不同廠家試劑盒檢測大鼠血清中堿性磷酸酶活性的比較

李 紅, 余儒洋, 李 疆, 施嘉琛

(1. 北京市疾病預防控制中心/北京市預防醫學研究中心, 北京100013;

2. 中國農業大學動物醫學院 (學生), 北京100083)

不同廠家試劑盒檢測大鼠血清中堿性磷酸酶活性的比較

李 紅1, 余儒洋2, 李 疆1, 施嘉琛1

(1. 北京市疾病預防控制中心/北京市預防醫學研究中心, 北京100013;

2. 中國農業大學動物醫學院 (學生), 北京100083)

目的 比較兩個廠家生產的堿性磷酸酶(ALP)試劑檢測大鼠血清是否存在差異，開展大鼠血清ALP活性的檢測。方法 用國際臨床化學與檢驗醫學聯合會(IFCC)推薦的連續監測法，兩個廠家生產的ALP試劑同時測定大鼠血清。 結果 兩個廠家的ALP試劑檢測大鼠血清差異極顯著(P<0.01)。結論 兩個廠家的ALP試劑均可開展大鼠血清檢測工作，要分別建立實驗室的參考范圍，如果動物實驗采用實驗前后比較時，中間過程不能更換試劑的廠家。

堿性磷酸酶; 比對試驗; 大鼠血清

堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)存在于成骨細胞、白細胞、肝細胞、脾、腎、胎盤、前列腺和小腸內，血清中的ALP具有四種結構亞型: 肝-骨-腎型、小腸型、胎盤型和胚細胞型的變異體，其中肝-骨-腎型最為重要。兒童和青少年在骨骼成長時成骨細胞增加導致ALP活性會生理性升高, 甲狀旁腺功能亢進、Paget病、佝僂病和骨軟化病等骨骼疾病，阻塞性黃疸、膽汁郁積都會使ALP病理性升高[1]。諸多動物實驗研究中，準確檢測ALP的活性變化是重要研究依據[2-7]。在食品安全國家標準28 d經口毒性試驗中也新增加了ALP活性的檢測，因此，建立正確的ALP檢測方法，對于相關動物實驗具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 儀器設備

7600-日立全自動生化分析儀(日立高新技術有限公司，日本)，儀器設備在中國計量科學研究院進行年檢，檢定合格，且檢測過程在檢定期內。

1.2 試劑、校準品和質控血清

廠家1: ALP試劑、酶校準品和多項質控品均由WaKo(和光純藥工業株式會社，日本)提供。ALP試劑R1: 4×49 mL，R2: 4×15 mL; 酶校準品批號: DR134，規格4×3 mL; 多項質控品1批號: EK476，規格10×5 mL; 質控品2批號：EK477，規格10×5 mL。廠家2: ALP試劑、酶校準品和多項質控品均由DiaSys[德賽診斷系統(上海)有限公司, 德國]提供。試劑貨號: 14104101001,包裝規格R1: 2×80 mL，R2: 2×20 mL; 酶校準品TruLab U貨號: 591009910063，包裝規格: 20× 3 mL; 多項質控品TruLab N貨號: 590009910061，包裝規格：6×5 mL; 多項質控品TruLab P貨號：590509910061，包裝規格：6×5 mL。

1.3 血樣

本中心實驗室送檢Wistar大鼠血清66例，采集腹主動脈血樣室溫放置30 min，600A BAIYANG離心機，1 500×g，10 min離心分離血清。清潔級大鼠(雌雄各半)，體質量雌性168～216 g，雄性189～299 g，6～8 周齡。由軍事醫學科學院實驗動物中心提供[SCXK(軍) 2012-0004]。

1.4 實驗方法

1.4.1 實驗條件 進行儀器設備的常規維護保養，在P模塊上分別建立分析參數，兩個廠家的試劑都是液體雙試劑均可直接使用，在37 ℃條件下，選用速率A法, 主波長405 nm、副波長505 nm，連續監測吸光度的上升速率(Δ A/min)，吸光度增高速率計算ALP活性, 大鼠樣本血清為4.0 mL，WaKo試劑R1是160 mL，試劑R2是40 mL，選用24到34測光點。DiaSys試劑R1是200 mL，試劑R2是50 mL，選用21到31測光點。

1.4.2 校準程序 酶校準品為凍干粉狀, 小心打開瓶蓋。在酶校準品中準確加入3.0 mL離子交換水或者蒸餾水后，輕輕顛倒使其完全溶解混合均勻，復溶后保存于2～8℃可使用3 d。在P模塊上執行兩點定標程序。

1.4.3 質量控制程序 在多項質控品中準確加入5.0 mL(或者用稱重法)離子交換水或者蒸餾水后，輕輕顛倒混合使其完全溶解分裝保存，可放置在質控位或者是常規標本位置檢測。

1.4.4 樣品檢測 執行兩點定標程序通過后, 首先檢測兩個廠家提供的質控血清，再同時對66例大鼠血清進行ALP檢測，質控血清放置在常規標本后再檢測。ALP結果計算(U/L)=樣品(ΔA/min)/校準(Δ A/min)×校準品活性(U/L)。

1.5 統計方法

全部實驗測定結果直接由生化分析系統輸出,數據使用SPSS 20.0軟件包進行配對t檢驗統計處理; P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

多項質控品檢測結果均在1個標準差以內，使用兩個廠家試劑檢測大鼠血清ALP結果差異極顯著(P<0.01)(表1)。兩個廠家試劑測定大鼠血清ALP活性結果的線性回歸方程Y=1.0228x+0.635，相關系數r=0.9994, r2=0.9988。

表1 大鼠血清中ALP的檢測結果

3 討論

WaKo和DiaSys多項質控血清檢測結果均在1個標準差以內，符合室內質量控制要求，可以用于檢測大鼠血清ALP活性。兩個廠家生產的試劑檢測大鼠血清ALP結果相關性良好，但差異仍有統計學意義，應分別建立實驗室的參考范圍。生化檢測結果的準確性在動物實驗中至關重要，使用的儀器設備、試劑以及工作人員的責任心對檢測結果都有很大影響[8～10]。實驗組和對照組，實驗動物結果前后比較時要使用同一檢測方法同一廠家生產的試劑，中間不能更換。遇到試劑批間差異大時，為確保一致性應使用同一批號試劑，從而保證檢測結果的準確性。

[1] 葉應嫵, 王毓三, 申子瑜. 全國臨床檢驗操作規程[M], 第三版, 南京: 東南大學出版社, 2006, 415.

[2] 曾云貴, 何俊虎, 牛曉光, 等. 運動訓練對大鼠鋅銅代謝及血清ALP, LDH活性影響的研究[J]. 北京體育大學學報，2003, 26(4):467-471.

[3] 翁錫全, 徐國琴, 林文鎪, 等. 不同運動強度對糖尿病大鼠血清骨代謝生化指標的影響[J]. 中國運動醫學雜志, 2009, 28(5):522-525.

[4] 王德軍, 周衛民, 王輝, 等. 光照不均勻性對SD大鼠血液生理生化指標的影響[J]. 實驗動物與比較醫學, 2010, 30(4): 277-282.

[5] 王立媛, 馬雪梅, 王婷婷, 等. 多因素誘導蒙古沙鼠胃癌模型的建立及其血清中堿性磷酸酶和乳酸脫氫酶的變化[J].臨床和實驗醫學雜志, 2014, 13(20):1665-1667.

[6] 任小娟, 許多紅, 嚴會榮. 骨松湯對去卵巢小鼠骨質疏松血清ALP影響的實驗研究[J]. 新疆中醫藥, 2015, 33(3):12-13.

[7] 張洋, 楊少峰, 卜淑敏. 全身垂直振動對去卵巢骨質疏松大鼠血清和骨組織堿性磷酸酶水平的影響[J]. 中國運動醫學雜志, 2013, 32(1):41-44.

[8] 李紅, 施嘉琛, 楊奕, 等. 大鼠不同部位采血血清肌酸激酶及其同工酶檢測結果[J]. 實驗動物與比較醫學, 2014, 34 (1):68-70.

[9] 李紅, 施嘉琛, 丁曉靜, 等. 生化分析儀的兩個模塊檢測大鼠血清生化結果的比較[J]. 醫學動物防制, 2014, 30(10): 1063-1065.

[10] 李紅, 施嘉琛. 兩種方法檢測大鼠血清轉氨酶結果比較[J]. 實驗動物與比較醫學, 2014, 34(6):500-502.

Q95-33

C

1674-5817(2017)03-0222-02

10.3969/j.issn.1674-5817.2017.03.010

2016-11-15

李 紅(1968-), 女, 本科, 副主任技師。主要從事生化分析工作。E-mail: benlih@sina.com