а-硫辛酸對戊四氮致癇大鼠認知功能保護作用①

和 梅,方 丹,王 璇

(佳木斯大學附屬第一醫院神經內科, 黑龍江 佳木斯154003)

а-硫辛酸對戊四氮致癇大鼠認知功能保護作用①

和 梅,方 丹,王 璇

(佳木斯大學附屬第一醫院神經內科, 黑龍江 佳木斯154003)

目的：通過戊四氮(PTZ)點燃癲癇模型，觀察癲癇發作后學習記憶能力與海馬中腦源性神經營養因子(BDNF)、白細胞介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子(TNF-a)水平影響及藥物а-硫辛酸(ALA)干預作用，并探討其機制。方法：選取雄性SPF級Wistar大鼠18只，分為NS組(生理鹽水組)、PTZ組(癲癇組)和ALA+PTZ組(治療組)，每組6只。每隔(48±2)h腹腔注射藥物：對照組(生理鹽水1mL/kg)；癲癇組(PTZ35mg/kg)，建立癲癇模型；治療組在PTZ注射前30min給予ALA50mg/kg，共28d。采用Morris水迷宮評價大鼠學習記憶功能，采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測海馬組織白細胞介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子(TNF-a)及腦源性神經營養因子(BDNF)水平。 結果：Morris水迷宮測試中ALA+PTZ組逃避潛伏期較PTZ組短(P<0.05)；ALA+PTZ組第一象限停留時間較PTZ組多(P<0.05)。ELISA檢測NS組和ALA+PTZ組大鼠海馬中BDNF的表達量高于PTZ組(P<0.05)；IL-6、TNF-a的含量低于PTZ組(P<0.05)。結論：ALA可以改善癲癇大鼠學習記憶功能，ALA能促進BDNF表達，減少海馬組織IL-6、TNF-a促炎性因子表達，從而改善癲癇大鼠的認知障礙。

癲癇；認知功能；а-硫辛酸

癲癇是一種常見的慢性神經系統疾病，其特點是不可預知的反復癇性發作[1]。大多數癲癇患者患一個或多個精神病并存的情況，以及行為障礙和認知功能障礙。除了癲癇，這些合并癥的綜合治療是一個挑戰，由于它們其中復雜病理生理關系。臨床研究表明在控制癲癇發作的同時改善認知功能是目前治療癲癇的熱點以及難點之一[2]。近年研究發現，炎癥反應與癲癇及癲癇后認知損害密切相關，抗炎治療可能是一個新的突破點。а-硫辛酸(ALA)是一種強效氧化劑，但是在最新的研究指出具有抗炎作用，同時對認知功能也有保護作用。戊四氮是GABA受體拮抗劑，在一個特定的時間段給予亞驚厥劑量(反復)，可緩慢導致慢性癲癇模型的點燃。因此，本研究旨在討論戊四氮致癇后認知功能與海馬中BDNF、IL-6、TNF-a的相關性及藥物ALA干預作用。

1 材料與方法

1.1 實驗動物分組和造模

健康成年雄性SPF級Wistar大鼠18只，體重250～290g，購于長春市億斯實驗動物技術有限責任公司。將其隨機分為NS組(生理鹽水組)、PTZ組(癲癇組)和ALA+PTZ組(治療組)，每組6只。實驗于上午8～10點進行，每隔(48±2)h腹腔注射。NS組給予生理鹽水1mL/kg，PTZ組大鼠給予PTZ35mg/kg，ALA+PTZ組大鼠注射PTZ前30min給予ALA50mg/kg，PTZ組給予等量生理鹽水。共28d。

1.2 癲癇行為觀察

每次注射后，動物被放置在隔離的透明有機玻璃籠子里，并觀察它們的行為1h。行為學分級標準依據驚厥程度分級(Racine分級)，將大鼠行為分為5級。0級：無任何反應，呈正常的行為狀態；1級：多動、躁動和觸須抽搐；2級：點頭，頭陣攣；3級：單側肢體陣攣；4級：雙側肢體陣攣；5級：全身陣攣，失去平衡，跌倒。連續5次達到3級或3級以上為完全點燃。

1.3Morris水迷宮 (MWM)試驗

在第29天行Morris水迷宮訓練。①定位航行試驗：大鼠按固定的位點放入水中，記錄大鼠爬上平臺平均花費時間，記錄為逃避潛伏期。若大鼠未能在60s內找到平臺，將其引至平臺并停留20s，則潛伏期記為60s。②空間探索實驗：完成①試驗后，去掉平臺，記錄大鼠60s內停留在平臺所在象限的時間。

1.4 取材檢測

MWM試驗完成后第2天，10%水合氯醛(350mg/kg)將大鼠麻醉。斷頭后快速在冰槽上剝離并取出雙側海馬組織。將組織勻漿后，以1500r/min4e離心10min后取上清液，-80℃液氮保存。依據試劑盒說明書檢測勻漿中IL-6、TNF-a及BDNF的水平。

1.5 統計學方法

采用SPSS17.0統計軟件處理，采用t檢驗、單因素方差分析及重復測量設計資料方差分析處理數據。P<0.05差異有統計學意義。

2 結果

2.1 癇樣發作情況

癲癇組大鼠在試驗第8～12天時出現眨眼動須、點頭樣運動。隨后癥狀逐漸加重，最終出現大發作。治療組在第12～14天時開始出現癲癇發作，最終全部點燃。對照組無癲癇發作。

2.2Mirros水迷宮試驗情況

癲癇組與NS組、治療組比較，尋找平臺潛伏期時間顯著增加(P<0.05)，目標象限停留時間也顯著縮短(P<0.05)。與NS組比較，治療組尋找平臺潛伏期時間延長(P<0.05)，目標象限停留時間縮短(P<0.05)。見表1。

表1 a-硫辛酸對癲癇大鼠Mirros水迷宮影響

注：PTZ組與NS組、PTZ+ALA組比較:*P<0.05;PTZ+ALA組與NS組比較:#P< 0.05。

2.3 大鼠海馬組織中含量變化

癲癇組較NS組中IL-6、TNF-a的含量明顯升高(P<0.05)，BDNF含量明顯下降(P<0.05)。治療組較癲癇組中IL-6、TNF-a的含量明顯下降(P<0.05)，但仍高于NS組(P<0.05)；BDNF含量明顯升高(P<0.05)，但仍低于對照組(P<0.05)。見表2。

表2 各組大鼠海馬IL-6、TNF-a、BDNF含量

注：PTZ組與NS組比較，*P<0.05；PTZ+ALA組與PTZ組、NS組比較，#P<0.05。

3 討論

本研究結果提示：在定位航行試驗時，癲癇組(49s)及治療組(19s)逃避潛伏期時間較對照組(13s)顯著延長，表示其學習能力下降。在空間探索實驗中，癲癇組(4s)及治療組(9s)在第一象限停留時間較對照組(20s)顯著縮短，表示其空間記憶能力減退。可見а-硫辛酸能改善癲癇大鼠認知功能障礙。在大鼠海馬組織中，治療組IL-6、TNF-a含量較癲癇組均顯著降低，同時BDNF顯著升高，可見а-硫辛酸的應用可使大鼠海馬內IL-6、TNF-a水平下降，并能夠減輕炎癥因子蓄積造成神經損害的擴大，同時BDNF水平的升高可對海馬組織炎癥反應予以抑制，對海馬組織予以保護。 筆者選擇IL-6、TNF-a等炎癥因子以及BDNF認知保護作用因子指標作為明確а-硫辛酸改善癲癇大鼠認知功能障礙可能的作用機制。臨床研究表明,認知缺陷患者腦內炎癥因子與抗炎癥因子產生異常,引起神經病理損害[3]。過度激活的神經炎癥反應能夠抑制與認知調節密切相關的神經可塑性形成及神經傳導通路等過程，阻礙膽堿神經元的功能，導致認知功能下降。Anisman[4]等報道指出BDNF參與學習記憶的調節，可通過大腦膽堿能系統發揮作用。Salinthone[5]等研究表明ALA能夠通過CAMP/PKA、Jak/Stat3等信號通路減輕神經炎癥反應進而發揮神經保護作用。同時，Vlllasana[6]等也指出ALA能提高腦內乙酰膽堿水平，從而發揮保護認知功能。 綜上所述，α-硫辛酸能改善癲癇大鼠的認知功能障礙，其可能的作用機制之一是減輕海馬區炎癥反應，從而減輕海馬損傷最終改善認知功能。因此，抗炎治療可能為改善癲癇認知損害的途徑之一。

[1]和梅，寇傳玉，和廿，等．左乙拉西坦、托吡酯對癲癇部分性發作療效及認知功能的影響[J]．黑龍江醫藥科學,2016，39(1):11-12

[2]張巖,王海燕,王影,等.左乙拉西坦對癲癇大鼠認知功能的影響研究[J].黑龍江醫藥科學,2013，36(2):6-8

[3]KlegerisA,SchulzerM,HarperDG,etal.IncreaseincorebodytemperatureofAlzheimer'sdiseasepatientsasapossibleindicatorofchronicneuroinflammation:ameta-analysis[J].Gerontology,2007，53(1):7-11

[4]AnismanH,MeraliZ,HayleyS.Neurotransmitter,peptideandcytokineprocessesinrelationtodepressivedisorder:comorbiditybetweendepressionandneurodegenerativedisorders[J].ProgNeurobiol，2008，85(1):71-74

[5]SalinthoneS,YadavV,SchillaceRV.LipoicAcidAttenuatesInflammationviacAMPandProteinKinaseASignaling[J].PLoSOne，2010， 5(9)：59

[6]VillasanaLE,RosenthalRA,DoctrowSR,etal.Effectsofalpha-lipoicacidonassociativeandspatialmemoryofshamirradiatedand56Fe-irradiatedC57BL/6Jmalemice[J].PharmacolBiochemBehav,2013,103(3):487-493

佳木斯大學研究生科技創新項目，編號：YM2016-029。

和梅(1962～)女，黑龍江佳木斯人， 碩士，教授,碩士研究生導師。

方丹(1990～)女，湖北孝感人，在讀碩士研究生 。E-mail:1402257344@qq.com。

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1008-0104(2017)03-0098-02

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