黃連不同炮制方法和制劑工藝體外抑菌作用比較

盧肖英 賴靜雯 羅 維

黃連不同炮制方法和制劑工藝體外抑菌作用比較

盧肖英 賴靜雯 羅 維

目的探討黃連不同炮制方法和制劑工藝的體外抑菌作用。方法采用固體培養基稀釋法，觀測不同炮制方法及制劑工藝對金黃色葡萄球菌以及大腸桿菌的抑菌作用。結果對金黃色葡萄球菌的抑菌作用中，生黃連水浸液的最低抑菌濃度（MIC）值為0.6 g/L，生黃連水煎液、酒制黃連水浸液以及酒制黃連水煎液的MIC值均為1.25 g/L；對大腸桿菌的抑菌作用中，生黃連水浸液的MIC值為2.5 g/L，生黃連水煎液MIC值為5.0 g/L，酒制黃連水浸液以及酒制黃連水煎液的MIC值均為10.0 g/L。結論生黃連抑菌作用高于酒制黃連且水浸液的抑菌作用高于水煎液。

黃連；炮制方法；制劑工藝；抑菌作用

黃連是中藥材之一，具有清熱燥濕以及瀉火解毒的功效。現代藥理學研究表明，其具有抵抗微生物的作用，主要成分小檗堿是抵抗微生物的活性物質，但是不同炮制方法以及制劑工藝下，小檗堿含量會有所不同，可對黃連的效用產生一定影響[1]。因此，探究黃連不同炮制方法和制劑工藝體外抑菌作用具有重要意義，可為黃連的臨床應用提供理論基礎。

1 材料與方法

1.1 材料、儀器和菌種

1.1.1 實驗材料 生黃連、酒制黃連（合肥和義堂有限責任公司）。

1.1.2 實驗儀器 細胞級超級粉碎機（濟南達微機械有限公司，型號：XDW-6J）；超凈工作臺（上海智減分析儀器制造有限公司，型號：ZHJH-C11098）；磁力加熱攪拌器（德國IKA公司，型號：RH）；恒溫搖床（上海智誠分析儀器制造有限公司，型號：ZHWY-1038）；旋轉蒸發器（上海亞榮生化儀器廠，型號：RE52CS）；生物顯微鏡（日本OLY公司，型號：Olympus-CX21）。

1.1.3 菌種 金黃色葡萄球菌；大腸桿菌。

1.2 供試藥物制備

1.2.1 黃連水 取70 ℃下烘干的生黃連10 g，酒制黃連10 g，加入200 ml去離子水浸泡40 min，每次煎煮30 min，共煎煮2次，以每分鐘5000 r離心10 min，取上清液滅菌處理，于4 ℃環境下保存，制作成為20、10、5、2.5、1.25、0.6、0.3和0.15 g/L的濃度。

1.2.2 超微粉及水浸液的制備 取生黃連500 g，酒制黃連500 g，在70 ℃環境蒸干，運用超微細胞粉碎機粉碎20 min；送檢后發現，粒徑＜3 μm的為27.6%，1～10 μm的為57.1%，3～32 μm為70.1%。

在水浸液的制備中，將10 g超微粉加沸處理，去水離子，沉淀后取上清液，在高壓蒸汽滅菌后保存于4 ℃冰箱中，制作成20、10、5、2.5、1.25、0.6、0.3和0.15 g/L的濃度。

1.3 LB液體和固體培養基 對于LB液體培養基的制備，采用酵母菌提取物0.5 g、氯化鈉0.5 g、蛋白陳1 g、去離子水100 ml，配置100 ml培養基，調節pH值至7.4～7.6，行高壓蒸汽滅菌處理。

對于LB固體培養基的制備，在上述實驗材料基礎上，加入2 g瓊脂，其他條件相同。

1.4 LB藥物固體培養基 取9個50 ml的血清瓶，8個中加入黃連液體，第9個加入去離子水。按照固體培養基方式，加入酵母菌提取物0.5 g、氯化鈉0.5 g、蛋白陳1 g、去離子水100 ml，配置100 ml培養基，調節pH值至7.4～7.6，加熱溶解后，測定最低抑菌濃度（MIC）值，制備方式同上。

1.5 菌液制備和抑菌實驗 將金黃色葡萄球菌和大腸桿菌傳代處理后，運用LB液體培養基在37 ℃下培養，取生長期菌液，應用細胞計數法，將其濃度調整為5×104個/ml。取5×104個/ml濃度的100 μl溶液，于LB固體培養基中培養，均勻后覆蓋1 min，在37 ℃下培養24 h，重復實驗，將不含有藥物的LB瓊脂平板作為對照組。

1.6 判定標準 以LB瓊脂培養基上金黃色葡萄球菌以及大腸桿菌的MIC值為判定標準。

2 結果

2.1 對金黃色葡萄球菌的抑菌作用分析 生黃連水浸液對金黃色葡萄球菌的MIC值為0.6 g/L，生黃連水煎液、酒制黃連水浸液以及酒制黃連水煎液的MIC值均為1.25 g/L，見表1。

表1 不同炮制方法及制劑工藝對金黃色葡萄球菌的抑菌作用

2.2 對大腸桿菌的抑菌作用分析 生黃連水浸液對大腸桿菌的MIC值為2.5 g/L，生黃連水煎液的MIC值為5.0 g/L，酒制黃連水浸液以及酒制黃連水煎液的MIC值均為10.0 g/L，見表2。

表2 不同炮制方法及制劑工藝對大腸桿菌的抑菌作用

3 討論

黃連的炮制方法包括酒制、巴豆制以及姜汁制等，不同的炮制方式會對黃連的藥性造成一定影響，改變其化學成分。生黃連具有苦寒的特點，具有清熱燥濕以及瀉火解毒的功效，但是酒制黃連則需要藥引，可以緩和寒性，發揮功效[2]。因此，在應用黃連的過程中，需要根據應用途徑，合理選擇炮制方式。另外，超微粉碎技術具有較高的應用價值，可以將黃連粉碎成為顆粒，析出小檗堿，從而發揮黃連的抑菌作用[3]。

不同炮制方法對黃連的藥性具有一定影響，其主要是由于炮制方法會改變藥物寒熱溫涼藥性，根據黃連的應用不同特性，對其采用針對性的炮制方法，可以糾正其偏勝或者偏弱的藥性。如生黃連具有苦寒的特點，可以發揮清熱燥濕以及瀉火的功效；膽汁制黃連則對大腸桿菌具有明顯的抑制作用，證明膽汁可以提升黃連的苦寒特性；而酒制黃連在炮制過程中，會增加藥片的顏色，味道較苦且帶有酒氣。可見，在黃連的應用中，不同的炮制方法對于黃連的藥性具有明顯的影響，在臨床應用中，需要對其進行合理劃分，并且采用針對性的炮制方法。

在黃連的不同炮制方法中，其對藥物的升降浮沉具有直接影響。升降浮沉主要是指藥物對人體的作用趨勢，其具有相同或者相反兩種變化趨勢。在藥物應用中，對于性溫熱的藥物，多采用升浮方式來調節；對于質重的藥物，則多采用沉降方式。藥物經過炮制后，會呈現不同的藥性，酒制黃連經過酒精炮制后，則具有緩和寒性的特點，可以降低對患者脾胃的損傷，從而可以達到相應的功效；膽汁制黃連經過膽汁炮制后，會增加藥物的苦寒特性，其可以有效抑制大腸桿菌，對于患者具有較高的應用價值。

不同炮制方式會對藥物的有效成分產生一定影響，其主要是由于在中藥炮制過程中，藥物的有效成分會與不同物質產生化學反應，繼而造成部分物質的分離。在黃連炮制過程中，其不同炮制方式同樣對藥物的有效成分具有一定影響。在黃連的炮制中，采用水煎液方式，可以在一定程度上釋放黃連中的小檗堿，繼而對金黃色葡萄球菌以及大腸桿菌產生一定抑制作用。但是在超微粉碎情況下，其分離的小檗堿成分含量則更多，其主要是由于小檗堿成分在接觸面增大的情況下，會提升釋放量，而超微粉碎方式則可以最大程度地擴寬藥物的接觸面，從而提升小檗堿的釋放含量，提升藥物的藥用價值。

本研究結果顯示，對金黃色葡萄球菌的抑菌作用中，生黃連水浸液的MIC值為0.6 g/L，生黃連水煎液、酒制黃連水浸液以及酒制黃連水煎液的MIC值均為1.25 g/L；對大腸桿菌的抑菌作用中，生黃連水浸液的MIC值為2.5 g/L，生黃連水煎液MIC值為5.0 g/L，酒制黃連水浸液以及酒制黃連水煎液的MIC值均為10.0 g/L。提示生黃連的抑菌作用高于酒制黃連且水浸液的抑菌作用高于水煎液。其可能是由于酒制黃連可能受到酒精作用，導致其化學成分出現變化，繼而降低了抑菌效果；另外，超微粉碎下的黃連抑菌作用高于水煎液，其可能是由于超微粉碎可以促進黃連抑菌成分析出。實踐研究顯示，不同炮制方法對黃連的生物堿含量具有明確影響，超微粉碎則可以更好地析出小檗堿，從而提升黃連的抑菌效果[4]。還有研究指出，不同炮制方法對黃連的主成分及抗菌作用具有直接影響，如酒制黃連的抑菌作用較低，可能是由于酒精的作用，導致黃連的成分發生變化，進而影響黃連的抑菌作用[5]。

綜上所述，生黃連抑菌作用高于酒制黃連且水浸液的抑菌作用高于水煎液。可見，黃連在不同炮制方式下，其小檗堿的含量會呈現差異性變化，在臨床應用中，常常對于黃連難以進行有效區分，對于藥物的藥用價值產生了一定影響，在此情況下，應根據黃連的特性以及臨床應用，采用差異化炮制方法，以最大程度地發揮黃連的藥用價值。

[1] 文燕,張玉琴.不同炮制方法對黃連質量影響[J].大家健康(學術版),2015,9(21):39-40.

[2] 栗珍.黃連的不同炮制方法對不同微生物抑菌效果的影響[J].生物技術世界,2014(12):151-153.

[3] 吳朝陽.黃連的不同炮制方法及臨床藥用經驗[J].北方藥學,2013,10(6):58-60.

[4] 張帥,趙宏冰,何芳,等.不同炮制方法對黃連5種生物堿含量的影響研究[J].中國藥師,2013,16(1):19-21.

[5] 王榮.不同炮制方法對黃連主成分含量及抗菌活性的影響[J].中國醫藥導報,2012,9(1):58-60.

10.12010/j.issn.1673-5846.2017.06.008

廣州醫科大學附屬第一醫院，廣東廣州 510120

盧肖英（1968.8-），大專學歷，主管中藥師。研究方向：中藥藥劑