青藤堿抗腫瘤作用研究進展

靳濤　徐倩　陳丹娜

【摘 要】 青藤堿（Sinomenine，SN）是從防己科植物青風(fēng)藤干燥的根莖中提取出來的一種生物堿單體，分子式為C19H23NO4，結(jié)構(gòu)與嗎啡相似，是一種植物中很強的組織胺釋放劑。目前對于青藤堿藥理作用的研究多集中在鎮(zhèn)痛鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)咳局麻、降血壓、抗炎、臨床上用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和神經(jīng)痛等方面，隨著近些年研究的深化，人們對青藤堿的作用機制以及藥理研究有了新的看法，國內(nèi)外的的學(xué)者越來越多的重視到其在抗腫瘤方面的作用。本文概括了青藤堿近年來在抑制腫瘤生長、促進癌細(xì)胞凋亡方面的研究進展，期望為臨床運用提供一個新思路。

【關(guān)鍵詞】 青藤堿 抗腫瘤 研究進展

癌癥（cancer），醫(yī)學(xué)上稱為：惡性腫瘤（malignant neoplasm），其具有生長快，易浸潤或向遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，難以根治等特點。由于發(fā)病器官和組織部位的不同，呈現(xiàn)出不同的臨床表現(xiàn)，早期沒有明顯癥狀，發(fā)病隱匿，大多數(shù)患者察覺出癥狀時，癌癥已進入中晚期。一般對于發(fā)現(xiàn)較早的實體腫瘤來說，手術(shù)一直是最佳的醫(yī)治手段，理論上可以根治。對于處于晚期或沒有實體腫瘤的癌癥，可選擇化學(xué)治療、放射線治療、靶向治療、免疫治療法等。實際治療中，大部分常用的治療手段在殺死癌細(xì)胞，抑制腫瘤生長的過程中都會對機體和正常組織產(chǎn)生極強的毒副作用，給患者及家屬帶來極大的痛苦。因此怎樣在治療過程中盡可能的減少對正常組織的影響，降低傷害，并且醫(yī)療效果顯著的的治療手段成為近些年來癌癥研究的主要方向。

青藤堿（Sinomenine，Sino） 從防己科植物青藤和毛青藤中提取，主要成分是一種可分離的生物堿單體，其分子式為C19H23NO4，其結(jié)構(gòu)與嗎啡相似，具有鎮(zhèn)痛鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)咳局麻、降血壓、抗炎等作用，臨床藥物多以鹽酸青藤堿的形式存在。目前關(guān)于青藤堿藥理作用的研究報道大部分集中在抗炎鎮(zhèn)痛與免疫抑制方面，并且有動物實驗顯示，在休克狀態(tài)和受損器官中青藤堿能夠起到一定的保護作用，但在抑制腫瘤細(xì)胞方面的報道較少。研究表明，青藤堿能夠抑制人巨噬細(xì)胞，成纖維樣滑膜細(xì)胞的生長與增殖，且在體內(nèi)外實驗得到驗證，而且研究發(fā)現(xiàn)青藤堿還能抑制與腫瘤產(chǎn)生、發(fā)展緊密聯(lián)系的基因表達(dá)，熱休克蛋白27（HSP27），死亡結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白，胎盤生長因子（PIGF），如白介素6（IL-6）等的表達(dá)，由于大量與之類似的異喹啉類生物堿都具有抗腫瘤活性，因此推斷青藤堿也具有促進腫瘤細(xì)胞凋亡的作用。

1 抗腫瘤作用

1.1 抗乳腺癌

相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)鹽酸青藤堿對乳腺癌細(xì)胞MCF-7的增殖具有明顯的抑制作用，并與臨床常用的抗癌藥物5-氟尿苷（5-FUR）進行比較，2.5-5.0mmol/L青藤堿對人乳腺癌MCF-7細(xì)胞均產(chǎn)生阻礙其增殖、生長的作用，并且青藤堿單獨作用于乳腺癌細(xì)胞系的抑制效果比5-FUR及青藤堿聯(lián)用5-FUR效果顯著。

只要條件適宜，癌細(xì)胞能夠無限繁殖，且分裂速度較普通細(xì)胞很快，因此，目前市面上主流的抗腫瘤藥物通常都是以抑制腫瘤細(xì)胞分裂來阻礙腫瘤的發(fā)展。進一步研究發(fā)現(xiàn)，在青藤堿的作用下處于G1/S細(xì)胞周期的癌細(xì)胞終止分裂，并進一步殺死癌細(xì)胞，MAPK信號通路可能參與了這一分子機制的介導(dǎo)。青藤堿在有效抑制癌細(xì)胞生長、殺死癌細(xì)胞的同時并未對其他組織產(chǎn)生影響。因此鹽酸青藤堿可用于乳腺癌的治療。

1.2 抗胃癌

LV[1]等通過以青藤堿作為實驗組，用塞來昔步作為實驗的陽性對照，將青藤堿按照一定的濃度梯度作用于胃腺癌SGC-7901細(xì)胞。結(jié)果表明，青藤堿對胃腺癌SGC-7901細(xì)胞的增殖抑制及COX-2的表達(dá)抑制都有很好的效果，且呈濃度、時間依賴性；在塞來昔布或青藤堿的作用下，細(xì)胞變圓并出現(xiàn)分離形態(tài)，這表明細(xì)胞出現(xiàn)凋亡現(xiàn)象。這表明青藤堿之所以對胃腺癌細(xì)胞有抑制作用與COX-2的表達(dá)是存在聯(lián)系的。Liao[2]等通過將青藤堿與5-氟尿嘧啶單獨作用于小鼠模型，與將二者合并用藥作用于小鼠模型的結(jié)果相對比，并記錄胃癌細(xì)胞的變化，結(jié)果表明，青藤堿能夠顯著加強5-氟尿嘧啶所介導(dǎo)的對癌細(xì)胞的生長抑制作用，加速誘導(dǎo)了胃癌細(xì)胞的凋亡，因為青藤堿的這種藥理特性，使之有機會成為5-氟尿嘧啶用藥醫(yī)治胃癌時的化療的敏化劑。

1.3 抗肝癌

研究表明，在體內(nèi)實驗中，將青藤堿以不同濃度梯度注入人肝癌Hep3B細(xì)胞小鼠移植瘤模型，一段時間后觀察到小鼠體內(nèi)腫瘤的體積與重量均有明顯下調(diào)；在體外實驗中，鹽酸青藤堿呈時間和劑量依賴性方式顯著的抑制肝癌細(xì)胞系的生長，大部分肝癌細(xì)胞出現(xiàn)染色質(zhì)凝集以及核碎裂等現(xiàn)象，增加了細(xì)胞的凋亡。這表明青藤堿在體內(nèi)外均對癌細(xì)胞的增殖有很好的抑制作用。Hong等[3]通過TfR mAb聯(lián)合青藤堿抗腫瘤效應(yīng)的研究中發(fā)現(xiàn)，使用TfR mAb單獨作用于人肝癌細(xì)胞HepG2，會使COX-2與VEGF的表達(dá)上調(diào)，且表達(dá)與劑量呈正相關(guān)；使用青藤堿單獨作用于的人肝癌細(xì)胞系，COX-2的表達(dá)與劑量呈負(fù)相關(guān)。使用TfRmAb與青藤堿聯(lián)合處理人肝癌細(xì)胞HepG2后， 明顯的降低了COX-2和VEGF的表達(dá)，且較兩者單獨處理的細(xì)胞系更為顯著。表明青藤堿的抗腫瘤作用可能通過調(diào)節(jié)COX-2和VEGF的表達(dá)來完成。

何晶晶等[4]通過實驗探討了青藤堿對人肝癌細(xì)胞HepG2的侵襲和轉(zhuǎn)移能力的影響。實驗采用0.125-2.5mmol/L青藤堿和0.1mmol/L的氟尿嘧啶作為實驗的陽性對照組處理人肝癌細(xì)胞HepG2。最終得出結(jié)論：鹽酸青藤堿對人肝癌細(xì)胞HepG2的侵襲性和轉(zhuǎn)移性以及快速增殖都有很好的抑制作用。并且猜測青藤堿抑制人肝癌細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移是通過抑制細(xì)胞外基質(zhì)實現(xiàn)的。

1.4 抗肺癌

通過近年研究發(fā)現(xiàn)，非小細(xì)胞肺癌中COX-2明顯有上調(diào)的趨勢，但是否能通過抑制COX-2的活性來醫(yī)治肺癌還有待討論。姜廷樞等[5]通過實驗研究了青藤堿對肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549生長的影響。結(jié)果表明，用不同劑量的青藤堿（1.0，0.5，0.25mmol/L）劑量組處理A549細(xì)胞不同的梯度時間后，細(xì)胞增殖明顯受到抑制，且呈明顯的時間、劑量的依賴性。青藤堿處理組處于G1期細(xì)胞比例顯著上調(diào)，凋亡率也較對照組升高，并且與劑量呈依賴性。這表明，青藤堿在體外能夠有效的抑制肝癌細(xì)胞A549的增殖與生長。還有實驗表明，通過使用青藤堿作用于肺癌細(xì)胞株Calu-1研究，表明青藤堿能夠呈時間和劑量依賴性地抑制人肺癌細(xì)胞株Calu-1的生長、增殖，還能夠誘導(dǎo)其凋亡。

實驗表明，青藤堿對肺癌細(xì)胞的信號通路也會造成一定的影響。Zhou等[6]在P13K/Akt和MEK/ERK信號通路的活化對青藤堿誘導(dǎo)的肺癌細(xì)胞凋亡影響實驗中發(fā)現(xiàn)，P13K/Akt和MEK/ERK信號通路的活化能夠阻礙青藤堿誘導(dǎo)的肺癌細(xì)胞NCL-H460的凋亡，抑制這兩條通路可以增加青藤堿的效應(yīng)。也有實驗表明，青藤堿作用癌細(xì)胞的同時伴隨著這兩條信號通路的活化，但是抑制這兩條信號通路后，青藤堿誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡率明顯上升。表明P13K/Akt和MEK/ERK兩條信號通路在青藤堿抗腫瘤作用中發(fā)揮著重要作用。

1.5 抗宮頸癌

張瑜等通過實驗證明了青藤堿對宮頸癌Hela細(xì)胞的抑制作用。結(jié)果顯示，用0.1-2.5mmol/L的青藤堿作用于宮頸癌Hela細(xì)胞，均能抑制其增殖，且呈時間、劑量的依賴性；青藤堿作用Hela細(xì)胞后，細(xì)胞凋亡率顯著增高，并和濃度與作用時間呈正相關(guān)，其機制與其誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、阻滯細(xì)胞周期存在一定聯(lián)系。也有研究發(fā)現(xiàn)，在體外實驗中，青藤堿能夠明顯抑制人宮頸癌細(xì)胞Hela的生長與增殖，其能夠誘導(dǎo)Hela細(xì)胞凋亡從而實現(xiàn)抑制作用，它的作用機制可能與P13K/Akt-Caspase-3信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路存在一定聯(lián)系。

研究表明聯(lián)合鉑類藥物對宮頸癌細(xì)胞也具有一定的影響。施榮東等[7]探討了青藤堿與順鉑（DDP）聯(lián)用對宮頸癌細(xì)胞Hela的影響。結(jié)果顯示，青藤堿能夠有效的抑制其增殖，并且呈現(xiàn)時間和劑量的依賴性，與順鉑聯(lián)合作用于宮頸癌Hela細(xì)胞后，癌細(xì)胞的增殖速度明顯減弱，這表明使用青藤堿與順鉑對兩種藥物聯(lián)合對宮頸癌Hela細(xì)胞的增殖可產(chǎn)生協(xié)同抑制的作用。在青藤堿與卡鉑聯(lián)用對宮頸癌Hela細(xì)胞抑制作用方面，吳敏等通過實驗表明，兩藥聯(lián)合作用對宮頸癌Hela細(xì)胞有顯著的抑制作用，呈時間、濃度的依賴性，且抑制效果顯著高于單藥處理組，兩藥的協(xié)同抑制作用效果更加明顯。這表明，青藤堿可以有效提高化療藥物的療效。

1.6 抗白血病

童向民等[8]做了在血液系統(tǒng)腫瘤方面的研究發(fā)現(xiàn)，結(jié)果顯示，青藤堿可以誘導(dǎo)白血病細(xì)胞K562的凋亡，COX-2與NF-KB表達(dá)程度在青藤堿作用后出現(xiàn)顯著下調(diào)。從而得到青藤堿誘導(dǎo)的K562細(xì)胞凋亡是以抑制COX-2與NF-kB表達(dá)程度來實現(xiàn)的結(jié)論。

2 抗多藥耐藥作用

多藥耐藥（mulitidrug resistance，MDR）是指腫瘤細(xì)胞對一種抗腫瘤藥物出現(xiàn)耐藥性的同時，對其他結(jié)構(gòu)和作用機理不同的抗腫瘤藥物產(chǎn)生交叉耐藥性，分為原發(fā)性耐藥和獲得性耐藥，這是導(dǎo)致化療失敗的主要原因之一。據(jù)相關(guān)數(shù)據(jù)統(tǒng)計，大約90%以上的腫瘤化療失敗是由于多藥耐藥性。Liu等[9]通過研究發(fā)現(xiàn)，將柔比星作用于具備多藥耐藥性的結(jié)腸癌Caco-2細(xì)胞系時，發(fā)現(xiàn)COX-2和多藥耐藥-1基因表達(dá)上調(diào)，同時激活結(jié)腸癌Caco-2細(xì)胞中NF-KB信號通路。將青藤堿作用于該細(xì)胞系，發(fā)現(xiàn)青藤堿可以通過抑制NF-KB信號通路，因而使多藥耐藥-1基因和COX-2的表達(dá)得到抑制，從而提高藥耐藥性的結(jié)腸癌Caco-2細(xì)胞系對柔比星的敏感性。這個研究成果為解決癌癥治療時腫瘤多藥耐藥性現(xiàn)象提供了新的臨床思路。

3 結(jié)語

青藤堿通過口服和肌內(nèi)注射，進行局部抗炎和鎮(zhèn)痛等治療。目前投入臨床使用的有正清風(fēng)痛寧片、緩釋片、鹽酸青藤堿注射液、毛青藤總堿片等制劑用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎及心律失常，取得非常不錯的療效，為臨床用藥提供了一種新的治療思路，并且噴劑等已經(jīng)處于研發(fā)模式。近些年還有用于治療慢性腎炎、強直性脊柱炎、骨質(zhì)增生、心腦血管疾病、戒毒等多種研究報道，都取得了不錯的療效。由于青藤堿對各類型腫瘤均有良好的抑制作用且效果顯著，以及它良好的抗多藥耐藥性，近年來已經(jīng)成為研究的熱點，抗MDR作用機理可能是通過抑制COX-2和VEGF的的表達(dá)和抑制腫瘤細(xì)胞的生長、抑制細(xì)胞繁殖來實現(xiàn)的，其涉及P13K/Akt、MEK/ERK和MAPK等多種信號通路；直接或間接影響轉(zhuǎn)錄因子家族（Fork-head、NF-KB、P53等）發(fā)揮細(xì)胞存活調(diào)控作用；促使細(xì)胞凋亡的啟動者和效應(yīng)者Caspase-9活化，有效抑制凋亡抑制基因Survivin表達(dá)，促進細(xì)胞凋亡等。但其對腫瘤抑制作用的機制還不明確，其起始作用位點是什么、是否有其他路徑、作用靶點是什么等還需要進一步研究。

參考文獻(xiàn)

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[7] 施榮東等. 青藤堿聯(lián)合順鉑對人宮頸癌Hela細(xì)胞增殖作用的影響[J]. 中國藥物與臨床. 2010：3.

[8] 童向民， 姚航平. 青藤堿對K562和PC-3細(xì)胞COX-2和NF-kB表達(dá)的抑制作用. 浙江省醫(yī)學(xué)會心身醫(yī)學(xué)分會第七屆全國血液免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會暨2008年浙江省血液病學(xué)術(shù)年會論文匯編. 2008：1.

[9]Liu Z， Duan Z-J， Chang J-Y， Zhang Z-f， Chu R， Li Y-L， et al. Sinomenine sensitizes multidrug-resistant colon cancer cells （Caco-2） to doxorubicin by downregulation of MDR-1 expression[J]. PloS one. 2014；9（6）：e98560.

作者簡介：陳丹娜（1983-），女，博士，副教授，研究方向：細(xì)胞增殖與凋亡。