TJM-F92株弱毒疫苗免疫效果評估

文│譚勝國（湖南生物機電職業技術學院） 高華 陳志剛 何文輝（湖南省沅江市畜牧水產局） 陳洋清（湖南省新寧縣畜牧水產局） 李海輝（湖南“豬衛士”服務有限公司）

TJM-F92株弱毒疫苗免疫效果評估

文│譚勝國（湖南生物機電職業技術學院） 高華 陳志剛 何文輝（湖南省沅江市畜牧水產局） 陳洋清（湖南省新寧縣畜牧水產局） 李海輝（湖南“豬衛士”服務有限公司）

豬高致病性藍耳病是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）在編碼Nsp2的基因上發生缺失的變異毒株引起的一種急性、高致死性傳染病，病毒致病力強，傳播速度快，豬群發病率和死亡率高。母豬感染后發生流產、死胎、弱胎等，流產率可達30%以上；仔豬感染后表現為呼吸困難、敗血癥等癥狀，發病率可達100%，死亡率可達50%以上。該病在臨床上較難控制，對養豬業危害極大。

近幾年，針對高致病性藍耳病的控制方法，國內外專家各持己見，但大致可歸為兩種：一種是通過病毒馴化措施和生物安全體系來控制，即通過自然或人工感染的辦法（如全群返飼本場急性感染豬的排泄物或直接接種適當劑量的病毒粒子等）將豬群一次性暴露于藍耳病的高感染壓力和風險之下，進行場內病毒馴化，逐步穩定豬群；并通過嚴格的生物安全管理體系封閉全場，經200天左右讓豬群逐步轉陰，同時不斷培育藍耳病陰性的后備種豬群來補充生產。另一種則是通過“堅持疫苗免疫、藥物保健和必要的生物安全管理措施”三者相結合來控制，即通過每年免疫適當毒株的藍耳病弱毒疫苗2～3次，結合藥物保健和生物安全措施，打造和培育適應本場氣候、具備藍耳病優勢、穩定毒株的經產種豬群來持續穩定生產。顯而易見，前者需要先進的生產設施、過硬的生產管理技能以及完善的生物安全體系作支持，而從目前國內很多規模化豬場實際情況來看后者更適用。

湖南生物機電職院動物科技系與湖南“豬衛士”服務有限公司共建的豬病防控中心，通過抗原抗體監測篩選出湖南省內某高致病性藍耳病（HP-PRRS）臨床表現不穩定且活躍的豬場，采用“TJM-F92變異株PRRSV弱毒疫苗免疫、適當藥物保健和必要的生物安全管理”相結合的措施進行綜合干預；同時，通過IDEXX血清-ELISA方法跟蹤對比監測PRRS抗體消長規律和對生產報表數據分析，進行疫苗免疫效果評估，為豬場綜合防控藍耳病提供依據。

一、試驗材料與方法

1.試驗材料。通過RT-PCR和ELISA等抗原抗體檢測方法篩選出湖南省內某千頭母豬存欄規模、高致病性藍耳病臨床表現不穩定且活躍的豬場作為試驗豬場。高致病性藍耳病RT-PCR病原診斷試劑盒由湖南農業大學動物醫學院中央與地方共建重點實驗室提供，擴增片段包括Nsp2基因的整個缺失區，目的條帶大小約480堿基對（bp）。藍耳病ELISA檢測試劑盒為IDEXX PRRSX3，由美國IDEXX生產。試驗用疫苗是國內某廠家高致病性藍耳病TJM-F92變異株弱毒疫苗。

2.試驗方法。試驗時間為2015年12月到2016年3月，進行為期4個月的跟蹤監測。

（1）情況調查。通過現場調查方法對發病豬場基本概況、發病情況、臨床表現、基礎免疫和生產異動等基本情況進行摸底了解。根據動物疫病抗體檢測樣本數量與準確性的關系，按90%以上的準確性對全場母豬群進行隨機抽樣，共采集血清樣品38份進行抗體檢測，其中流產母豬8份、暫定健康母豬30份，評估藍耳病血清學抗體水平的穩定性。通過前腔靜脈無菌采血的方法，采集臨床發病呈急性感染的母豬全血5份，運用RT-PCR方法進行病毒特異性檢測。

（2）疫苗免疫與抗體水平監測。通過抗原抗體檢測確定為“高致病性藍耳病陽性活躍場”后，在表現出臨床癥狀的早期立即采用高致病性藍耳病TJM-F92變異株弱毒疫苗對全場繁殖母豬群進行普免干預（劑量為1頭份/頭）。分別于免疫前、免疫后30天和90天，按90%以上的準確性對全場母豬群進行隨機抽樣，并進行ELISA抗體檢測，跟蹤監測免疫前后抗體水平消長規律。

（3）其他綜合性措施。一是封閉全場繁殖種豬群，暫時不引進種豬，確立豬群“單向流動”原則（即全場只出不進）；同時對臨床表現為“頑固性子宮炎癥、屢配不孕、體弱多病及生產性能差”的種豬立即清除出生產群和淘汰。二是嚴格執行豬場的各級生物安全和消毒制度，尤其是哺乳和保育階段的“全進全出”和“空欄清洗、消毒”措施，防止場內病毒的交叉和持續循環感染。三是選用大環內酯類抗生素（如泰萬菌素或替米考星）和板藍根、大青葉等中草藥，在不影響豬群采食量的基礎上，對母豬產前、產后和仔豬斷奶前后進行各1周的藥物保健。

（4）生產穩定情況評估。根據試驗期間主要臨床生產數據（返情與流產胎數、死胎與木乃伊胎比例、哺乳成活率和保育成活率）綜合分析，對豬場生產情況進行簡要評估。

（5）試劑盒判斷標準。IDEXX PRRSX3 ELISA試驗成立條件：陽性對照的平均OD650－陰性對照的平均OD650＞0.15，陰性對照的平均OD650＜0.15。S/P值計算方法：S/P=（樣品OD650-陰性對照的平均OD650）/（陽性對照的平均OD650-陰性對照的平均OD650）。判斷標準：陰性值為S/P﹤0.4；陽性值為S/ P≥0.4。

表1 38份母豬樣品IDEXX血清-ELISA抗體檢測結果

二、結果與分析

1.藍耳病不穩定活躍豬場背景調查。

（1）臨床情況調查。湖南省岳陽市某千頭存欄母豬的規模化豬場于2015年11月29日至12月12日突然發生妊娠母豬集中流產、早產和產死胎等現象，母豬高熱、不食、局部皮膚發紺，繼而流產和產死胎，近半個月之內，流產和產死胎的母豬達到30余頭。經調查，該場的免疫及防疫制度較為混亂：一方面，曾使用過勃林格（V2332經典株）和中牧股份（Jiangxi-1R變異株）兩種不同毒株的藍耳病弱毒疫苗，但免疫執行不到位，隨意性較強（發病時種豬群已超過6個月未進行疫苗免疫）；另一方面，頻繁引種，且不經任何隔離及馴化措施便并群生產（據調查了解，該場最近1次引種并群的時間為2015年11月20日）。

（2）血清學ELISA調查。38份母豬血清樣品經IDEXX PRRSX3 ELISA抗體檢測結果見表1，PRRS血清學抗體水平的穩定性結果如下：暫定健康母豬群的藍耳病抗體陽性率為57%，平均S/P值0.77，離散度81%，整體水平偏低，血清學抗體分布欠整齊，雖仍處于相對穩定，但受感染的風險較高（藍耳病抗體陰性率達43%）；而流產母豬群的藍耳病抗體陽性率為88%，強陽性率（即S/P＞2.5的比例）為37.5%，平均S/P值1.88，離散度82%，血清學抗體分布呈兩極化，急性病毒血癥極為明顯（2頭流產母豬藍耳病抗體S/P值＞3.6）。由此可見，流產母豬群極有可能受到了藍耳病野毒的攻擊，臨床已出現妊娠母豬急性感染。

（3）病原學調查。5份發病母豬的全血樣品經高致病性藍耳病RTPCR病原特異性檢測，得到目的條帶為480bp，與引物設計結果一致，表明血清有高致病性藍耳病病原，且HP-PRRSV呈陽性的樣品檢出率為60%（3/5）。由此進一步證實，妊娠母豬受到了高致病性藍耳病野毒的攻擊而導致集中流產和產死胎。

2.抗體水平監測。免疫前、免疫后30天和90天隨機采集的母豬血清樣品經IDEXX PRRSX3 ELISA抗體檢測結果見表2。由表2可知，免疫前藍耳病血清學抗體處于較低水平（陽性率為63%，強陽性率8%，平均S/P值1.00，離散度98%，抗體分布呈兩極化）；免疫后30天達到抗體高峰值（陽性率91%，強陽性率65%，平均S/P值3.04，離散度49%，病毒血癥活躍）；免疫后90天恢復至免疫前水平（陽性率63%，強陽性率13%，平均S/P值0.99，離散度95%，抗體分布仍表現出兩極化）。

3.臨床生產情況評估。試驗期間主要臨床生產數據（返情與流產胎數、死胎與木乃伊胎比例、哺乳成活率和保育成活率）綜合分析見表3。由表3可知，試驗期間雖通過采取疫苗干預和生物安全管理等綜合性措施，豬場的臨床生產成績有所改善，尤其是對繁殖種豬群進行封群和清群管理（即杜絕場外傳染源和清除場內傳染源）以后，母豬的集中流產和高比例返情現象得到顯著改善；但死胎與木乃伊胎比例居高不下，哺乳仔豬死亡率持續升高（可能還與春節期間人員流動及氣溫等因素有關）等現象在一定程度上仍反映出“藍耳病毒的持續性感染問題”。

三、小結與討論

1.通過臨床發病情況及血清學ELISA調查和RT-PCR病原學檢測證實，該場為高致病性藍耳病不穩定活躍豬場。該場在臨床上表現出的妊娠母豬集中流產、早產和產死胎等現象是由高致病性藍耳病野毒攻擊而引起，其具體原因應與種豬群長時間未執行藍耳病免疫，生產母豬群藍耳病血清學抗體轉陰率較高（抽檢的陰性率在40%左右），受感染的風險增加，再加上頻繁引進未經隔離與馴化的帶毒豬群并入生產群等因素有關。

2.據資料顯示，IDEXX PRRSX3 ELISA是以核衣殼蛋白（N 蛋白）作為主要包被抗原的PRRSV抗體間接ELISA方法。因核衣殼蛋白（N 蛋白）主要參與PRRSV組裝與復制，故而IDEXX PRRSX3 ELISA檢測的N蛋白抗體水平在一定程度上反映了PRRSV病毒復制與感染狀態，所以該方法通常被用于評估豬群的PRRS感染狀態或感染風險。

表2 IDEXX血清-ELISA方法監測免疫前后抗體水平消長情況

表3 試驗期間主要臨床生產數據分綜合析

3.本試驗在TJM-F92變異株弱毒疫苗普免30天后檢測到的PRRSV抗體水平峰值（陽性率91%，強陽性率65%，平均S/P值3.04）反映出PRRSV（疫苗毒或野毒）的高感染水平，病毒血癥活躍。這一現象與疫苗廠家所倡導的疫苗免疫效果（TJM-F92株疫苗毒缺失了PRRSV毒力基因，免疫后疫苗毒血癥較輕，帶毒與排毒時間短）不同；另與豬病防控中心多年來監測到不同毒株疫苗免疫后的PRRSV抗體水平也相差甚遠（勃林格V2332株PRRS疫苗免疫30天后平均抗體S/P值一般在1.0～2.0，病毒血癥比例在10%左右；JiangXi-1R株PRRS弱毒疫苗免疫30天后平均抗體S/P值一般在2.0左右，病毒血癥比例在20%以內）。由此推測，上述PRRSV抗體水平峰值并非疫苗毒所產生，而是野毒攻擊所致，且極有可能是通過疫苗注射時的針頭將一定數量的PRRSV野毒粒子擴散與感染所致（臨床上注射疫苗時未能有效做到“一豬一針頭”）。臨床生產上表現的“死胎與木乃伊胎比例持續居高不下，哺乳仔豬死亡率持續升高”也能驗證這一點。

4.本次試驗篩選出湖南省內某高致病性藍耳病臨床表現不穩定且活躍的豬場，進行了階段性的疫苗免疫探索與評估，從PRRSV抗體血清-ELISA 跟蹤監測和臨床生產數據分析得知，TJM-F92變異株PRRSV弱毒疫苗作臨床緊急免疫時不能有效阻止PRRSV野毒持續感染與排毒。