蘿藦種子中脂肪油和揮發(fā)油成分分析Δ

胡鵬，蔡靜，張園嬌，李祥，2，陳建偉，3#（.南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，南京20023；2.江蘇省中藥炮制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南京20023；3.江蘇省方劑研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南京20023）

蘿藦種子中脂肪油和揮發(fā)油成分分析Δ

胡鵬1＊，蔡靜1，張園嬌1，李祥1，2，陳建偉1，3#（1.南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，南京210023；2.江蘇省中藥炮制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南京210023；3.江蘇省方劑研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南京210023）

目的：分析蘿藦種子中脂肪油和揮發(fā)油成分。方法：采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-MS）分析蘿藦種子中脂肪油和揮發(fā)油成分：色譜柱為HP-5MS石英彈性毛細(xì)管柱，載氣為高純氮?dú)猓魉贋?m L/m in，進(jìn)樣口溫度為220℃，色譜柱初始溫度為120℃（程序升溫），柱壓為80 kPa，分流進(jìn)樣，分流比為20∶1，進(jìn)樣量為1μL；質(zhì)譜條件：離子源為電子轟擊離子源，電子能量為70 eV，接口溫度為250℃，質(zhì)量掃描范圍為m/z 50～550，掃描間歇為1.0 s。采用頂空氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（HSGC-MS）分析炒制前后蘿藦種子揮發(fā)油成分的差異：色譜柱為HP-5MS石英彈性毛細(xì)管柱，載氣為高純氮?dú)猓魉贋?m L/min，頂空加熱溫度為90℃，加熱時(shí)間為30min，色譜柱初始溫度為80℃（程序升溫），柱壓為80 kPa，分流進(jìn)樣，分流比為20∶1，進(jìn)樣量為1μL；質(zhì)譜條件：離子源為電子轟擊離子源，電子能量為70 eV，接口溫度為210℃，質(zhì)量掃描范圍為m/z 50～550，掃描間歇為1.0 s。結(jié)果：從脂肪油中共鑒定出30個(gè)成分，其中亞油酸、油酸、棕櫚油酸相對(duì)含量較高；從揮發(fā)油中共鑒定出54個(gè)成分，主要為萜烯類成分，其中衣蘭油二烯、羅漢柏烯、脫氫香橙烯相對(duì)含量較高。炒制后多檢測(cè)出4-萜烯醇，且二氫香芹醇相對(duì)含量較炒制前增加了1倍。結(jié)論：該研究基本明確了蘿藦種子脂肪油和揮發(fā)油主要成分；炒制前后蘿藦種子揮發(fā)油成分存在一定差異。

蘿藦種子；脂肪油；揮發(fā)油；氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法；頂空氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法

蘿藦Metaplexis japonica（Thunb.）Makino為蘿藦科蘿藦屬的一種藥用植物，多年生草質(zhì)纏繞藤本，廣泛分布于甘肅、陜西、貴州、河南和湖北等省區(qū)[1]。蘿摩入藥始載于陶弘景《本草經(jīng)集注》，謂：“補(bǔ)益精氣，強(qiáng)盛陰道”。此后唐·《新修本草》在草部中品之下卷第九載“蘿摩子”（蘿藦的果實(shí)）中記載：“味甘辛，溫，無毒。主虛勞”[2-3]。現(xiàn)今全草可入藥，味甘辛、平，歸肺、肝經(jīng)。其果可治勞傷、虛弱、腰腿疼痛、缺奶、白帶、咳嗽等；根可治跌打、蛇咬、疔瘡、瘰疬、陽(yáng)萎；莖葉可治小兒疳積、疔腫；種毛可止血；乳汁可除瘊子[1，3]。蘿藦藤收載于《上海市中藥材標(biāo)準(zhǔn)》，曰：“補(bǔ)腎強(qiáng)壯，用于腎虧遺精，乳汁不足，脫力勞傷”[4]。近年研究發(fā)現(xiàn)，其脂肪油和揮發(fā)油均有一定的生物活性，具有抗氧化、抗菌、抗炎等作用[5-6]，但對(duì)蘿藦種子的研究，筆者尚未見國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道。為了準(zhǔn)確了解蘿藦種子的化學(xué)成分，本試驗(yàn)采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-MS）對(duì)蘿藦脂肪油和揮發(fā)油成分進(jìn)行分析，并采用頂空（HS）GC-MS法分析蘿藦種子炒制前后揮發(fā)油的成分差異，為研究蘿藦種子脂肪油和揮發(fā)油生物活性研究提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

7890B/7000C型GC-MS儀、7687A型頂空進(jìn)樣器（美國(guó)Agilent公司）；PTHW型電熱套（南京文科儀器科技有限公司）；M illi-Q D irect8超純水儀（德國(guó)Merck公司）；BT125D型十萬分之一電子分析天平（德國(guó)Sartorius公司）；HH-2型數(shù)顯恒溫水浴鍋（常州朗越儀器制造有限公司）；2WAJ型阿貝折射儀（上海光學(xué)儀器廠）。

1.2 試劑

試驗(yàn)所用試劑均為分析純，水為超純水。

1.3 藥材

試驗(yàn)用蘿藦種子于2015年10月采自江蘇省南京市江寧區(qū)，經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)陳建偉教授鑒定為真品。陰干至恒質(zhì)量，粉碎后過30目篩，置于自封袋中于4℃貯藏。

2 方法與結(jié)果

2.1 脂肪油和揮發(fā)油的提取

2.1.1 脂肪油精密稱取藥材樣品粉末2.5 g，用石油醚（30～60℃）200m L于55℃下索氏提取4 h，揮干溶劑，即得游離脂肪酸。在殘?jiān)屑欲}酸溶液（25∶11，V/V）20m L，水浴中水解1 h，加95%乙醇溶液20m L，以石油醚-乙醚（1∶1，V/V）萃取上述溶液，取上層液，揮干溶劑即得結(jié)合脂肪酸，與游離脂肪酸混合即得總脂肪酸。

2.1.2 揮發(fā)油參照2015年版《中國(guó)藥典》（四部）“通則2204”揮發(fā)油測(cè)定法[7]乙法Ⅰ法：稱取藥材樣品粉末50 g，加水500m L，浸泡12 h，蒸餾8 h，至揮發(fā)油體積不再增加，得到淡黃色油狀液體，具有芳香氣味，冷藏，備用[8]；重復(fù)提取3次，揮發(fā)油得率為0.068%。

2.2 試驗(yàn)條件

2.2.1 GC-MS條件（1）色譜條件。色譜柱：HP-5MS石英彈性毛細(xì)管柱（30m×0.25mm，0.25μm）；載氣：高純氮?dú)猓涣魉伲?m L/m in；進(jìn)樣口溫度：220℃；色譜柱初始溫度：120℃，程序升溫（120℃保持2min；以10℃/min升至210℃，保持5m in；以2℃/m in升至220℃，保持5 min；再以3℃/min升至240℃，保持3min）；柱壓：80 kPa；分流進(jìn)樣，分流比：20∶1；進(jìn)樣量：1μL。（2）質(zhì)譜條件。離子源：電子轟擊離子源；電子能量：70 eV；接口溫度：250℃；質(zhì)量掃描范圍：m/z50～550；掃描間歇：1.0 s。

2.2.2 HSGC-MS條件（1）色譜條件。色譜柱：HP-5 MS石英彈性毛細(xì)管柱（30m×0.25mm，0.25μm）；載氣：高純氮?dú)猓涣魉伲?m L/m in；頂空加熱溫度：90℃；加熱時(shí)間：30min；色譜柱初始溫度：80℃，程序升溫（80℃保持3m in，以10℃/m in升至150℃，再以3℃/m in升至210℃保持15min）；柱壓：80 kPa；分流進(jìn)樣，分流比：20∶1；進(jìn)樣量：1μL。（2）質(zhì)譜條件。離子源：電子轟擊離子源；電子能量：70 eV；接口溫度：210℃；質(zhì)量掃描范圍：m/z50～550；掃描間歇：1.0 s。

2.3 定性分析

2.3.1 分析方法通過標(biāo)準(zhǔn)品、NIST14譜庫(kù)檢索，并結(jié)合Kovats保留指數(shù)（Kovats index，KI），參考文獻(xiàn)及相關(guān)網(wǎng)站（www.vcf-online.nl）等進(jìn)行定性分析。公式如下：

式中：n和n+1分別為未知物流出前、后正構(gòu)烷烴碳原子數(shù)；tRn和tRn+1分別為相應(yīng)正構(gòu)烷烴的保留時(shí)間；tR為未知物在氣相色譜中的保留時(shí)間（tRn＜tR＜tRn+1）。

2.3.2 分析結(jié)果取“2.1”項(xiàng)下?lián)]發(fā)油1μL，按“2.2”項(xiàng)下試驗(yàn)條件進(jìn)樣測(cè)定，再按“2.3.1”項(xiàng)下方法分析，以面積歸一化法確定各成分的相對(duì)含量。根據(jù)所得的質(zhì)譜信息并結(jié)合有關(guān)文獻(xiàn)采用Class5000色譜軟件和基峰、相對(duì)豐度、KI等幾個(gè)方面進(jìn)行直觀比較，從而確定了其中的部分化學(xué)成分。結(jié)果，所得揮發(fā)油為淡黃色澄清液體，氣味芳香，空氣中久置顏色漸深，在乙醇、乙醚中易溶，在水中幾乎不溶，相對(duì)密度為0.968，折光率為1.497，揮發(fā)油得率為0.068%，游離脂肪油提取率為24.79%，總脂肪油提取率為42.35%。經(jīng)GC-MS分析，鑒定出脂肪油30個(gè)成分，占總面積的99.65%；揮發(fā)油53個(gè)成分，占總面積的91.45%。蘿藦種子脂肪油總離子流圖見圖1，成分分析結(jié)果見表1；蘿藦種子揮發(fā)油總離子流圖見圖2，成分分析結(jié)果見表2。

圖1 蘿藦種子脂肪油總離子流圖Fig 1 TIC plot of fatty oil from the seed of M.japonica

表1 蘿藦種子脂肪油成分分析結(jié)果Tab 1 Analysis results of constituents of fatty oil from the seed of M.japonica

續(xù)表1Continued Tab 1

圖2 蘿藦種子揮發(fā)油總離子流圖Fig 2 TIC p lot of the volatile oil from the seed of M. japonica

表2 蘿藦種子揮發(fā)油成分分析結(jié)果Tab 2 Anahysis results of constituents of volatile oil from the seed of M.japonica

續(xù)表2Continued Tab 2

由表1可知，蘿藦脂肪油中主要成分為亞油酸（46.55%）、油酸（26.95%）、棕櫚油酸（7.80%）、十六烷酸（7.19%）、硬脂酸（3.72%）、9，12-十六碳二烯酸（3.00%），其中亞油酸和油酸占總油脂的73.50%，不飽和脂肪酸占總油脂的85%以上。由表2可知，蘿藦種子中揮發(fā)油主要成分為衣蘭油二烯（11.25%）、羅漢柏烯（10.01%）、脫氫香橙烯（8.86%）、異喇叭烯（6.17%）；蘿藦種子中揮發(fā)油化學(xué)成分主要包括醇類、脂類、酮類、醛類、萜烯類等。蘿藦種子炒制之后在5.299min出現(xiàn)一新成分，經(jīng)過鑒定為4-萜烯醇，在6.442min出現(xiàn)的成分相對(duì)含量增加了近1倍，經(jīng)過鑒定為二氫香芹醇。

3 討論

不飽和脂肪酸是構(gòu)成人體內(nèi)脂肪的必須脂肪酸。目前食用油中含有大量油酸和亞油酸，蘿藦種子出油率高達(dá)42%，有廣泛的應(yīng)用前景。通過比較游離脂肪和結(jié)合脂肪的不同可以發(fā)現(xiàn)，結(jié)合脂肪中也以亞油酸和油酸為主，油酸的相對(duì)含量大于游離脂肪，而亞油酸、棕櫚油酸等小于游離脂肪的相對(duì)含量，這可為繼續(xù)研究其成分差異提供依據(jù)。

通過HSGC-MS可以分析得到炒制前后蘿藦種子芳香性成分的變化。由于高溫炒制，總體揮發(fā)性成分低于炒制之前，4-萜烯醇和二氫香芹醇均具有較強(qiáng)烈的香氣，而二氫香芹醇為香芹中主要香性成分，其催化產(chǎn)物具有一定的抗癌活性[9]，因此有必要對(duì)其加深研究。

本研究基本明確了蘿藦種子中脂肪油和揮發(fā)油的主要成分，且炒制前后蘿藦種子揮發(fā)性成分存在一定差異。本研究為合理開發(fā)利用蘿藦種子資源利用提供了科學(xué)依據(jù)。

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Analysisof Volatile O il and Fatty O il in Seed of Metaplexis japonica

HU Peng1，CAIJing1，ZHANG Yuanjiao1，LIXiang1，2，CHEN Jianwei1，3（1.Schoolof Pharmacy，Nanjing University of TCM，Nanjing 210023，China；2.Jiangsu Key Laboratory for Chinese Materia Medica Processing，Nanjing 210023，China；3.Jiangsu Key Laboratory for TCM Formulae Research，Nanjing 210023，China）

OBJECTIVE：To analyze fatty oil and volatile oil in seed of Metaplexis japonica.METHODS：Fatty oil and volatile oil in seed of M.japonica were analyzed by GC-MS：HP-5MS quartz capillary column，high purity nitrogen as carrier gas，flow rate of 1m L/min，injector temperature of 220℃，primary column temperature of 120℃（temperature programmed），column pres-sure of 80 kPa，split sampling，split ratio of 20∶1，sample size of 1μL.Mass condition：electron bombardment ion source，electron energy of 70 eV，interface temperature of 250℃，mass scanning range ofm/z 50-550，scanning intervalof 1.0 s.The difference of volatile components in seed of M.japonica before and after processing was analyzed by HSGC-MS：HP-5MSquartz capillary column，high purity nitrogen as carrier gas，flow rate of 1m L/min，headspace heating temperature of 90℃，heating time of 30min，primary column temperature of 80℃（temperature programmed），column pressure of 80 kPa，split sampling，split ratio of 20∶1，sample size of 1μL.Mass condition：electron bombardment ion source，electron energy of 70 eV，interface temperature of 210℃，mass scanning range ofm/z 50-550，scanning interval of 1.0 s.RESULTS：A totall of 30 components were identified in fatty oil，among which relative contents of linoleic acid，oleic acid，palm itic acid were in high level；54 components were identified in volatile oil，main componentswere terpenes，among which relative contents of cananga oil diene，thujopsene，dehydro aromadendrene were in high level.Terpinen-4-olwas found and dihydrocarveol increased 100%after frying，compared with before frying.CONCLUSIONS：The study basically confirm main component of fatty oil and volatile oil in seed of M.japonica；there is difference of volatile components in seed of M. japonica before and after frying.

Seed of Metaplexis japonica；Fatty oil；Volatile oil；GC-MS；HSGC-MS

R284.1

A

1001-0408（2017）18-2532-04

2016-09-11

2017-01-03）

（編輯：張靜）

國(guó)家公益性行業(yè)科研專項(xiàng)（No.201407002）；江蘇高校優(yōu)勢(shì)學(xué)科建設(shè)工程項(xiàng)目（No.ysxk-2010）

＊碩士研究生。研究方向：中藥資源化學(xué)及其利用。E-mail：hp381554489@163.com

#通信作者：教授，博士生導(dǎo)師。研究方向：中藥資源化學(xué)與中藥生物技術(shù)。電話：025-85811280。E-mail：chenjw695@126.com

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.18.24