腸通對小鼠急性毒性的影響※

武 偉張岱權賀 葵洪 音王茂嬌黃雨佳吳顯和劉珉甬

腸通對小鼠急性毒性的影響※

武 偉1張岱權1賀 葵1洪 音2王茂嬌2黃雨佳2吳顯和3劉珉甬4

目的探討腸通對小鼠急性毒性的影響。方法將36只SPF級小鼠隨機分為對照組（n=12）和實驗組（n=24），雌雄各半。對照組：采用0.9%氯化鈉注射液灌胃，0.8 ml/只，1次/d，連續觀察14 d；實驗組：0.9%氯化鈉注射液0.8 ml/只+腸通0.4 g灌胃，1次/d，連續觀察14 d。比較兩組小鼠一般情況及主要臟器外形、體積、顏色與病理檢查結果。結果對照組與實驗組小鼠精神狀態、活動度、大便均正常，體重、進食量差異均無統計學意義（均 P＞0.05）；對照組與實驗組小鼠各臟器均無變性、充血、水腫、壞死等異常現象；部分實驗組小鼠肝細胞輕度水腫，雙核細胞增多，遠端結腸淋巴細胞增多，但肝、腎、結腸病理檢查結果異常率與對照組比較差異均無統計學意義（均 P＞0.05）。結論在本實驗條件下，腸通無明顯急性毒性，安全性較高。

腸通；小鼠；急性毒性

便秘主要表現為排便頻率減少，排便費力，糞便量減少或干結，是常見的消化系統疾病，發病率約為10%～15%，且呈逐年上升趨勢[1]。其不僅可嚴重影響患者生命質量[2]，還可引發多種并發癥，甚至導致心血管性猝死[3]，因此及時、有效防治便秘具有重要意義。目前，治療便秘的西藥包括瀉劑、促動力藥、鈣通道阻滯劑等，雖然療效較確切，但易出現不同程度不良反應，如胃腸脹氣、腹痛、腹瀉、頭暈等，長期使用還易產生依賴性，誘發瀉劑依賴性便秘[3]，各因素之間互相影響，導致便秘反復發作，

遷延難愈。目前國家衛生部大力推行特膳食品防治慢性疾病，臨床急需安全有效、服用方便、價格低廉的食品防治便秘。腸通是依據中醫“食藥同源”特性，結合現代腸道微生態研究進展，根據便秘特點自主研制的食品。前期已對組方配伍及制劑工藝進行了相關研究，小樣本人群實驗取得良好效果，現開展腸通對小鼠急性毒性實驗評價其安全性，為其應用于臨床提供客觀科學的實驗依據。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物與分組 SPF級健康昆明小鼠36只 [由西南醫科大學動物實驗中心提供，動物生產許可證號：SCXK（川）2013-17]，隨機分為對照組（n=12）和實驗組（n=24），雌雄各半，體重18～22 g，自由飲食，飼料為依科達普通繁殖生產料[成都達碩實驗動物有限公司，批號：蘇飼審（2009）05032]。實驗環境：西南醫科大學動物實驗中心，濕度：40%～70%，溫度：20～25 ℃。

1.1.2 實驗藥品與試劑 0.9%氯化鈉注射液（四川美大康佳樂藥業有限公司，批號：15032142），腸通（西南醫科大學護理器械研發實驗室自主研發），10%甲醛溶液（上海榕柏生物技術有限公司，批號：060701），3%戊巴比妥鈉（中國醫藥集團上海化學試劑公司，批號：F20050405）。

1.1.3 實驗器材 動物電子稱（上海花潮電器有限公司，型號：ES-06B），分析天平（上海卓精電子科技有限公司，型號：BSM/BS），1 ml、5 ml注射器（成都市新津事豐醫療器械有限公司，批號：160116），灌胃針（贊德儀器有限公司，型號：FNC-12-4），手術器械（深圳市瑞沃德生命科技有限公司，型號：SP1006-M），眼科鑷（深圳市瑞沃德生命科技有限公司，型號：F14004-08），刀片（杭州華威醫療用品有限公司，批號：20100227），濾紙（杭州沃華濾紙有限公司，批號：GB/T1914-2007）。

1.2 實驗方法實驗動物適應性喂養7 d后，禁食不禁水12 h，分組進行干預。對照組采用0.9%氯化鈉注射液灌胃，0.8 ml/只，1次/d，連續觀察14 d；實驗組采用0.9%氯化鈉注射液0.8 ml/只+腸通0.4 g（腸通最大給藥量為0.4 g,相當于臨床劑量400倍）灌胃，1次/d，連續觀察14 d。

1.3 觀察指標

1.3.1 一般情況 每天觀察并記錄小鼠精神狀態、活動度、體重、進食量、大便（性狀、顏色）。

1.3.2 大體解剖觀察 實驗第15天用3%戊巴比妥鈉腹腔麻醉后，頸椎脫臼處死小鼠并解剖，觀察其心、肝、肺、腎、脾、胃、結腸外形、體積、顏色。1.3.3 顯微鏡下觀察 在實驗組及對照組分別隨機選取50%小鼠切取肝臟、雙側腎臟、遠端結腸8～10 mm，用10%甲醛溶液固定24 h后包埋、切片、蘇木精-伊紅染色法（HE染色）。觀察：①肝組織、細胞結構是否完整，分界是否清楚，有無異常改變；②腎組織有無出血、腎小管結構有無異常改變、有無淋巴細胞浸潤、皮質與髓質分界是否清楚；③遠端結腸黏膜細胞有無異常改變。

1.4 統計學分析采用SPSS 21.0統計軟件進行數據分析，計量資料以±s表示，組間比較采用 t檢驗，計數資料以百分率表示，組間比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 一般情況實驗期間無小鼠病死，兩組小鼠精神狀態、活動度及大便性狀顏色均正常。

2.2 體重變化對照組與實驗組小鼠體重均穩定增長，差異無統計學意義（P＞0.05），見表1。

表1 對照組和實驗組小鼠體重變化比較(g,±s)

表1 對照組和實驗組小鼠體重變化比較(g,±s)

組別 數量(只) 第1天 第5天 第9天 第13天對照組 12 18.5±0.9 19.5±0.9 22.1±1.0 26.3±1.2實驗組 24 18.8±1.2 19.8±1.0 22.0±1.1 25.4±1.3 t值 0.78 0.63 0.28 1.97 P值 0.22 0.71 0.98 0.88

2.3 進食量比較 對照組與實驗組小鼠進食量呈同步變化，差異無統計學意義（P＞0.05），見表2。

表2 對照組和實驗組小鼠進食量變化比較(g,±s)

表2 對照組和實驗組小鼠進食量變化比較(g,±s)

組別 數量(只)第1天第5天第9天第13天對照組 12 3.8±0.3 3.48±0.1 2 3.92±0.1 8 3 .66±0.1 3實驗組 24 3 .65±0.2 2 t值3.8±0.3 3.51±0.1 6 3.90±0.2 0 0.37 0.43 0.26 0.16 P值0.95 0.37 0.35 0.07

2.4 大體解剖肉眼觀察對照組與實驗組小鼠心、肝、肺、腎、脾、胃、結腸外形、體積、顏色均無異常。

2.5 顯微鏡下觀察對照組小鼠肝臟、腎臟、遠端結腸均正常，見圖1、圖3、圖5。實驗組小鼠腎組織結構正常，皮、髓質分界清楚，無淋巴細胞浸潤，見圖2；部分肝細胞輕度水腫，雙核細胞增多，見圖4；部分遠端結腸淋巴細胞增多，見圖6。對照組與實驗組小鼠肝、腎、結腸病理檢查結果異常率比較，差異均無統計學意義（均P＞0.05），見表3。

圖2 實驗組腎臟(HE,×200)

圖1 對照組腎臟(HE,×200)

圖3 對照組肝臟(HE,×200)

圖4 實驗組肝臟 (HE,×200)

圖5 對照組遠端結腸(HE,×200)

圖6 實驗組遠端結腸 (HE,×200)

表3 對照組和實驗組小鼠病理檢查結果比較[只(%)]

3 討論

近年來，功能性食品治療便秘取得了顯著成效[4-5]，突顯了其獨有的特色與優勢。腸通是自主研制食品，已申報國家發明專利，其主要成分為腸通1與腸通2單體。腸通1具有低聚木糖生理活性，前期預實驗表明，能有效減少老年便秘發生。分析原因，可能是腸通 1分子具有多個親水基團，可與水分子聚集成巨大分子，且黏度高，穩定性好有關。在胃腸道中，腸通 1能吸水與水形成黏稠膠狀物，軟化食物殘渣而直接發生通便作用[6]。腸通 1是由2～10個單糖分子通過糖苷鍵連接形成的低度聚合糖，其可有效促進生物體內以雙歧桿菌為代表的腸道有益菌群特異性增殖。多項研究證實低聚木糖可被多種雙歧桿菌所代謝，產生一系列腸保健功能[7-9]。腸通 2是中藥單體，促進腸蠕動作用顯著。兩者組合，是一種較好的潤腸通便保健食品。

精神狀態、活動度、體重、進食量、飲水量、大便是綜合反映藥物毒性對機體代謝、健康狀況影響的基本指標。本研究中對照組和實驗組小鼠精神狀態、活動度均正常，體重穩定增長，進食量呈同步變化，大便性狀正常。表明腸通最大給藥量0.4 g對小鼠生長代謝無明顯影響。內臟是機體發揮生理功能的場所，其組織結構的改變將對機體正常生理功能造成影響。本研究病理檢查結果顯示，部分肝細胞輕度水腫，雙核細胞增多；部分遠端結腸淋巴細胞增多。提示腸通0.4 g+0.9%氯化鈉注射液0.8 ml灌胃對部分小鼠肝臟、遠端結腸產生了一定影響，發生機制有待進一步研究，但對照組與實驗組小鼠肝、腎、結腸病理檢查結果異常率差異均無統計學意義。

綜上所述，腸通的安全劑量約為0.4 g，相當于人臨床用量的400倍，灌胃對小鼠的生長代謝無明顯影響，且在該劑量范圍內對小鼠腎臟也無可見病變損傷，安全性較高。

[1] 游佳,李勝濤,張靜,等.中醫治療功能性便秘的研究進展[J].內蒙古中醫藥,2007,26(10):48-50.

[2] 朱芬芬,林征,林琳.功能性便秘患者生活質量的研究[J].中華消化雜志,2007,27(5):356-358.

[3] 張效東,蒲磊,史季.規范化便秘的診斷與治療[J].中國實用醫藥, 2011,6(23):151-152.

[4] 翟麗麗.膳食纖維的研究進展[J].科技論壇,2014,1(1):70.

[5] 趙金鳳,曲佳樂,皮子鳳,等.植物酵素潤腸通便保健功能研究[J].食品與發酵科技,2012,48(3):54-56.

[6] 王瑾,佘君,張彥亭,等.慢性便秘患者臨床特征的研究[J].胃腸病學和肝病學雜志,2013,22(8):819-822.

[7] Yuan X,Wang J,Yao H.Feruloyl oligosaccharides stimulate the growth of Bifidobacterium bifidum[J].Anaerobe,2005,11(4):225-229.

[8] 王鑫,朱婧,劉靜,等.低聚木糖潤腸通便及調節腸道菌群功能的研究[J].食品工業科技,2015,36(14):359-362.

[9] 徐海燕,辛國芹,曹銀生,等.低聚木糖對益生菌及人腸道菌群的影響[J].藥學研究,2013,32(9):500-503.

10.12010/j.issn.1673-5846.2017.05.009

1西南醫科大學附屬醫院，四川瀘州 646000

2西南醫科大學護理學院，四川瀘州 646000

3西南醫科大學護理醫療器械研發實驗室，四川瀘州 646000

4瀘州岷宏科技有限公司，四川瀘州 646000

四川省科技廳支撐計劃（編號：2016FZ0059）

武偉，主管護師。研究方向：應用技術和應用基礎研究

劉珉甬，Email：1047986020@qq.com