粗齒冷水花中Epihernandulcin的含量測定

黃艷++文建文++陳明生++何開家++劉布鳴

【摘要】目的：建立測定粗齒冷水花中Epihernandulcin含量的方法。方法：采用高效液相色譜法（HPLC）測定粗齒冷水花中Epihernandulcin含量，采用ECOSIL ODS-3反相色譜柱（250×46mm， 5μm），以乙腈-02%磷酸溶液（65：35）為流動相進行等度洗脫，檢測波長為240nm，流速為1mL/min，柱溫為室溫。結果：Epihernandulcin在0114-0683μg范圍內呈良好線性關系（r=09991），平均回收率為9950%，RSD=218%（n=9）。結論：該法簡單，可行，重現性好，適用于粗齒冷水花中Epihernandulcin的含量測定。

【關鍵詞】 粗齒冷水花；Epihernandulcin；高效液相色譜法；含量測定

【中圖分類號】R2841【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2017）10-0022-03

The Determination of Epihernandulcin in Pilea sinofasciata C J Chen

HUANG YanWEN JianwenCHEN MingshengHE KaijiaLIU Buming*

Guangxi Institute of Traditional Medical and Pharmaceutical Sciences&Guangxi Key Laboratory of Tradtitonal Chinese Medicine Quality Stardands， Nanning 530022， China

Abstract：Objective To develop a determination method of epihernandulcin in Pilea sinofasciata C J Chen Methods The determination was performed on ECOSIL ODS-3（250×46mm， 5μm） column with acetonitrile-02% phosphoric acid（65：35） as mobile phase with flow rate 10 mL/min at detection wavelength of 240 nm And the column temperature was set at room temperature Results The average recovery rate（n=9） of epihernandulcin was 9950% and RSD was 218%（n=9）， respectively Conclusion The method is simple， rapid， accurate and reliable. And it is suitable for the quality control of epihernandulcin in Pilea sinofasciata C J Chen

Keywords： Pilea sinofasciata C J Chen；Epihernandulcin；HPLC；Determination

粗齒冷水花為蕁麻科（Urticaceae）冷水花屬（Pilea Lindl）植物粗齒冷水花Pilea sinofasciata C J Chen的全草，又名紫綠草、青藥、水麻葉、水甘草、大茴香、宮麻，分布于我國廣西、貴州、四川和云南等省，具有清熱解毒，活血祛風，理氣止痛，主治高熱，鵝口瘡，喉蛾腫痛，跌打損傷，骨折，風濕痹痛[1]。目前對粗齒冷水花的成分報道較少，牛延慧等[2]對冷水花屬植物進行化學成分預實驗研究。而本課題組對粗齒冷水花全草的乙醇提取物的化學成分進行了系統研究，其主要含有機酸類、生物堿類、黃酮類、倍半萜類、三萜類等化合物[3]；另外采用GC-MS法對粗齒冷水花的脂溶性成分進行了成分分析[4]，并對藥材進行了薄層鑒定研究[5]。前期從粗齒冷水花分離得到epihernandulcin，而且含量較高，本文采用高效液相色譜（HPLC）對粗齒冷水花中epihernandulcin進行含量測定研究，為粗齒冷水花的質量控制提供科學的依據和理論基礎。

1儀器與材料

11儀器HH-S恒溫水浴鍋，1525型液相色譜儀（美國Waters公司），2489型紫外檢測儀（美國Waters公司），2707型自動進樣儀（美國Waters公司），Breeze系統色譜工作站（美國Waters公司），XS205分析天平（梅特勒-托利多）。

12材料epihernandulcin對照品（自制）純度>98%；甲醇（賽默飛世爾科技有限公司；色譜純）、乙腈（賽默飛世爾科技有限公司有限公司；色譜純）、磷酸（廣州新建精細化工廠，分析純），其他試劑均為分析純。粗齒冷水花（Pilea sinofasciata C J Chen）采集于廣西百色市，經廣西中醫藥研究院何開家主任藥師鑒定為粗齒冷水花Pilea sinofasciata CJChen。

2方法與結果

21色譜條件及系統適應性考察色譜柱：ECOSIL ODS-3（250×46mm， 5μm）；流動相：乙腈-02%磷酸溶液等度洗脫（65：35）；流速：10mL/min；檢測波長：240nm；柱溫：25℃；進樣量：10μL。供試品溶液中Epihernandulcin的理論塔板數是12635，分離度大于15，完全分離。如圖1、圖2所示。

22溶液的制備

221對照品貯備液的制備精密稱取epihernandulcin 對照品1138mg，置于10mL容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，即得對照品貯備液。

222供試品溶液的制備取粗齒冷水花粉末1g，精密稱定，置于錐形瓶中，精密加入甲醇10mL，密塞，稱定重量，加熱提取25h，放冷至室溫，補足重量，搖勻，過濾，取續濾液，再用045μm微孔濾膜濾過，即得。

23標準曲線的制備精密量取對照品溶液10、20、30、40、50、60mL，分別置于10mL容量瓶中，加入流動相稀釋定容至刻度，搖勻，配成系列濃度的對照品溶液，按“21項下的色譜條件”下進行測定。以峰面積為縱坐標，進樣量為橫坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程。回歸方程為：Y =12114828477X -3885010（n=6），r=09997，表明對照品進樣量在0114～0683μg范圍內線性關系良好，標準曲線見圖3。

24精密度試驗取同一供試品溶液，精密吸取10μL，按“21色譜條件”連續進樣6次，測定峰面積，結果顯示RSD%小于2，表明儀器精密度良好。

25穩定性考察取供試品溶液按“21色譜條件”分別在0、1、2、4、6、8、10、12小時進行結果RSD值為075%，表明供試品溶液在12h內穩定性良好。

26重復性考察取同一批次藥材適量，按照“22溶液的制備”方法制備6份供試品溶液，按“21色譜條件”進行測定，結果RSD值為218%，表明重復性良好。

27加樣回收率考察取已知Epihernandulcin含量的粗齒冷水花粉末05g，共9份，精密稱定，置于1～9號錐形瓶中，1至3號精密加入01mg/mL的Epihernandulcin對照品溶液07 mL，4～6號精密加入01mg/mL的Epihernandulcin對照品溶液09mL，7至9號精密加入01mg/mL的Epihernandulcin對照品溶液11mL，按照“22溶液的制備”方法制備，按“21色譜條件”實驗。結果Epihennandulcim的平均回收率9950%，RSD值為196%。見表1。

28樣品測定精密稱取不同批次粗齒冷水花末各10g，按“22溶液的制備”方法制備，按“21色譜條件”測定，測定Epihernandulcin含量，結果見表2。

3討論

31提取方法考察試驗過程中考察了加熱回流和超聲處理兩種方式，結果顯示加熱回流樣品中Epihernandulcin所測定的含量要高，故采用加熱回流提取方式。

32提取溶劑的考察試驗過程中分別考察了甲醇、50%甲醇、乙醇、50%乙醇為提取溶劑，結果顯示甲醇提取含量較多，故采用甲醇作為提取溶劑。

33提取時間的考察試驗過程中分別考察了加熱回流提取時間為30、60、90、120、150、180min，結果顯示150min基本可以將供試品中的Epihernandulcin提取完全，故選擇150min作為提取時間。

實驗還比較了采集百色不同產地的3批次粗齒冷水花中Epihernandulcin含量，其中Epihernandulcin（01792mg/g）的含量以百色凌云縣產地采集得到的藥材為最高。

參考文獻

[1]國家中醫藥管理局《中華本草》編委會. 中華本草[M]. 上海：上海科學出版社， 1999：577.

[2]牛延慧， 梁志遠， 甘秀海. 貴州三種冷水花化學成分預試研究[J]. 貴州師范學院學報， 2010， 26（3）：26-28.

[3] 黃艷， 武旭， 文建文， 等. 粗齒冷水花的化學成分研究[J]. 中草藥， 2016， 47（18）：3159-3163.

[4] 文建文， 黃艷， 何開家， 等. GC-MS 法分析粗齒冷水花石油醚部位的脂溶性成分[J].安徽農業科技， 2010， 41（36）：14156， 14168.

[5]武旭， 柴玲， 黃艷， 等. 粗齒冷水花藥材的薄層鑒別研究[J]. 現代中藥研究與實踐， 2016， 30（1）：17-20.

（收稿日期：2017-03-24編輯：陶希睿）