左乙拉西坦對(duì)癲癇模型大鼠海馬組織中GFAP及PSD95表達(dá)的影響①

王 禹，聶 磊，趙冬梅，鄒艷紅，李春玉

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院兒內(nèi)二科,黑龍江 佳木斯 154003)

左乙拉西坦對(duì)癲癇模型大鼠海馬組織中GFAP及PSD95表達(dá)的影響①

王 禹，聶 磊，趙冬梅，鄒艷紅，李春玉

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院兒內(nèi)二科,黑龍江 佳木斯 154003)

目的：研究左乙拉西坦對(duì)癲癇模型大鼠海馬組織中膠質(zhì)纖維性蛋白(GFAP)及突觸后致密物(PSD95)表達(dá)的影響。方法：選取清結(jié)級(jí)Wistar大鼠104只作為研究對(duì)象，隨機(jī)分為4組：生理鹽水組(NS組)23只，左乙拉西坦對(duì)照組(LEV組)24只，模型組(Li-pilo組)27只，模型+左乙拉西坦組(Li-pilo+LEV組)30只，LEV組與Li-pilo+LEV組的大鼠每日給予左乙拉西坦200mg/kg進(jìn)行灌胃，連續(xù)給藥4周。分別于第7d、14d、28d采用RT-PCR方法動(dòng)態(tài)檢測(cè)大鼠海馬組織中GFAP及PSD95表達(dá)情況。結(jié)果：經(jīng)治療后，與NS組相比，Li-pilo+LEV組第7d、14d、28dGFAP的表達(dá)水平明顯升高，PSD95的表達(dá)量明顯降低(P<0.05)；與Li-pilo組相比，Li-pilo+LEV組第7d、14d、28dGFAP的表達(dá)水平明顯降低，PSD95的表達(dá)水平明顯升高(P<0.05)。結(jié)論：左乙拉西坦的抗癲癇作用可能與通過(guò)上調(diào)PSD95的表達(dá)及抑制GFAP的表達(dá)有關(guān)，具體作用機(jī)制還需進(jìn)一步研究。

左乙拉西坦；癲癇模型；海馬組織；GFAP；PSD95

癲癇是兒科常見的神經(jīng)系統(tǒng)疾病之一，是一種由大腦神經(jīng)元反復(fù)發(fā)作性異常放電所引起的暫時(shí)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙的慢性疾病[1]。臨床研究表明，癲癇的反復(fù)、持續(xù)發(fā)作以及多種抗癲癇藥物均會(huì)對(duì)發(fā)育階段兒童的認(rèn)知功能造成不同程度的影響，嚴(yán)重影響了患兒的生活質(zhì)量[2]。因此，尋找一種既能有效抗癲癇還具有腦保護(hù)的抗癲癇藥物已成為國(guó)內(nèi)為關(guān)注的焦點(diǎn)。左乙拉西坦是一種新型廣譜抗癲癇藥物，其主要通過(guò)與中樞神經(jīng)元突觸囊泡蛋白結(jié)合而發(fā)揮抗癲癇作用，對(duì)多種癲癇發(fā)作類型具有明顯的療效而且還能改善患兒認(rèn)知功能[3]。本研究通過(guò)建立癲癇大鼠模型，旨在探討左乙拉西坦對(duì)癲癇模型大鼠海馬組織中膠質(zhì)纖維性蛋白(GFAP)及突觸后致密物(PSD95)表達(dá)的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

選取清結(jié)級(jí)Wistar大鼠104只(大連醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供)作為研究對(duì)象，體重約為(100±20)g。隨機(jī)分為4組：NS組23只，LEV組24只，Li-pilo組27只，Li-pilo+LEV組30只。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

氯化鋰和匹羅卡品(Sigma公司)、左乙拉西坦(藥品注冊(cè)號(hào)H20091019UCBS.A.Belgim公司)、RT-PCR試劑盒和引物合成(天津市寶坻區(qū)意園達(dá)生物試劑有限公司)。兔抗大鼠GFAP抗體和兔抗大鼠PSD95抗體(上海寶泰生物科技有限公司)。

1.3 動(dòng)物模型的制備

模型建立的具體步驟[4]：Li-pilo組和Li-pilo+LEV組先給予120mg/kg氯化鋰腹腔注射，于20h后腹腔注射1.5mg/kg東莨菪堿，再于0.5h后腹腔注射80mg/kg匹羅卡品，并觀察大鼠的行為。根據(jù)RACINE癲癇等級(jí)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)[5]，0級(jí)：無(wú)反應(yīng)或抽搐停止；1級(jí)：面部、嘴出現(xiàn)節(jié)律性抽動(dòng)；2級(jí)：出現(xiàn)點(diǎn)頭或甩尾的現(xiàn)象；3級(jí)：肌陣攣、單側(cè)肢體抽動(dòng)；4級(jí)：出現(xiàn)多肢抽動(dòng)或強(qiáng)直；5級(jí)：全面性強(qiáng)直，伴不自主跌倒。當(dāng)出現(xiàn)Ⅳ級(jí)或以上發(fā)作持續(xù)45min后，給予地西泮10mg/kg腹腔注射終止發(fā)作。成功建模后，LEV組與Li-pilo+LEV組的大鼠每日給予左乙拉西坦200mg/kg進(jìn)行灌胃，NS組和Li-pilo組給予生理鹽水灌胃，連續(xù)給藥4周。分別于第7d、14d、28d提取大鼠海馬組織，采用RT-PCR方法動(dòng)態(tài)檢測(cè)大鼠海馬組織中GFAP及PSD95表達(dá)情況。

1.4RT-PCR方法檢測(cè)大鼠海馬組織中GFAP及PSD95表達(dá)水平

PCR反應(yīng)條件：預(yù)變性(95℃，5min)，變形性(95℃，30s)，退火(55℃，30s)延伸(72℃，60s)，終末延伸(72℃，10min)。最后采用Quantityone凝膠成像系統(tǒng)采集和分析結(jié)果。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

(1)NS組與LEV組相比，GFAP及PSD95表達(dá)水平無(wú)明顯差異(t=2.473,P>0.05)；(2)與NS組相比，Li-pilo+LEV組第7d、14d、28dGFAP的表達(dá)水平明顯升高(t=5.849,P<0.05)；與Li-pilo組相比，Li-pilo+LEV組第7d、14d、28dGFAP的表達(dá)水平明顯降低(t=6.752,P<0.05)。(3)與NS組相比，Li-pilo+LEV組的PSD95的表達(dá)量明顯降低(t=4.137,P<0.05)；與Li-pilo組相比，Li-pilo+LEV組的PSD95的表達(dá)水平明顯升高(t=4.642,P<0.05)。見表1。

表1 大鼠海馬組織中GFAP和PSD95的相對(duì)表達(dá)量比較

3 討論

癲癇是自發(fā)、短暫、慢性、反復(fù)發(fā)作的神經(jīng)系統(tǒng)疾病，好發(fā)于小兒時(shí)期[6]。癲癇科引起患兒認(rèn)知功能障礙、記憶力減退等表現(xiàn)，長(zhǎng)期反復(fù)的癲癇發(fā)作可對(duì)患兒日后生長(zhǎng)發(fā)育及生活質(zhì)量造成嚴(yán)重影響[7]。國(guó)內(nèi)外研究表明，左乙拉西坦作為一種新型廣譜抗癲癇藥物，在治療各類型癲癇疾病中均有明顯療效，該藥物主要通過(guò)與中樞神經(jīng)元突觸囊泡蛋白結(jié)合而發(fā)揮抗癲癇作用[8]。PSD95是突觸后膜的一層致密的蛋白質(zhì)復(fù)合體，與N-甲基-D-天冬氨酸結(jié)合，共同參與興奮性突觸的可塑性調(diào)節(jié)。GFAP屬于細(xì)胞骨架蛋白家族，在調(diào)節(jié)星形細(xì)胞運(yùn)動(dòng)及神經(jīng)突觸形成過(guò)程中具有重要意義[9]。本研究結(jié)果表明，應(yīng)用左乙拉西坦治療后，大鼠海馬組織中GFAP的表達(dá)水平明顯升高，PSD95的表達(dá)水平明顯降低。綜上所述，左乙拉西坦的抗癲癇作用可能與通過(guò)上調(diào)PSD95的表達(dá)及抑制GFAP的表達(dá)有關(guān)，具體作用機(jī)制還需進(jìn)一步研究。

[1]聶磊,王海燕,李春玉,等. 左乙拉西坦對(duì)癲癇大鼠海馬組織中GFAP及5-HT2A受體表達(dá)的影響[J]. 黑龍江醫(yī)藥科學(xué),2015,38(2):26-28

[2]聶磊,張濤,王海燕,等. 左乙拉西坦對(duì)癲癇大鼠海馬組織中5-HT2A受體表達(dá)及其認(rèn)知功能的影響[J]. 中國(guó)老年學(xué)雜志,2015,35(19):5415-5417

[3]韓麗萍,王海燕,喬霜,等. 左乙拉西坦對(duì)癲癇大鼠海馬組織中μ-calpain及caspase-3表達(dá)的影響[J]. 黑龍江醫(yī)藥科學(xué),2015,38(6):61-62，64

[4]潘曉華,王海燕. 左乙拉西坦對(duì)癲癇大鼠海馬組織EphA4表達(dá)的影響[J]. 齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2016,37(10):1272-1273

[5]王禹,王海燕,王婧,等. 左乙拉西坦對(duì)癲癇大鼠海馬組織中Syt1和PSD95表達(dá)的影響[J]. 黑龍江醫(yī)藥科學(xué),2016,39(4):14-15

[6]王一川,穆國(guó)軍,王影. 左乙拉西坦對(duì)致癇大鼠海馬組織中BMP4表達(dá)的影響[J]. 黑龍江醫(yī)藥科學(xué),2014,37(3):28-30

[7]馮宏達(dá),王禹,王海燕,等. 左乙拉西坦對(duì)癲癇大鼠海馬組織中突出后致密物PSD-95表達(dá)的影響[J]. 黑龍江醫(yī)藥科學(xué),2014,37(4):63-64

[8]張巖,王海燕,王影,等. 左乙拉西坦對(duì)癲癇大鼠認(rèn)知功能的影響研究[J]. 黑龍江醫(yī)藥科學(xué),2013,36(2):6-8

[9]王海燕,王影,聶磊,等. 左乙拉西坦對(duì)癲癇大鼠認(rèn)知功能及海馬組織中NPY和NCAM-mRNA表達(dá)的影響[J]. 黑龍江醫(yī)藥科學(xué),2013,36(3):3-5

1.黑龍江省衛(wèi)生計(jì)生委科研課題，編號(hào)：2014-225；2.佳木斯大學(xué)校級(jí)面上項(xiàng)目，編號(hào)：13z1201542。

王禹(1968～)男，黑龍江佳木斯人，碩士，副主任醫(yī)師。

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1008-0104(2017)03-0018-02

2016-11-19)