膠體金免疫層析法在ELISA檢出HBsAg陽性標本復檢中的應用研究

李景蘭

(商丘市中心醫院 輸血科 河南 商丘 476000)

膠體金免疫層析法在ELISA檢出HBsAg陽性標本復檢中的應用研究

李景蘭

(商丘市中心醫院 輸血科 河南 商丘 476000)

目的 探討膠體金免疫層析法(CICA)在酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢出乙型肝炎表面抗原(HBsAg)陽性標本復檢中的應用效果。方法 所有HBsAg陽標本均取自2015年3月至2016年3月商丘市中心醫院輸血科，根據初檢A值/cutoff值分為5組，另外選擇同期檢測結果為陰性的標本作為F組。每組標本均進行CICA、ELISA及GLIA法復檢，將GLIA法檢測結果作為金標準，統計GICA與ELISA復檢的假陽性率與假陰性率。結果 A組復檢時ELISA法檢出假陽性率為21.43%、假陰性率為6.25%，GICA法檢出假陽性率為0、假陰性率為95.75%。兩種方法復檢A組標本的假陰性率與假陽性率相比，差異有統計學意義(P<0.05)。結論 隨著標本A值/cutoff值的升高，GICA法復檢HBsAg的漏診率也會隨之降低，但當A值/cutoff值<10時，為確保準確性，可進行兩種方法聯合復檢。

膠體金免疫層析法；酶聯免疫吸附試驗；乙型肝炎表面抗原；復檢

我國是乙型肝炎病毒(HBV)感染的多發地區，約有10%為乙型肝炎表面抗原(HBsAg)攜帶者，已成為我國嚴重的公共衛生問題之一[1]。HBsAg是HBV感染診斷的重要標志物，為減少HBV的感染率，實驗室已廣泛開展HBsAg的檢測。目前臨床檢測HBsAg常用的方法為ELISA，靈敏性、特異性較高，價格低廉，適用于各基層醫院。隨著其大規范的推廣應用發現，該方法在進行操作時易受多方面因素影響，會存在一定的漏診及誤診，且操作繁瑣、花費時間長，因此臨床仍需對HBsAg陽性標本進行復查，以確保檢測的可靠性[2]。鑒于此，本研究進一步探討膠體金免疫層析法在ELISA檢出HBsAg陽性標本復檢中的應用效果。

1 資料與方法

1.1 標本來源及分組 所有HBsAg陽性標本均取自2015年3月至2016年3月商丘市中心醫院輸血科，標本與零下20 ℃保存，未出現脂血、溶血、黃疸等現象。所有標本均按初檢A值/cutoff值分組[3]：1≤A值/cutoff值<5(A組)；5≤A值/cutoff值<10(B組)；10≤A值/cutoff值<15(C組)；15≤A值/cutoff值<20(D組)；A值/cutoff值≥20(E組)；另外選擇同期檢測結果為陰性的標本作為F組。每組隨機抽取30個標本用于實驗。

1.2 方法 儀器。FANE全自動酶免分析系統及AT plus均由瑞士 HAMILTON公司生產，另外選擇美國強生公司生產的VITROS 3600全自動免疫分析儀與美國BIO-RAD公司生產的IMark 酶標儀。試劑。CICA、ELISA試劑盒均由英科新創科技有限公司提供；其余所需試劑為配套試劑，所有試劑均經批檢合格，在有效期內使用，所有操作需嚴格按照產品說明進行。操作方法：①CICA法復檢。根據操作說明，將膠體金試紙條加樣區浸入血清30 s，反應10 min后記錄結果。陽性判斷標準：需同時出現檢測線與質控線；陰性判斷標準：出現控制線；若兩種線均未出現即為無效需重新檢測。②ELISA、化學發光免疫分析法(GLIA)復檢：使用ELISA法進行初檢、復檢兩次檢測，再采用GLIA法進行復檢，并將GICA法檢測結果作為金標準，按照產品說明書進行檢測，兩種方法檢測均用質控血清做質控。

1.3 評價指標 將GLIA法檢測結果作為金標準，統計GICA與ELISA漏檢率與誤診率。假陰性率(%)=(假陰性人數/金標準陽性人數)×100%；假陽性率(%)=(假陽性人數/金標準陰性人數)×100%。

2 結果

2.1 3種復檢方法結果 A組GLIA法檢出16份(53.33%)陽性標本，ELISA法檢出15份(50.00%)陽性標本，漏診1份，GICA法僅檢出ELISA法漏診的1份陽性標本，陽性率為3.33%；B組GLIA法與ELISA法檢出的陽性標本數量相同，均為93.33%，而GICA法檢出22份(73.33%)陽性標本，漏檢8份。另外3組3種檢查方法所檢出的結果一致，無一漏診或誤檢。見表1。

表1 3種復檢方法結果(n，%)

2.2 GICA與ELISA復檢方法的檢測結果 ELISA法復檢A組標本時假陽性率為21.43%、假陰性率為6.25%，其余4組假陽性率、假陰性率均為0； GICA復檢A組假陰性率為95.75%、B組為21.43%，其余3組均為0，另外A-E組假陽性率也均為0。兩種方法復檢A組標本的假陰性率與假陽性率相比，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 GICA與ELISA復檢方法的檢測結果對比(n，%)

注：復檢A組標本時，與ELISA法比較，aP<0.05。

3 討論

HBsAg是檢測HBV的重要指標之一，對乙肝診斷及治療均具有重要意義。實驗室常采用ELISA法檢測HBsAg感染情況，但該方法操作復雜、步驟較多，其檢測結果易受多方面因素影響，如加樣槍頭污染、吸樣時吸入紅細胞、孵育時間長、試劑失效、反應孔沖洗不徹底等原因均會造成假陽性結果的發生[4]。本次研究所抽取的樣本中經ELISA法初檢為陽性，但經GLIA復檢后發現14例誤檢，誤檢原因與上述一致，因此為提高檢驗結果的準確性，有必要對ELISA法檢測后HBsAg陽性標本再次進行復查。

GLIA是一種高效的全自動化免疫分析技術，特異度、靈敏性均較高，能夠準確地提供檢測結果，但該方法成本較高，在基層醫院廣泛實行存在一定難度[5]。GICA是以膠體金作為指示標記，可與待測血清中的HBsAg形成雙抗體夾心復合物沉淀在包被線上，會形成一條紅色的沉淀線，具有操作簡單易行、成本低、不需要特殊儀器等優勢，檢測快速，患者無需長時間等待，但不足的是敏感性較低[6]。本研究結果顯示，GICA法用于A值/cutoff值>10的標本復檢時，敏感性、準確性均較高，不會出現漏診、誤診現象，也能夠檢測出ELISA法漏檢的陽性標本；但對于A值/cutoff值<10的標本漏檢率較高，此時應結合其他檢測方法進行再次復檢，以確保診斷的準確性。

綜上所述，隨著標本A值/cutoff值的升高，GICA法復檢HBsAg的漏診率也會隨之降低，但當A值/cutoff值<10時，為確保準確性，可進行兩種方法聯合復檢。

[1] 侯娟,陳偉金,黃宏黎.乙型肝炎表面抗原不同檢測方法的優勢比較分析[J].當代醫學,2014,20(12):23-24.

[2] 賀新春,胡小宣,劉猛,等.原發性肝癌患者血清 HBV 標記物、HBV-DNA 與 AFP 的相關性研究[J].醫學臨床研究,2015,32(10): 2059-2060.

[3] 梁馬可,李仁鋒,夏曉博,等.CDC25C蛋白和CLDN6蛋白在肝細胞癌中的表達及臨床意義[J].河南醫學研究,2013,22(6):807-811.

[4] 白潔,李桂霞,羅傳霞,等.3種方法檢測乙型肝炎病毒血清標志物的結果分析[J].國際檢驗醫學雜志,2016,37(5):666-668.

[5] 張曉飛.門診及住院患者入院前血清感染性標志物檢測結果分析[J].中國實用醫刊,2013,40(17):74-75.

[6] 姜宏兵,蔣菲,董清清,等.膠體金免疫層析法急診檢測 HBsAg漏檢風險評價[J].檢驗醫學與臨床,2016,13(13):1750-1751,1754.

R 446.6

10.3969/j.issn.1004-437X.2017.13.076

2017-02-17)