氟喹諾酮藥物殘留的檢測方法研究進展

劉榮利+韓寧娟+李亮

摘要：氟喹諾酮是一種人工合成的廣譜抗生素，在防治動物及人類的感染性疾病中具有重要應用。由于抗生素藥物的不合理使用，導致在動物源性食品中殘留超標，長期食用將嚴重危害人體健康，因此，對于動物源性食品中氟喹諾酮殘留檢測具有重要的意義。有關氟喹諾酮殘留的檢測方法大致可分為微生物法、免疫法、色譜法和光譜法等。

關鍵詞：氟喹諾酮藥物 檢測方法 研究進展

中圖分類號：S859文獻標識碼：A文章編號：1009-5349（2017）09-0189-02

一、前言

氟喹諾酮（fluoroquinolones，FQS）是一系列由人工合成的含有4-喹諾酮母核結構，母核6位C上被氟取代的一類廣譜抗菌藥物，抗菌作用強，對革蘭氏陽性菌與陰性菌均有作用。具有吸收快，體內分布廣，血藥濃度高，血漿半衰期長，合成簡便，藥品價格低廉等特點，常用于動物及人感染性疾病的治療。

FQS藥物在家畜、家禽的飼養中應用廣泛，抗生素的不合理使用，導致其在動物性食品中的殘留超標，如果人體長時間攝入該類食物，不僅會引起人體對FQS藥物產生耐藥性，而且藥物殘留通過食物對人的中樞神經系統，胃腸道等器官危害較大，嚴重威脅人類健康。關于乳、肉制品中FQS抗生素的殘留全球都有嚴格規定。因此，對于動物源性食品中FQS藥物殘留檢測具有重要的意義。現將FQS藥物殘留的檢測方法進行綜述。

二、FQS藥物的檢測方法

（一）微生物法

微生物檢測利用FQS藥物對微生物生理代謝的抑制作用，進行FQS藥物殘留的測定。該方法經濟方便，但靈敏度和特異性較低，難以進行藥物殘留的準確定性定量分析，適用于大量樣品的篩選，可對藥物殘留進行初步檢測。邢應壽[1]等建立了環丙沙星、諾氟沙星、恩諾沙星三種藥物在肉雞組織中殘留的微生物檢測法，結果發現24h后，環丙沙星殘留量較大。

（二）免疫法

1.酶聯免疫法

酶聯免疫法（ElISA） 基于抗原抗體的免疫反應及酶的催化反應有機結合而發展起來的一項技術，采用酶標抗體檢測FQS藥物殘留，特異性強，方便快速，可用多種該類藥物殘留的篩選測定。

2.免疫親和色譜法

免疫親和色譜法（HPIAC）將免疫技術和色譜技術相結合，通過合適的方法將抗體或抗原結合在載體上，通過抗體與抗原之間反應的特異性和可逆性進行色譜分離，目標物經抗體洗脫后，將所得提取物采用氣相或者高效液相色譜方法進行定量檢測分析。Holtzapple等[3]通過HPIAC方法對牛血清中4種FQS藥物殘留進行了分析。將抗沙拉沙星抗體以共價鍵結合在免疫親和色譜柱上，氟喹諾酮與抗體結合后，在反相色譜柱上分離，熒光檢測后，得到4種樣品回收率均大于95%。

（三）色譜法

1高效液相色譜法

高效液相色譜法（HPLC）具有高靈敏度的紫外或熒光檢測器，選擇性好，分離能力強，廣泛應用于各種藥物及其制劑的分析測定中。喬坤云[4]等采用HPLC法，2475熒光檢測器對雞肉中的4種FQS藥物殘留進行了檢測。雞肉樣品加入pH=7的磷酸緩沖液勻漿提取，離心、固相萃取C18小柱凈化后將收集的洗脫液經膜過濾后進行分析檢測，結果表明，4種組分在濃度為0025-020μg/mL范圍內線性關系良好。

2.液相色譜-質譜法聯用

液相色譜-質譜法（LC-MS）聯用較之于高效液相色譜其檢測靈敏度更高，可在色譜分離不完全的情況下減少液相色譜中雜峰的干擾，同時進行多種FQS藥物殘留的定性定量分析。楊朝琳[5]采用HPLC-MS/MS快速測定了雞蛋中8種FQS藥物的殘留情況。采用Eclipse plus C18柱分離，樣品經提取、冷凍離心、旋蒸濃縮、除雜之后進行HPLC-MS/MS定性、定量分析。研究表明，8種藥物在2-50μg/kg范圍內具有良好線性關系，所得檢出限為00005-022μg/kg。

（四）高效毛細管電泳

高效毛細管電泳，采用高壓電場，毛細管為分離通道，根據樣品中各組分之間的淌度及分配系數的差異，從而實現待測樣的分離。分離效果佳，分析速度快，使用成本低。孫漢文等[6]通過高效毛細管電泳對人體尿液中8種FQS藥物進行了快速有效的分離，以紫外檢測器在278nm時，對8種藥物同時進行檢測，回收率為8182%-10424%，檢出限為105-208 mg/L。

（五）光譜法

目前，紫外-可見分光法和熒光分光法是光譜法中常用的測定抗生素殘留的方法。其中熒光分光法操作檢便、分析快速，依據共振瑞利散射原理，可對待測物進行定性定量分析。李勤[7]等采用熒光分光光度法研究了FQS抗生素與赤蘚紅體系，發現赤蘚紅可分別與莫西沙星、加替沙星形成離子締合物，兩種離子締合物的均在568nm、342nm與378nm出現特征譜峰。在002-27μg/mL范圍內莫西沙星線性良好，加替沙星在006-102μg/mL線性范圍良好。并對人體尿液中兩種藥物的殘留進行了檢測。

三、結語

除了采用微生物法、免疫法、色譜法、光譜法之外，還可通過電化學分析法對FQS藥物殘留進行分析檢測。比較發現，微生物法和酶聯免疫法適用于FQS藥物殘留定性分析，操作簡便，成本低，適用于大量樣品的篩選。高效液相色譜法、液相色譜-質譜法聯用、高效毛細管電泳法、紫外-可見分光光度法、熒光分光光度法均可進行FQS藥物殘留的定性定量分析。隨著新技術的不斷涌現，FQS藥物殘留的檢測方法將不斷的提高與完善，以確保FQS藥物殘留的檢測更加靈敏快捷，為畜牧業與養殖業的健康發展提供指導，確保動物源性食品的質量安全。

參考文獻：

[1]邢應壽.三種FQS藥物在雞組織中殘留的微生物法檢測研究[D].安徽農業大學，2005.

[2] 魏東，楊正濤，李穎，等.氟喹諾酮類藥物殘留免疫學檢測方法的研究[J].中國獸醫學報，2009，29（12）：1593-1598.

[3] Holtzapple C K，Buckley S A，Stanker L H.Determination of fluoroquinolones in serum using an on-line clean-up column coupled to high-performance immunoaffinity–reversed-phase liquid chromatography[J].Journal of Chromatography B： Biomedical Sciences and Applications，2001，754（1）： 1-9.

[4] 喬坤云，孫濤，劉圣紅，等.高效液相色譜熒光法檢測雞肉中4種氟喹諾酮藥物殘留[J].分析儀器，2015（6）：43-46.

[5]楊朝琳.高效液相色譜—串聯質譜法檢測動物源性食品中的抗生素[D].浙江師范大學，2016.

[6]孫漢文，趙偉，何攀.毛細管電泳有效分離和同時檢測8種氟喹諾酮[J].河北大學學報，2008，28（3）：152-157.

[7]李勤，周尚，楊季冬.FQS抗生素與赤蘚紅的共振瑞利散射光譜研究及其分析應用[J].分析實驗室，2011，30（1）：36-40.

責任編輯：楊國棟endprint