, 2001, 19(7): 1906-1915.

[7] de Cremoux P, de la Rochefordière A, Savignoni A, et al. Different outcome of invasive cervical cancer associated with high-risk versus intermediate-risk HPV genotype[J]. Int J Cancer, 2009, 124(4): 778-782.

[8] Huang LW, Chao SL, Hwang JL.Humanpapillomavirus-31-related types predict better survival in cervical carcinoma[J]. Cancer, 2004, 100(2): 327-334.

[9] Wang CC, Lai CH, Huang HJ, et al. Clinical effect ofhumanpapillomavirusgenotypes in patients with cervical cancer undergoing primary radiotherapy[J]. Int J Radiat Oncol Biol Phys, 2010, 78(4): 1111-1120.

[10] Lau YM, Cheung TH, Yeo W, et al. Prognostic implication ofhumanpapillomavirustypes and species in cervical cancer patients undergoing primary treatment[J]. PLoS One, 2015, 10(4): e0122557.

[11] Cuschieri K, Brewster DH, Graham C, et al. Influence of HPV type on prognosis in patients diagnosed with invasive cervical cancer[J]. Int J Cancer, 2014, 135(11): 2721-2726.

[12] Clifford GM, Gallus S, Herrero R, et al. Worldwide distribution ofhumanpapillomavirustypes in cytologically normal women in the International Agency for Research on Cancer HPV prevalence surveys: a pooled analysis[J]. Lancet, 2005, 366(9490): 991-998．

[13] S?gaard M, Farkas DK, Ording AG, et al. Conisation as a marker of persistenthumanpapillomavirus infection and risk of breast cancer[J]. Br J Cancer, 2016, 115(5): 588-591.

[14] Ranjbar R, Saberfar E, Shamsaie A, et al. The aetiological role ofhumanpapillomavirusin colorectal carcinoma: an Iranian population-based case control study[J]. Asian Pac J Cancer Prev, 2014, 15(4): 1521-1525.

[15] Kim SH, Joung JY, Chung J, et al. Detection ofhumanpapillomavirusinfection and p16 immunohistochemistry expression in bladder cancer with squamous differentiation[J]. PLoS One, 2014, 9(3): e93525.

[16] Bosch FX, Manos MM, Muoz N, et al. Prevalence ofhumanpapillomavirusin cervical cancer: a worldwide perspective. International biological study on cervical cancer(IBSCC) Study Group[J]. J Natl Cancer Inst, 1995, 87(11): 796-802.

[17] Bosch FX, Lorincz A, Muoz N, et al. The causal relation betweenhumanpapillomavirusand cervical cancer[J]. J Clin Pathol, 2002, 55(4): 244-265.

[18] Bernard E, Pons-Salort M, Favre M, et al. Comparinghumanpapillomavirusprevalences in women with normal cytology or invasive cervical cancer to rank genotypes according to their oncogenic potential: a meta-analysis of observational studies[J]. BMC Infect Dis, 2013, 13: 373.

[19] 李發濤，廖燦，李焱，等. 人乳頭狀瘤病毒感染婦女的年齡及其亞型分析[J]. 中華醫院感染學雜志，2014，24(17): 4345-4237.

[20] 何彩華，曾祥興. 人乳頭瘤病毒基因型檢測及其人群分布特征[J]. 國際免疫學雜志，2014，37(6): 549-553.

[21] 黃澤棋，謝偉賢，陳啟然，等. 223例男性尖銳濕疣組織HPV基因分型檢測及分析[J]. 廣東醫學，2014，35(7): 1087-1089.

[22] 張利婭，鄭書發，楊大干，等. 浙江省11家哨點醫院婦科患者人乳頭瘤病毒感染情況及流行趨勢[J]. 中華臨床感染病雜志，2014，7(3): 193-196.

[23] Chaturvedi AK, Katki HA, Hildesheim A, et al.Humanpapillomavirusinfection with multiple types: pattern of coinfection and risk of cervical disease[J]. J Infect Dis, 2011, 203(7): 910-920.

[24] Guo YL, You K, Qiao J, et al. Natural history of infections with high-risk HPV in Chinese women with abnormal cervical cytology findings at baseline[J]. Int J Gynaecol Obstet, 2010, 110(2): 137-140.

[25] Giuliano AR, Tortolero-Luna G, Ferrer E, et al. Epidemiology ofhumanpapillomavirusinfection in men, cancers other than cervical and benign conditions[J]. Vaccine, 2008, 26(Suppl 10): K17-K28.

[26] Massad LS, Einstein MH, Huh WK, et al. 2012 updated consensus guidelines for the management of abnormal cervical cancer screening tests and cancer precursors [J]. Obstet Gynecol, 2013, 121(4): 829-846.

[27] World Health Organization. Comprehensive cervical cancer control: a guide to essential practice[M]. 2nd ed, 2014.

[28] Huh WK, Ault KA, Chelmow D, et al. Use of primary high-riskhumanpapillomavirustesting for cervical cancer screening: Interim clinical guidance[J]. Gynecol Oncol, 2015, 136(2): 178-182.

[29] Giorgi Rossi P, Carozzi F, Federici A, et al. Cervical cancer screening in women vaccinated againsthumanpapillomavirusinfection: Recommendations from a consensus conference[J]. Prev Med, 2017, 98: 21-30.

[30] Kim JJ, Burger EA, Sy S, et al. Optimal cervical cancer screening in women vaccinated againsthumanpapillomavirus[J]. J Natl Cancer Inst, 2017, 109(2): 1-9.

(本文編輯：左雙燕)

Age distribution and infection types ofhumanpapillomaviruscervical infection in patients in Wuhan region

XIAOHan,SUNHong,XIANGFei-yan,XIAQian,LIUXiu-zhen,XIANGYun

(WuhanMedicalandHealthCenterforWomenandChildren,WuhanChildren’sHospital,TongjiMedicalCollegeofHuazhongUniversityofScienceandTechnology,Wuhan430016,China)

Objective To investigate the age distribution and types ofhumanpapillomavirus(HPV) cervical infection in patients in Wuhan region, so as to provide scientific basis for the prevention and treatment of HPV infection and cervical cancer. Methods 9 915 exfoliated cervical cell specimens from patients in Wuhan Medical and Health Center for Women and Children between January 2015 and March 2016 were performed HPV genotyping (21 subtypes), clinical data of 1 732 HPV positive cases were statistically analyzed. Results HPV-positive rates in ≤25, 26～, 36～, 46～, and ≥56 age groups were 22.15%, 15.90%, 17.04%, 19.97%, and 17.57%，respectively (χ2=36.587，P<0.01)，HPV-positive rates in ≤25 and 46～ age groups were both higher than other age groups. There were significant differences in single infection and multiple infection rates among different age groups respectively(χ2=14.39, 36.51，respectively, bothP<0.05)，single infection rate was highest in 46～ and ≤25 age groups (15.41% and 15.24% respectively)；multiple infection rates was highest in ≤25 and ≥56 age groups (6.90% and 5.86% respectively). The percentage of single infection and multiple infection were 75.58% and 24.42% respectively, the major single infection type was HPV high-risk subtype (84.34%)，the major multiple infection types were high-risk and high-risk compound subtype as well as high-risk and low-risk compound subtype, accounting for 60.52% and 38.77% respectively. The main single infection types were HPV high-risk subtypes 33, 68, 31 and 16, as well as and low-risk subtype 11, the ratios of single infection to multiple infection were 3.13, 2.03, 1.71, 1.67 and 2.00 respectively. Conclusion Cervical infection rates in women in Wuhan region is high in ≤25 and 46～ age groups, there are differences in the distribution of different HPV subtypes of single infection and multiple infection.

humanpapillomavirus; cervical cancer; multiple infection; flow-through hybridization technology

2016-09-25

國家自然科學基金資助項目(81201604)；病毒學國家重點實驗室開放基金項目(2015KF010)；湖北省自然科學基金資助項目(2012FFB05301)；武漢市衛生計生委臨床醫學科研項目(WX13B18)

肖晗(1980-)，女(漢族)，湖北省武漢市人，副主任技師，主要從事感染性病原體的核酸檢測及腫瘤免疫治療研究。

向贇 E-mail：whfexiangyun@163.com

10.3969/j.issn.1671-9638.2017.05.002

R737.33

A

1671-9638(2017)05-0399-05