凍融胚胎移植周期臨床結局的影響因素*

劉艷麗，李君芳，張玉超，申春艷，楊 悅，王興玲#

1)鄭州大學第三附屬醫院生殖中心 鄭州 450052 2)鄭州大學第三附屬醫院檢驗科 鄭州 450052

凍融胚胎移植周期臨床結局的影響因素*

劉艷麗1)，李君芳2)，張玉超1)，申春艷1)，楊 悅1)，王興玲1)#

1)鄭州大學第三附屬醫院生殖中心 鄭州 450052 2)鄭州大學第三附屬醫院檢驗科 鄭州 450052

#通信作者，女，1962年2月生，博士，主任醫師，教授，研究方向：生殖內分泌與輔助生殖，E-mail:wangxl208@126.com

玻璃化冷凍；凍融胚胎移植；妊娠率；著床率；影響因素

目的：探討玻璃化冷凍胚胎復蘇移植臨床結局的影響因素。方法：回顧性分析2 430個凍融胚胎移植周期，研究患者年齡、授精方式、內膜厚度、胚胎冷凍保存時間、胚胎在平衡液中的平衡時間和胚胎質量對凍融周期胚胎移植結局的影響。結果與結論：年齡(β=-1.029,P<0.001)、胚胎冷凍保存時間(β=-0.101，P<0.05)和胚胎質量(D3胚胎和D5/D6囊胚質量的β分別為-2.824和-2.878，P<0.001)是凍融胚胎移植臨床妊娠率的主要影響因素。

自1985年Cohen等[1]報道了世界上首例凍融胚胎移植獲得健康嬰兒出生以來，胚胎冷凍技術在輔助生殖技術領域被廣泛應用。胚胎冷凍后擇期移植不僅有助于預防卵巢過度刺激的發生，提高治療的安全性，同時也能夠提供多次移植機會，提高臨床妊娠率，但目前影響凍融胚胎移植的因素很多。該研究探討了患者年齡、內膜厚度、受精方式、胚胎冷凍保存時間、胚胎在平衡液中的平衡時間、移植胚胎質量對凍融胚胎移植臨床結局的影響，以期為凍融胚胎的臨床工作提供參考。

1 對象與方法

1.1 研究對象 回顧分析2014年1月至2015年6月在鄭州大學第三附屬醫院生殖中心行常規體外受精(IVF)/卵胞漿內單精子注射(ICSI-ET)后行凍融胚胎移植的2 430個凍融胚胎移植周期的臨床結局。

1.2 移植方法

1.2.1 胚胎來源 所有助孕患者經促性腺激素釋放激素激動劑(GnRH-a)聯合FSH/HMG長方案或短方案促排卵、常規取卵、IVF/ICSI，培養至第3、5、6天(D3、D5、D6)，選擇在新鮮周期沒有移植或者移植后沒有妊娠的患者，將其可利用胚胎或新鮮周期移植后剩余的胚胎進行玻璃化冷凍保存。

1.2.2 胚胎的選擇 D3胚胎評分標準參照Peter[2]方法,D3可利用胚胎在征得患者知情同意后冷凍保存。D5/D6囊胚的評分采用Gardner[3]評分系統。首先根據囊腔擴張程度分為1～6期，然后對4～6期的囊胚進一步根據內細胞團和滋養外胚層細胞表現評為A～C級。

1.2.3 胚胎冷凍 采用丹麥Medicult 公司的Cooling盒。冷凍前冷凍液須室溫平衡30 min。將D3胚胎/囊胚(激光皺縮后)移入基礎液中1 min，然后轉入平衡液中5或7 min左右。D3胚胎會出現收縮再恢復，再轉入玻璃化冷凍液中平衡30 s左右。將胚胎移至冷凍載桿上迅速投入液氮中保存。

1.2.4 胚胎復蘇及移植 采用丹麥Medicult 公司Warming試劑。將復蘇液WS1 在37 ℃培養箱中平衡30 min，復蘇液WS2、WS3、WS4 在室溫下平衡30 min。解凍時，從液氮中取出有胚胎的載桿，迅速將其尖端浸入WS1中約1 min，然后將胚胎依次轉入WS2、WS3、WS4中分別停留3 min，卵裂球崩解比例<50認為該胚胎存活。最后，將胚胎移入G-2培養液中培養2 h后進行移植。移植后使用達芙通、補佳樂等進行黃體支持直至化驗人絨毛膜促性腺激素(HCG)日。

1.2.5 臨床妊娠的判定 移植后第35天B超見孕囊確定為臨床妊娠。

1.3 統計學處理 用SPSS 17.0分析，凍融胚胎移植結局的比較采用χ2檢驗，采用logistic回歸分析篩選凍融胚胎臨床妊娠率的影響因素，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 凍融胚胎移植結局 見表1。由表1可知，D5/D6囊胚移植組臨床妊娠率、著床率和活產率高于D3胚胎移植組；≤35歲組移植結局優于>35歲組；胚胎冷凍保存時間為13～24個月組臨床妊娠率、著床率均低于0～6個月組；含優質D3胚胎或優質D5/D6囊胚組的臨床妊娠率、著床率和活產率明顯高于無優質胚胎。

表1 凍融胚胎移植結局 %

*:與0～6個月組比較，P<0.05；#：與D3組胚胎同年齡組比較，P<0.05。

2.2 凍融胚胎移植結局影響因素分析 以凍融胚胎移植的臨床結局為因變量，年齡、子宮內膜厚度、受精方式、胚胎冷凍保存時間、胚胎在平衡液中平衡時間和移植的D3胚胎或D5/D6囊胚質量為自變量進行逐步logistic回歸分析(α入=0.05，α出=0.10)，變量賦值見表2,結果見表3。結果表明凍融胚胎的臨床妊娠率與年齡、胚胎冷凍保存時間、移植胚胎/囊胚質量有關。

表2 變量名稱及賦值說明

表3 logistic回歸分析結果

3 討論

該研究結果表明，年齡、胚胎冷凍保存時間及胚胎質量是影響凍融胚胎臨床結局的主要因素。目前，年齡對凍融胚胎臨床結局的影響尚有爭議。Ashrafi等[4]表示在凍融周期中年齡不是影響移植結局的重要因素，年齡與移植胚胎著床率、臨床妊娠率無明顯相關性，認為高齡者雖然生育能力下降和卵泡發育欠佳，但患者若有可利用胚胎進行凍融移植，在一定程度上表明其卵巢儲備及卵子質量尚可。該研究中≤35歲組臨床妊娠率、著床率和活產率均高于>35歲組，考慮與卵子質量下降、子宮內膜容受性降低有關，這與鄶艷榮等[5]結論一致。

胚胎移植成功與否與胚胎質量關系密切。該研究結果顯示，高質量胚胎/囊胚移植的臨床妊娠率、著床率及活產率均明顯高于非優質胚胎移植，這除了與優質胚胎/囊胚的發育潛能強有關外，還可能與優質胚胎耐受降溫和復溫損傷能力強有關，碎片較多的胚胎在冷存過程中更容易發生冷凍損傷。提示應盡量選擇優質胚胎進行冷凍，非優質胚胎可進行囊胚培養。此外，因卵裂期胚胎發育至囊胚期可能存在發育阻滯，囊胚發育潛力明顯高于卵裂期胚胎，且囊胚移植能與子宮內膜種植窗的開放趨于同步[6]，減少胚胎在宮腔內的游走，有利于胚胎植入。該研究數據也顯示D5/D6囊胚移植較D3胚胎移植有更好的臨床結局，與Wang等[7]和陳小燕等[8]的研究結果一致。因此，D3胚胎并非最佳選擇。對于有兩次及以上移植失敗史且有冷凍胚胎的患者，簽署知情同意書后選擇復蘇胚胎培養至囊胚后移植，可避免反復移植給患者帶來的心理和經濟上的負擔。

胚胎在液氮中存放時間是否會影響凍融胚胎的臨床結局，不同學者有不同的觀點。趙慶紅等[9]的研究結果顯示，胚胎冷凍保存時間<6個月、6～12個月、12～19個月組間臨床結局差異并無統計學意義，但<6個月組胚胎的復蘇率和臨床妊娠率最高。Aflatoonian等[10-11]研究顯示胚胎冷凍保存時間不影響妊娠率、著床率和活產率，只有年齡和移植胚胎數目影響臨床妊娠率。張軍等[12]認為胚胎冷凍保存90 d內行凍融胚胎移植臨床妊娠率降低。鄭州大學第三附屬醫院生殖中心將凍融胚胎的冷凍時間分為0～6個月、7～12個月、13～24個月和≥25個月，結果顯示冷凍時間0～6個月組較7～12個月和13～24個月組有較高的臨床妊娠率和著床率，但≥25個月組和0～6個月組有相似的臨床結局。該組最長的冷凍保存時間為67個月。該研究發現胚胎在平衡液中平衡5 min或者7 min，臨床妊娠率及著床率差異并無統計學意義，可以選擇在平衡液中平衡5 min，這樣既能成功凍存胚胎，又能減少冷凍保護劑的毒性作用。

子宮內膜的容受性指子宮內膜對胚胎的接受能力，即著床窗口期，是凍融胚胎移植獲得成功臨床妊娠的關鍵因素之一。子宮內膜厚度是評價子宮內膜容受性的重要指標。秘祖霞等[13]發現FET日子宮內膜厚度>12.0 mm組著床率和臨床妊娠率高于≤12.0 mm組；而李娜等[14]認為胚胎著床需要適宜的子宮內膜厚度，子宮內膜太薄或者太厚均不利于胚胎著床，子宮內膜厚度在8.0～11.0 mm內臨床妊娠率最高。但該研究未發現子宮內膜厚度對凍融胚胎移植的臨床結局有影響。該研究亦未發現不同受精方式(IVF/ICSI)對凍融胚胎臨床結局有影響，與薛俠等[15]觀點一致。

總之，年齡、冷凍保存時間和胚胎質量是影響凍融胚胎移植臨床結局的重要因素。盡量選擇在取卵后半年內進行移植，使胚胎在機體于接近自然的內分泌環境下植入，可獲得較高的臨床妊娠率。

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[13]秘祖霞，徐雯，盧偉英，等.玻璃化凍融人卵裂期胚胎移植結局的影響因素分析[J].現代婦產科進展,2012,21(2):128

[14]李娜，苗聰秀，關素萍，等.冷凍胚胎移植失敗高危因素的logistic回歸分析[J].鄭州大學學報(醫學版),2013,48(3):403

[15]薛俠，張四林，施文浩，等.不同授精方式的選擇性單囊胚移植的妊娠結局分析[J].生殖醫學雜志，2014,23(9):760

(2016-12-01收稿 責任編輯王 曼)

Influence factors of clinical outcomes of frozen-thawed embryo transfer

LIUYanli1),LIJunfang2),ZHANGYuchao1),SHENChunyan1),YANGYue1),WANGXingling1)

1)ReproductiveMedicineCenter，theThirdAffiliatedHospital,ZhengzhouUniversity,Zhengzhou450052 2)DepartmentofClinicalLaboratory,theThirdAffiliatedHospital,ZhengzhouUniversity,Zhengzhou450052

vitrification freezing；frozen thawed embryo transfer；clinical pregnancy rate；implantation rate；influence factor

Aim: To explore the influence factors of the frozen thawed embryo transfer(FET) outcomes of human vitrified embryos.Methods: A total of 2 430 FET cycles were collected, and the effects of the age of the patients,insemination ways,endometrium thickness,embryo cryopreservation time, the balance time of embryos in equilibrium liquid and the quality of embryo on the clinical outcomes were analyzed.Results and conclusion: The results showed that age(β=-0.101，P<0.001),embryo cryopreservation time(β=-0.101，P<0.05) and embryo quality(D3β=-2.824,D5YD6β=-2.878，P<0.001) were the influence factors of clinical pregnancy rate.

10.13705/j.issn.1671-6825.2017.04.015

* 河南省醫學科技攻關項目 201602126;鄭州大學橫向科研項目 20160170A

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