內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在黃芪甲苷誘導(dǎo)的心肌線粒體保護中的作用

李 璐，蔡志亮，賀翼飛，朱 瑩，習(xí)瑾昆，賀永貴

(華北理工大學(xué)心臟研究所，中匈合作中醫(yī)藥實驗室，唐山市新藥基礎(chǔ)研究重點實驗室，河北 唐山 063000)

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在黃芪甲苷誘導(dǎo)的心肌線粒體保護中的作用

李 璐，蔡志亮，賀翼飛，朱 瑩，習(xí)瑾昆，賀永貴

(華北理工大學(xué)心臟研究所，中匈合作中醫(yī)藥實驗室，唐山市新藥基礎(chǔ)研究重點實驗室，河北 唐山 063000)

目的 研究黃芪甲苷的心肌保護作用是否與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)，并探討其可能的線粒體信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制。方法 大鼠H9c2細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)；實驗分為對照組、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)劑(2-DG)組、黃芪甲苷+2-DG組、黃芪甲苷組；共聚焦顯微鏡觀察熒光強度變化以確定內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對線粒體膜電位的影響，進而推測線粒體通透性轉(zhuǎn)化孔(mPTP)開放情況；Western blot檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)GRP 78、GRP 94、IRE1的表達(dá)；電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)。結(jié)果 不同濃度2-DG能夠模仿mPTP開放劑atractyloside使mPTP開放，以100 μmol·L-12-DG作用最明顯；黃芪甲苷明顯抑制2-DG引起的mPTP開放；黃芪甲苷明顯抑制2-DG引起的GPR 78、GRP 94、IRE1的表達(dá)；黃芪甲苷減輕2-DG引起的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體損傷。結(jié)論 2-DG可以誘發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)，黃芪甲苷可能通過GRP 78、GRP 94、IRE1抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激進而阻止mPTP開放，發(fā)揮心肌細(xì)胞線粒體保護作用。

心肌保護；黃芪甲苷；內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激；線粒體；2-脫氧-D-葡萄糖；線粒體通透性轉(zhuǎn)移孔

黃芪甲苷(Astragaloside Ⅳ, Ast-Ⅳ)是中藥黃芪的重要活性成分之一[1]，廣泛應(yīng)用于用于臨床心血管疾病的治療，對于膿毒癥，糖尿病等也能起到很好的治療作用[2-3]。我們的前期研究顯示，黃芪甲苷通過NO激活cGMP/PKG使GSK-3β失活進而抑制mPTP開放，發(fā)揮心肌線粒體保護作用[4]；心肌缺血/再灌注可以引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)生理功能發(fā)生紊亂，引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)[5]，本研究探討黃芪甲苷的心肌保護作用是否與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)及其可能的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制。

1 材料

1.1 藥品及試劑 黃芪甲苷(天津馬克生物技術(shù)有限公司，純度>99%，批號：HQJG-20110507)；GRP78、GRP 94、IRE1、Tubulin等一抗以及辣根過氧化物酶標(biāo)記山羊抗兔IgG二抗(美國Cell Signaling Technology公司)；2-Deoxy-D-Glucose(2-DG)、Atractyloside、Cyclosporin A(美國Sigma公司)；TMRE熒光染料(Molecular Probes 公司)；BCA蛋白濃度檢測試劑盒、ECL發(fā)光檢測試劑盒(碧云天生物技術(shù)研究所)。

1.2 儀器 FV 1000激光掃描共聚焦顯微鏡(日本OLYMPUS公司)；37℃二氧化碳孵育箱(美國Forma公司)；JY200C電泳儀(北京君意電泳設(shè)備公司)。

2 方法

2.1 H9c2大鼠心肌細(xì)胞培養(yǎng) H9c2大鼠心肌細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)，在DMEM(Gibco公司)中加入雙抗(青霉素、鏈霉素)和胎牛血清(Hyclone公司)，培養(yǎng)至瓶內(nèi)細(xì)胞達(dá)到90%左右，用濃度為0.25%胰蛋白酶消化細(xì)胞，改變其貼壁狀態(tài)，加入培養(yǎng)基終止消化，傳至相應(yīng)培養(yǎng)皿。

2.2 實驗分組 將培養(yǎng)狀態(tài)良好的H9c2心肌細(xì)胞(細(xì)胞含量至90%)，用PBS沖洗2～3次，細(xì)胞用標(biāo)準(zhǔn)Tyrode液(5 mmol·L-1HEPES, 140 mmol·L-1NaCl, 6 mmol·L-1KCL, 8 mmol·L-1glucose, 1 mmol·L-1MgCl2,1 mmol·L-1CaCl2, pH 7.4)孵育2 h。① 共聚焦顯微鏡2-DG濃度實驗：加入線粒體熒光染料TMRE，置于37℃二氧化碳孵育箱10～30 min，PBS沖洗2～3次，隨機分為對照組、不同濃度2-DG組(10、50、100、500、1 000 μmol·L-1)，mPTP開放劑Atractyloside組和mPTP抑制劑Cyclosporin A組。② 蛋白檢測、電鏡觀察：細(xì)胞隨機分為對照組(未經(jīng)過任何處理的細(xì)胞，置于37℃二氧化碳孵箱50 min)、2-DG組(靜置20 min，加入100 μmol·L-12-DG孵育30 min)、黃芪甲苷+2-DG組(50 μmol·L-1黃芪甲苷處理20 min，加入100 μmol·L-12-DG孵育30 min)、黃芪甲苷組(靜置30 min，再50 μmol·L-1黃芪甲苷處理20 min)。

2.3 Western blot法檢測GRP 78、GRP 94、IRE1蛋白的表達(dá) 將細(xì)胞用PBS沖洗2～3次，利用Tyrode孵育2 h，按實驗分組處理細(xì)胞，加入蛋白裂解液，使其裂解10～30 min(在冰上進行)，把細(xì)胞刮下，置于EP管中，超聲波破碎，4℃ 15 000 r·min-1，棄沉淀，加入96孔板進行蛋白濃度測量，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線上樣，制膠，轉(zhuǎn)膜，10%脫脂牛奶室溫封閉，一抗4℃搖床過夜。隔日二抗，利用ECL熒光顯色，并用Image J軟件圖像分析。

2.4 共聚焦顯微鏡觀察TMRE熒光強度的變化 將90%融合的細(xì)胞，傳代于共聚焦小皿，TMRE 37℃孵育箱10～30 min，選擇543 nm激發(fā)光激發(fā)其產(chǎn)生560 nm發(fā)射波，共聚焦顯微鏡觀察。正常情況下，線粒體內(nèi)膜帶負(fù)電荷，外膜帶正電荷，熒光探針TMPE帶正電荷，它可以自由進入并聚集于線粒體中，共聚焦觀察為紅色熒光；當(dāng)mPTP開放時線粒體膜電位減少或消失，TMRE從線粒體中釋放，共聚焦觀察紅色減少或消失。TMRE熒光強度的改變可以判斷線粒體膜電位的變化，進而推測mPTP的開放程度。

2.5 電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu) 培養(yǎng)細(xì)胞至85%～90%融合，消化離心，戊二醛固定24 h，PBS洗3次，每次15 min，PBS浸泡過夜，依次用50%，70%，90%，100%的乙醇脫水15 min，乙醇與丙酮1 ∶1的混合液15 min，丙酮15 min去乙醇，加樹脂與丙酮1 ∶1的混合液37℃ 2～3 h，樹脂低溫紫外聚合2～3 d，56℃ 2～3 d，電鏡掃描圖像。

3 結(jié)果

3.1 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對線粒體膜電位(mPTP開放)的影響 與對照組相比，不同濃度內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)劑2-DG可以模擬mPTP開放劑Atractyloside，明顯減少線粒體TMRE的紅色熒光強度，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。因為100 μmol·L-1減弱熒光強度最明顯，既能誘導(dǎo)mPTP開放又具有相對較小細(xì)胞毒性，故后續(xù)實驗以此作為2-DG作用濃度。mPTP抑制劑Cyclosporin A沒有明顯影響熒光強度變化(Fig 1)。

3.2 黃芪甲苷對線粒體膜電位(mPTP開放)的影響 與對照組相比，2-DG處理30 min后，TMRE熒光強度明顯降低，黃芪甲苷預(yù)處理明顯抑制TMRE熒光強度的降低，黃芪甲苷本身無明顯變化(Fig 2)。

3.3 黃芪甲苷對GRP 78和GRP 94的影響 與對照組相比，2-DG使GRP 78和GRP 94表達(dá)明顯增多，黃芪甲苷抑制此過程，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)(Fig 3)。

3.4 黃芪甲苷對IRE1表達(dá)的影響 與對照組相比，2-DG使IRE1的表達(dá)明顯增多，而黃芪甲苷明顯抑制IRE1此過程，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)(Fig 4)。

3.5 黃芪甲苷對細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響 白色箭頭所指為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，黑色箭頭所指為線粒體。電鏡下觀察，正常細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，線粒體嵴較致密，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分布在細(xì)胞核周圍，管腔狹窄細(xì)長；2-DG組線粒體成空泡狀，嵴斷裂、溶解；內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔擴大，部分脫顆粒等發(fā)生明顯的損傷；黃芪甲苷+2DG組損傷程度明顯減輕，說明黃芪甲苷能減輕內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體的損傷(Fig 5)。4 討論

急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)嚴(yán)重危害人類健康，發(fā)病急、預(yù)后差，即使經(jīng)過溶栓、介入等手段改善了缺血的心肌，但是在冠脈急性再通的過程中仍會引起缺血心肌的炎癥、壞死、心律失常，也就是心肌缺血/再灌注損傷(myocardial ischemic/reperfusion injury, MIRI)。詳細(xì)探討MIRI機制具有非常重要的基礎(chǔ)和臨床意義。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激是指各種原因?qū)е录?xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)穩(wěn)態(tài)失衡、生理功能發(fā)生紊亂的一種病理過程。心肌缺血/再灌注損傷過程中的自由基損傷、細(xì)胞內(nèi)Ca2+超載等均可以引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能障礙，觸發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激[6-7]。

黃芪甲苷是從中藥黃芪中所提煉的一種重要活性成分之一，廣泛用于臨床心血管疾病的治療。線粒體是真核細(xì)胞的重要細(xì)胞器，其主要功能是通過氧化磷酸化生成三磷酸腺苷(ATP)，供給生物體可以直接利用的能量。近年來的研究表明，許多疾病的發(fā)生發(fā)展過程都與線粒體有關(guān)。研究證實，線粒體在心肌再灌注損傷中起關(guān)鍵性的作用，這主要是因為粒線體內(nèi)、外膜上存在線粒體通透性轉(zhuǎn)移孔(mitochondrial permeability transition pore, mPTP)[5,8]。正常生理狀況下，mPTP處于保持關(guān)閉。當(dāng)機體受到應(yīng)激刺激時可使mPTP開放，分子量少于1.5 ku的物質(zhì)可自由通過線粒體膜，致使內(nèi)膜滲透壓增高從而繼發(fā)線粒體腫脹，ATP生成減少，線粒體膜電位減少或消失。我們的前期研究也顯示，黃芪甲苷通過抑制mPTP開放發(fā)揮心肌線粒體保護作用[4,9]。

為了研究黃芪甲苷的心肌線粒體保護作用是否與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)，我們首先對H9c2大鼠心肌細(xì)胞進行常規(guī)傳代培養(yǎng)，用內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)劑2-脫氧-D-葡萄糖(2-DG)處理細(xì)胞。TMRE染色后利用激光掃描共聚焦顯微鏡，觀察其對線粒體膜電位的影響，進而推測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與mPTP開放的關(guān)系。結(jié)果如Fig 1所示，與對照組相比，不同濃度2-DG能夠模擬mPTP開放劑Atractyloside，使線粒體TMRE紅色熒光強度明顯減弱，mPTP抑制劑Cyclosporin A沒有明顯影響熒光強度的變化，說明2-DG誘導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激能夠使mPTP開放。由于終濃度為100 μmol·L-1時效果最明顯，故以此作為實驗濃度。而黃芪甲苷能夠明顯抑制2-DG引起的TMRE熒光強度降低，說明黃芪甲苷通過抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激阻止mPTP開放，發(fā)揮心肌線粒體保護作用(Fig 2)。

Fig 1 Effect of ERS on mPTP opening in H9c2 cardiac cells

Different doses of 2-DG could mimic the mPTP opener atractyloside(Atr), significantly decreased TMRE fluorescence compared to the normal with the peak at 100 μmol·L-1. The mPTP inhibitor cyclosporin A(CsA) was not able to change the fluorescence intensity.*P<0.05vsnormal (Scale bar, 20 μm)

Fig 2 Effect of Astragaloside Ⅳ on mPTP opening in H9c2 cardiac cells

2-DG significantly decreased TMRE fluorescence compared to the normal. Astragaloside Ⅳ prevented 2-DG-induced TMRE fluorescence reduction. Astragaloside Ⅳ did not change the fluorescence intensity.*P<0.05vsnormal;#P<0.05vs2-DG(Scale bar,20 μm)

葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78和94(GRP 78和GRP 94)是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激早期伴侶分子，介導(dǎo)蛋白合成暫停等細(xì)胞反應(yīng)，以恢復(fù)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)以維持細(xì)胞存活，他們是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的關(guān)鍵調(diào)控分子[10]。在我們的實驗中，2-DG使GRP 78和GRP 94表達(dá)明顯增多，黃芪甲苷抑制此過程，說明2-DG可以誘發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)，黃芪甲苷可能通過GRP 78和GRP 94抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。

肌醇必需酶1(IRE1)是位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的跨膜蛋白，在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激引起高度保守的未折疊蛋白反應(yīng)中，IRE1可以比作一個感受器，它在胞質(zhì)端具有絲氨酸/蘇氨酸激酶活性，當(dāng)未折疊蛋白堆積、缺氧、鈣失衡時，IRE1通過自身磷酸化驅(qū)動分子伴侶GRP 78以及很多未折疊蛋白應(yīng)答相關(guān)的基因表達(dá)，在決定細(xì)胞最終生存或死亡上起著至關(guān)重要的作用[11-13]。在我們的實驗中，2-DG使IRE1的蛋白量明顯增高，而黃芪甲苷預(yù)處理可以明顯抑制此過程(Fig 4)，說明黃芪甲苷通過IRE1抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。

Fig 3 Effect of Astragaloside Ⅳ on GRP 78 and GRP 94 expression in H9c2 cardiac cells

1：Control;2:2-DG;3:Ast-Ⅳ+2-DG;4:Ast-Ⅳ.2-DG significantly increased GRP 78 and GRP 94 expression compared to control, Astragaloside Ⅳ significantly reduced GRP 78 and GRP 94 expression in H9c2 cardiac cells.*P<0.05vscontrol;#P<0.05vs2-DG

Fig 4 Effect of Astragaloside Ⅳ on IRE1 expression in H9c2 cardiac cells

1:Control;2:2-DG;3:Ast-Ⅳ+2-OG;4:Ast-Ⅳ. 2-DG significantly increased IRE1 expression compared to control, Astragaloside Ⅳ significantly reduced IRE1 expression in H9c2 cardiac cells.*P<0.05vscontrol;#P<0.05vs2-DG

線粒體作為全身功能“中樞”，一旦受到損傷機體將陷入“癱瘓”狀態(tài)，線粒體功能障礙在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)損傷中扮演重要的角色[5]。我們的實驗結(jié)果如Fig 5所示，正常細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，線粒體形態(tài)正常，嵴較致密；內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分布在細(xì)胞核周圍，管腔狹窄細(xì)長。2-DG使線粒體變成空泡狀，線粒體嵴斷裂、溶解；內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔擴張，部分內(nèi)質(zhì)網(wǎng)脫顆粒。黃芪甲苷明顯減輕以上損傷，說明黃芪甲苷對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體具有一定的保護作用。

Fig 5 Effect of Astragaloside Ⅳ on ultrastructure with transmission electron microscopy in H9c2 cardiac cells

A:Control;B: 2-DG;C: Ast-Ⅳ+2-DG;D:Ast-Ⅳ.2-DG induced mitochondrial swelling, cristae broken, dissolved or disappeared, endoplasmic reticulum swelling and degranulation compared to control; Astragaloside IV significantly prevented injury of mitochondria and endoplasmic reticulum. The white arrow marks the endoplasmic reticulum and the black arrow marks the mitochondria(Scale bar, 2 μm)

綜上所述，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)劑2-DG可以使mPTP開放，黃芪甲苷明顯抑制2-DG引起的mPTP開放，同時增加GRP 78、GRP 94、IRE1的表達(dá)，減輕內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體的損傷，提示黃芪甲苷可能通過GRP 78、GRP 94、IRE1抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激阻止mPTP開放，發(fā)揮心肌線粒體保護作用。黃芪甲苷的“內(nèi)質(zhì)網(wǎng)-線粒體”交叉對話機制有待于我們進一步研究。

[1] 國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典:一部[M]. 北京: 中國醫(yī)藥科技出版社, 2010:283-4.

[1] National Pharmacopoeia Committee.People′sRepublicofChinaPharmacopoeia:[M]. Beijing: China Medical Science and technology press, 2010:283-4.

[2] Liu R, Jiang H, Tian Y, et al. Astragaloside Ⅳ protects against polymicrobial sepsis through inhibiting inflammatory response and apoptosis of lymphocytes[J].JSurgRes, 2016, 200(1):315-23.

[3] Lv L,Wu S Y, Wang G F, et al. Effect of astragaloside Ⅳ on hepatic glucose-regulating enzymes in diabetic mice induced by a high-fat diet and streptozotocin[J].PhytotherRes, 2010, 24(2):219-24.

[4] 賀永貴, 鄭 桓, 張國彬, 等. 黃芪甲苷對H2O2所致大鼠心肌細(xì)胞線粒體損傷的保護作用及其機制[J]. 中國藥學(xué)雜志, 2014, 49(17):1519-23.

[4] He Y G, Zheng H, Zhang G B, et al. Effect of Astragaloside Ⅳ on H2O2-induced mitochondrial damage in rat myocardium and its molecular mechanism[J].ChinPharmJ, 2014, 49(17):1519-23.

[5] Wang G, Huang H, Zheng H, et al. Zn2+and mPTP mediate endoplasmic reticulum stress inhibition-induced cardioprotection against myocardial ischemia/reperfusion injury[J].BiolTraceElemRes,2016,174(1):189-97.

[6] Guo X F, Yang X J. Endoplasmic reticulum stress response in spontaneously hypertensive rats is affected by myocardial ischemia reperfusion injury[J].ExpTherMed, 2015, 9(2):319-26.

[7] Matsunaga D, Sreekumar P G, Ishikawa K, et al. Humanin protects RPE cells from endoplasmic reticulum stress induced apoptosis by upregulation of mitochondrial glutathione[J].PLoSOne,2016,11(10):1-22.

[8] Miura T, Tanno M. The mPTP and its regulatory proteins: Final common targets of signaling pathways for protection against necrosis[J].CadiovascRes, 2012, 94(2):181-9.

[9] 賀永貴,李王芳,伊紅麗,等.黃芪甲苷抑制GSK-3β活性介導(dǎo)大鼠心肌缺血/再灌注損傷作用的線粒體機制研究[J].中國藥理學(xué)通報, 2014,(03):402-6.

[9] He Y G, Li W F, Yi H L, et al. Mitochondrial mechanism of Astragaloside IV induced inhibition of GSK-3β in myocardial ischemia/reperfusion injury in rats[J].ChinPharmacolBull, 2014,(03):402-6.

[10]Liu M Q, Chen Z, Chen L X. Endoplasmic reticulum stress: a novel mechanism and therapeutic target for cardiovascular diseases[J].ActaPharmacolSin, 2016, 37(4):425-43.

[11]Jerry Chiang W C, Lin J H. The effects of IRE1, ATF6, and PERK signaling on adRP-linked rhodopsins[J].AdvExpMedBiol, 2014, 801:661-7.

[12]Mei Y, Thompson M D, Cohen R A, et al. Endoplasmic reticulum stress and related pathological processes[J].JPharmacolBiomedAnal, 2013, 1(2):1000107.

[13]Ranatunga S, Tang C H, Kang C W, et al. Synthesis of novel tricyclic chromenone-based inhibitors of IRE-1 RNase activity[J].JMedChem, 2014,(10):4289-301.

Role of endoplasmic reticulum stress in Astragaloside Ⅳ-induced cardioprotection in H9c2 cardiac cells

LI Lu, CAI Zhi-liang, HE Yi-fei, ZHU Ying, XI Jin-kun, HE Yong-gui

(MedicalResearchCenterofNorthChinaUniversityofScienceandTechnology,Chinese-HungarianCooperationChineseMedicalLaboratory,TangshanKeyLaboratoryofDrugResearch,TangshanHebei063000,China)

Aim To explore the role of endoplasmic reticulum stress(ERS) in Astragaloside Ⅳ-induced cardioprotection in H9c2 cardiac cells, and to explore the potential mitochondrial mechanism.Methods Conventional culture was performed of rat heart tissue-derived H9c2 cells. Experiment was randomly divided into the control group, the ERS inducer 2-Deoxy-D-Glucose(2-DG) group, Astragaloside Ⅳ and 2-DG combination group, Astragaloside Ⅳ group. Confocal microscopy was used to observe the changes of TMRE fluorescence intensity so as to confirm the influence of ERS on the mitochondrial potential, and further speculate on the opening of the mitochondrial permeability transition pore(mPTP). Western blot analysis was applied to detect the expressions of ERS proteins GRP 78, GRP 94 and IRE1. Transmission electron microscopy was used to observe the ultrastructure of the cells.Results Different doses of 2-DG could mimic the mPTP opener atractyloside to induce the mPTP opening with the peak at 100 μmol·L-1;Astragaloside Ⅳ significantly reduced 2-DG-induced mPTP opening, the expression of GPR 78, GRP 94 and IRE1 and reduced injury of mitochondria and endoplasmic reticulum.Conclusions Endoplasmic reticulum stress could be induced by 2-DG. Astragaloside ⅳ-induced mitochondrial cardioprotection involves inhibition of the ERS through GRP 78, GRP 94 and IRE1 by prevention of the mPTP opening.

cardioprotection; Astragaloside Ⅳ; endoplasmic reticulum stress; mitochondria; 2-Deoxy-D-Glucose; mitochondrial permeability transition pore

時間：2017-5-25 17:44 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20170525.1744.042.html

2017-01-12,

2017-02-20

國家自然科學(xué)基金資助項目(No 81570275)；河北省高等學(xué)校科學(xué)技術(shù)研究重點項目(No ZD2014006)；唐山市缺血性心臟病基礎(chǔ)研究科技創(chuàng)新團隊(No 16130206B)；華北理工大學(xué)杰出青年基金(No JP201302)；大學(xué)生創(chuàng)新性實驗設(shè)計項目(No X2015146)

李 璐(1994-)，男,學(xué)士，E-mail：2495748383 @qq.com; 賀永貴(1974-)，男，博士，副教授，研究方向：心腦血管保護機制，通訊作者,E-mail：heyonggui-1994@163.com； 習(xí)瑾昆(1975-)，女，博士，教授，研究方向：心腦血管保護機制，通訊作者，E-mail：jinkunxi@126.com

10.3969/j.issn.1001-1978.2017.06.021

A

1001-1978(2017)06-0854-05

R-332；R284.1；R329.24；R542.2