微小RNA多態性和非小細胞肺癌遺傳易感性關系研究*

段敏丹，陳 雪， 王 悅，蘇 雷，史 茜，賈友超，霍 燃△

1.河北大學附屬醫院腫瘤內科(保定 071000)，2.河北省保定市第二醫院(保定 071000)，3.河北省保定市第一醫院 (保定 071000)，4.河北大學附屬醫院放療科(保定 071000)，5.河北大學附屬醫院兒科(保定 071000)

微小RNA多態性和非小細胞肺癌遺傳易感性關系研究*

段敏丹1，陳 雪2， 王 悅3，蘇 雷4，史 茜5，賈友超1，霍 燃1△

1.河北大學附屬醫院腫瘤內科(保定 071000)，2.河北省保定市第二醫院(保定 071000)，3.河北省保定市第一醫院 (保定 071000)，4.河北大學附屬醫院放療科(保定 071000)，5.河北大學附屬醫院兒科(保定 071000)

目的：研究微小RNA多態性和非小細胞肺癌遺傳易感性的關系。方法：選取非小細胞肺癌患者130例(A組)與常規體檢者150例(B組)，對兩組hsa-mir-146a rs2910164和hsa-mir-499 Rs3746444基因的多態性進行研究分析，利用非條件Logistic回歸模型計算OR及95%CI等。結果：A組G、A基因比例分別為73.08%和26.92%，B組分別為77.33%和22.67%；A組GG、AG、AA基因型頻率分別為52.31%、40.77%、6.92%，B組分別為58.67%、36.67%、4.66%；兩組基因型與等位基因分布分別比較均無統計學差異(P=0.4892,P=0.2437)；調節性別、年齡、吸煙、飲酒等進行回歸分析，在hsa-mir-146a rs2910164中，基因型CC與基因型GG+CG相比患非小細胞肺癌的危險性較高(OR=1.39, 95%CI: 1.06～1.80,P=0.0126)；在hsa-mir-499 Rs3746444中，兩組基因型頻率分布比較無統計學差異(P>0.05)；校正各種因素后，帶有CC基因型男性患非小細胞肺癌危險性較高(OR=1.61, 95%CI: 1.24～2.03,P=0.0369)，吸煙患非小細胞肺癌危險性較高(OR=2.01, 95%CI: 1.76～2.35,P=0.0419)，飲酒患非小細胞肺癌危險性較高(OR=1.22, 95%CI: 0.55～3.25,P=0.0364)。結論：微小RNA rs2910164中基因型CC有可能增加非小細胞肺癌的遺傳易感性，且其發病風險與吸煙、飲酒等因素存在一定相關性。

非小細胞肺癌約占肺癌總數的80%，發病率和病死率都非常高，男性患者多于女性[1-3]。肺癌的病因有多種，發病機制錯綜復雜，包括遺傳、大氣環境、生活壓力、吸煙、飲酒等[4]。微小RNA是一類高度保守的非編碼小分子單鏈的RNA，它利用降解信使RNA與抑制靶基因表達來調控著生物細胞的生長、發育、分化以及增殖等各個生命過程[5-6]。研究顯示，微小RNA參與了免疫細胞的分化、成熟，抗體的生成以及炎癥因子的釋放，與生物免疫過程休戚相關，其中微小RNA的多態性能夠調節其各項表達功能[7-8]。本研究選取2014年7月2015年7月來我院就診并確診為非小細胞肺癌的患者130例與進行常規體檢健康人士150例，分析微小RNA多態性和非小細胞肺癌遺傳易感性的關系，現報告如下。

資料與方法

1 一般資料 收集確診為非小細胞肺癌患者130例(A組)與進行常規體檢的健康人150例(B組)。所有加入此項研究的人均無親屬關系，并均同意加入此項研究。兩組性別、年齡、有無吸煙、飲酒等一般資料比較均無統計學差異(P>0.05)，具有可比性，見表1。

表1 兩組一般資料比較[例(%)]

2 基因提取及分型分析 根據相關研究[9]，提取兩組全血基因組DNA,選擇hsa-mir-146a rs2910164和hsa-mir-499 Rs3746444進行分析，嚴格按照說明書進行PCR反應體系的配制，并在ABI公司的高通量實時熒光定量PCR系統(7900HT型)進行反應和分析。基因分型的結果采用SDS2.2.1統計學軟件進行分析。其中，所有384孔板中都設有3個陽性對照和3個陰性對照。利用較好的DNA樣本作為陽性對照，利用DNA稀釋液來替代基因組DNA作為陰性對照，并將其加入PCR的反應體系中。所有孔板都進行重復檢測，并且檢測結果均為100%一致。

3 統計學方法 運用SPSS18.0統計學軟件，采用χ2檢驗，OR及95%CI采用非條件Logistic回歸模型計算。以P<0.05表示差異有統計學意義。

結 果

1 基因型與等位基因分布情況比較 A組G、A基因比例分別為73.08%和26.92%，而B組分別為77.33%和22.67%；A組GG、AG、AA基因型頻率分別為52.31%、40.77%、6.92%，而B組分別為58.67%、36.67%、4.66%，兩組基因型與等位基因分布分別比較均無統計學差異(χ2=1.4299,P=0.4892; χ2=1.3589,P=0.2437)，見表2。

表2 基因型與等位基因分布情況比較[例(%)]

2 微小RNA基因型頻率分布以及和非小細胞肺癌的關系 調節性別、年齡、吸煙、飲酒等，在hsa-mir-146a rs2910164中，基因型CC與基因型GG+CG相比患非小細胞肺癌危險性較高(OR=1.39, 95%CI: 1.06-1.80,P=0.0126)；在hsa-mir-499 Rs3746444中，兩組基因型頻率分布比較無統計學差異(P>0.05)，見表3。

表3 微小RNA基因型頻率分布及其和非小細胞肺癌的關系[例(%)]

a：運用多因素Logistic回歸模型計算分析

3 微小RNA rs2910164位點基因頻率和非小細胞肺癌風險的相關性 采用非條件多因素Logistic回歸模型計算進行分層分析，校正各種因素后，帶有CC基因型的男性患非小細胞肺癌危險性較高(OR=1.61, 95%CI: 1.24-2.03,P=0.0369)，吸煙患非小細胞肺癌危險性較高(OR=2.01, 95%CI: 1.76-2.35,P=0.0419)，飲酒患非小細胞肺癌危險性較高(OR=1.22, 95%CI: 0.55-3.25,P=0.0364),見表4。

表4 微小RNA rs2910164位點基因頻率和非小細胞肺癌風險相關性

討 論

非小細胞肺癌(Non small cell lung cancer, NSCLC)是肺癌中最常見的發病類型，約占80%比例，并且近年來隨著人類生活方式的改變，NSCLC的發生率和死率逐漸升高，其中男性患者多于女性，老年患者多于青壯年，嚴重影響了人類的幸福生活和生存質量[10-11]。肺癌的發病原因有多種，發病機制錯綜復雜，包括遺傳、大氣環境、生活壓力、吸煙、飲酒、工作類型等。微小RNA是一類高度保守的長約有21～24個核苷酸的非編碼小分子單鏈的RNA，它利用降解信使RNA與抑制靶基因表達(即翻譯成蛋白質的過程)來調控著生物細胞的生長、發育、分化以及增殖等各個生命過程[12-13]。隨著社會的發展和醫學的進步，廣大的醫學研究人員越來越多的關注著微小RNA的作用，研究顯示微小RNA與哮喘、腫瘤性疾病以及神經系統疾病等的關系密切[14]。微小RNA能夠參與到免疫細胞的分化、成熟，抗體的生成以及炎癥因子的釋放等，它與生物的免疫過程休戚相關[15]。相關研究表明，微小RNA的多態性能夠調節其表達和功能[16]。本研究選取非小細胞肺癌的130例患者與進行常規體檢的健康人150例。結果顯示，非小細胞肺癌患者的G、A基因比例分別為73.08%和26.92%，而健康人士分別為77.33%和22.67%，非小細胞肺癌患者GG、AG、AA基因型頻率分別為52.31%、40.77%、6.92%，而健康人士分別為58.67%、36.67%、4.66%，非小細胞肺癌患者和健康人士基因型與等位基因分布比較均無統計學差異，表明了非小細胞肺癌患者和健康人士單基因型GG、AG和AA的分布符合Hardy-Weinberg平衡。本文研究還顯示，調節了性別、年齡、吸煙、飲酒等因素后進行回歸分析，在hsa-mir-146a rs2910164中，基因型CC與基因型GG+CG相比，患非小細胞肺癌危險性較高(OR=1.39, 95%CI: 1.06-1.80,P=0.0126)；在hsa-mir-499 Rs3746444中，表明微小RNA的hsa-mir-146a基因多態性位點rs2910164與非小細胞肺癌遺傳易感性有關，其中的基因型CC有可能增加其風險度，而在hsa-mir-499 Rs3746444中的相關性不大。根據前期研究及功能學實驗發現[14]，微小RNA hsa-mir-146a可以通過TNF-α來影響炎癥因子IL-8和CCL5/RANTES等的釋放，從而影響到了生物機體的炎癥性免疫反應，其中rs2910164中的基因型CC有可能是通過調節微小RNA hsa-mir-146a，來影響生物機體的炎癥性免疫反應，進而增加了非小細胞肺癌的遺傳易感性。本研究還發現，校正各種因素后，CC基因型男性患非小細胞肺癌危險性較高(OR=1.61, 95%CI: 1.24-2.03,P=0.0369)，吸煙患非小細胞肺癌危險性較高(OR=2.01, 95%CI: 1.76-2.35,P=0.0419)，飲酒患非小細胞肺癌危險性較高(OR=1.22, 95%CI: 0.55-3.25,P=0.0364)。這可能是吸煙、飲酒的行為對機體產生的影響會激發微小RNA rs2910164中的CC基因發揮作用，抑或是在促進肺部炎癥性免疫反應中起到了協同的作用，從而導致吸煙、飲酒的人患上非小細胞肺癌的危險性較高。

綜上分析可知，微小RNA rs2910164中的基因型CC有可能增加非小細胞肺癌的遺傳易感性，并且非小細胞肺癌的發病風險度與吸煙、飲酒等因素存在一定的相關性。

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(收稿：2016-10-09)

Relationship between micro RNA polymorphism and non small cell lung cancer genetic susceptibility

Duan Mindan,Chen Xue,Wang Yue,et al.

The Affiliated Hospital of Hebei University(Baoding 071000)

Objective:To study the relationship between micro RNA polymorphism and non small cell lung cancer genetic susceptibility. Methods:130 patients (group A) with non small cell lung cancer and 150 healthy individuals (group B) were selected Rs2910164 hsa-mir-146a and Rs3746444 hsa-mir-499 were selected to study the polymorphism of the gene, and the OR and 95%CI were calculated by using the non conditional ogistic regression model. Results:The gene ratio of G and A in group A were 73.08% and 26.92% respectively, while in group B were 77.33% and 22.67%; the genotype frequencies of GG, AG and AA in group A were 52.31%, 40.77%, 6.92%, and in group B were 58.67%, 36.67%, 4.66%, the genotype and allele distribution between two groups were no significant differences(P=0.4892,P=0.2437); adjusting for sex, age, smoking, drinking and regression analysis, in hsa-mir-146a rs2910164, genotype CC patients with higher risk of non-small cell lung cancer compared to the genotype GG+CG patients (P=0.0126); in hsa-mir-499 rs3746444, ; after correction of various factors, with CC genotype male Patients with higher risk of non small cell lung cancer (P=0.0369) and smoking patients with higher risk of non small cell lung cancer (P=0.0419), drinking for higher risk of non small cell lung cancer (P=0.0364). Conclusion：The gene type CC in Micro RNA rs2910164 may increase the genetic susceptibility to non small cell lung cancer, and the risk of the non small cell lung cancer disease and the factors of smoking and drinking have a certain relationship.

Lung neoplasms/immunology Polymorphism,genetic Regulatory sequenc,Ribonaleicacid Genetic Predispositio to disease

*河北省政府資助臨床醫學優秀人才項目(361007)

肺腫瘤/免疫學 多態現象，遺傳學 調控序列，核糖核酸 疾病 遺傳易感性

R363.1

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2017.07.005

△通訊作者