美羅培南聯合頭孢哌酮舒巴坦對3種多重耐藥革蘭氏陰性桿菌的抗菌活性研究Δ

劉燕琳，宋傳杰，尹 玲，梁曉燕，張 晗，李長征#（.泰山醫學院附屬醫院，山東泰安 27000；2.山東大學附屬腫瘤醫院，濟南 2507；3.山東省醫學科學院，濟南 2507）

美羅培南聯合頭孢哌酮舒巴坦對3種多重耐藥革蘭氏陰性桿菌的抗菌活性研究Δ

劉燕琳1＊，宋傳杰2，3，尹 玲1，梁曉燕1，張 晗1，李長征2，3#（1.泰山醫學院附屬醫院，山東泰安 271000；2.山東大學附屬腫瘤醫院，濟南 250117；3.山東省醫學科學院，濟南 250117）

目的：研究美羅培南（MPN）聯合頭孢哌酮舒巴坦（SCF）對3種多重耐藥（MDR）革蘭氏陰性桿菌的抗菌活性。方法：收集2016年1－12月泰山醫學院附屬醫院收治患者的痰、血、尿、腹水或引流液標本，從中分離得到的MDR-大腸埃希菌（EC）、MDR-肺炎克雷伯菌（KPN）、MDR-鮑曼不動桿菌（AB）各50株，采用瓊脂稀釋法、棋盤法測定MPN、SCF、MPN+SCF對MDR-EC、MDRKPN、MDR-AB的半數抑菌濃度（MIC50）、90%抑菌濃度（MIC90）及平均抑菌濃度（MICG），計算聯合抑菌濃度（FIC）指數，采用K-B紙片法進行藥敏試驗。結果：MPN單用時MDR-EC、MDR-KPN、MDR-AB的MICG分別為36.82、82.45、34.32 μg/mL，SCF單用時MDR-EC、MDR-KPN、MDR-AB的MICG分別為42.14、112.67、24.11 μg/mL，MPN+SCF時MDR-EC、MDR-KPN、MDR-AB的MICG分別為25.97、56.64、11.36 μg/mL，MDR-EC、MDR-KPN中的MICG為MPN+SCF＜MPN＜SCF，MDR-AB中的MICG為MPN+ SCF＜SCF＜MPN，差異均有統計學意義（P＜0.05）。MPN+SCF對MDR-EC、MDR-KPN、MDR-AB的FIC最高分別為＞0～0.5（78.00%）、＞0～0.5（72.00%）、＞0.5～1.0（82.00%）。結論：MPN聯合SCF可有效提高對MDR-EC、MDR-KPN、MDR-AB等MDR革蘭氏陰性桿菌的抗菌活性，且兩藥聯用具有協同作用。

美羅培南；頭孢哌酮舒巴坦；多重耐藥；革蘭氏陰性桿菌；抗菌活性

ABSTRACTOBJECTIVE：To study antibacterial activities of meropenem（MPN）combined with cefoperazone sulbactam（SCF）to 3 kinds of multidrug resistance（MDR）Gram-negative bacteria.METHODS：Each 50 strains of MDR-Escherichia coli（MDREC），MDR-Klebsiella pneumoniae（MDR-KPN）and MDR-Acinetobacter baumannii（MDR-AB）were isolated from sputum，blood，urine，ascites or drainage specimens of patients during Jan.to Dec.in 2016 from the affilidated hospital of Taishan medical university.The agar dilution method and board method were used to determine MIC50，MIC90and MICGof MPN，SCF，MPN+SCF to MDR-EC，MDR-KPN，MDR-AB and calculate fractional inhibitory concentration（FIC）.Drug sensitivity test was conducted by K-B disk method.RESULTS：In terms of the MICGto MDR-EC，MDR-KPN，MDR-AB，MPN alone were respectively 36.82，82.45，34.32 μg/mL；SCF alone were respectively 42.14，112.67，24.11 μg/mL；MPN combined with SCF were respectively 25.97，56.64，11.36 μg/mL.In terms of MICGto MDR-EC，MDR-KPN，MICGshowed that MPN+SCF＜MPN＜SCF；in terms of MICGto MDR-AB，MICGshowed that MPN+SCF＜SCF＜MPN，with statistical significance（P＜0.05）.The highest of FIC of MPN+SCF to MDR-EC，MDR-KPN and MDR-AB was respectively＞0-0.5（78.00%），＞0-0.5（72.00%），＞0.5-1.0（82.00%）. CONCLUSIONS：MPN combined with SCF can effectively improve antibacterial activities to MDR Gram-negative bacteria as MDR-EC，MDR-KPN，MDR-AB.MPN combined with SCF has synergistic effects.

KEYWORDSMeropenem；Cefoperazone sulbactam；Multidrug resistance；Gram-negative bacteria；Antibacterial activity

革蘭氏陰性桿菌是臨床上常見的感染性疾病病原菌之一，是指革蘭氏染色反應呈紅色的細菌。對于其引起的感染常用治療方法為給予抗菌藥物，如美羅培南（MPN）、頭孢哌酮舒巴坦（SCF）等；抗菌藥物可有效殺傷病原菌而控制患者的病情[1]。但近年來，受抗菌藥物、激素等的廣泛使用、用藥不規范、藥物濫用等因素的影響，導致革蘭氏陰性桿菌出現多重耐藥（MDR）而影響療效。大腸埃希菌（Escherichia coli，EC）、肺炎克雷伯菌（klebsiella pneumoniae，KPN）、鮑 曼 不 動 桿 菌（Acinetobacter baumannii，AB）是較為常見的耐藥病原菌，且耐藥狀況日趨嚴重[2]。為此，在本研究中筆者檢測了MPN聯合SCF對MDR-EC、MDR-KPN、MDR-AB的抗菌活性，旨在為臨床合理使用抗菌藥物提供參考。

1 材料與方法

1.1 菌株來源

2016年1－12月于泰山醫學院附屬醫院呼吸內科、重癥醫學科（ICU）、神經科、心胸外科、消化科患者痰、血、尿、腹水或引流液等臨床標本中分離得到的MDREC、MDR-KPN、MDR-AB標本各50株，所有菌株鑒定及藥敏試驗結果均按2010版美國臨床實驗室標準化協會（CLSI）推薦的標準實施[3]。MDR-EC：痰液37株，尿液3株，血液6株，腹水或引流液4株；MDR-KPN：痰液41株，尿液3株，血液2株，腹水或引流液4株；MDR-AB：痰液40株，尿液2株，血液3株，腹水或引流液5株。

1.2 試驗器材

20 mL試管20支、無菌吸管、錐形瓶、10 μL移液槍、100 μL移液槍、200 μL移液槍、1 000 μL移液槍。MicroScan Walk Away 40全自動微生物分析儀及專用NC31鑒定板（美國Dade公司）

1.3 試驗藥品

注射用SCF（輝瑞制藥有限公司，規格：1 g，批準文號：國藥準字H10960113）；注射用MPN（海口市制藥廠有限公司，規格：0.25 g，批準文號：國藥準字H2009 3396）；SCF、MPN藥敏紙片、銅綠假單胞菌ATCC 27853（英國Oxoid公司）；0.9%氯化鈉注射液、0.01 mol/L磷酸鹽緩沖液（pH＝7.2）、滅菌蒸餾水（安圖生物有限公司）。

1.4 培養基

Mueller-hinton（M-H）瓊脂（英國Oxoid公司）。

1.5 菌懸液的配制

所有標本于細菌平板上分純并在培養箱過夜12 h培養，后選取10株菌落分別加入0.9%氯化鈉注射液配成10個0.5麥氏單位濃度的溶液；同時，精確稱取1∶1的注射用SCF、注射用MPN各10μg分別溶于滅菌蒸餾水、0.01 mol/L磷酸鹽緩沖液（pH＝7.2）中，配成SCF+蒸餾水、SCF+0.01 mol/L磷酸鹽緩沖液、MPN+蒸餾水、MPN+0.01 mol/L磷酸鹽緩沖液的貯備液，質量濃度均為5 120 μg/mL，采用瓊脂稀釋法分別用滅菌蒸餾水按倍比稀釋法將上述貯備液配成10個濃度（256、128、64、32、16、8、4、2、1、0.5 μg/mL），即得。

1.6 單藥的藥敏試驗

選取MDR-EC、MDR-KPN、MDR-AB純菌落各50株接種到NC31鑒定板上，采用MicroScan Walk Away 40全自動微生物分析儀對菌株進行鑒定和藥敏試驗，藥敏試驗采用K-B紙片法，試驗方法及結果判斷標準參照2010版CLSI，質控菌株為銅綠假單胞菌ATCC 27853。結果，均符合2010版CLSI的藥敏質控范圍。

1.7 聯合藥敏試驗

以棋盤法將配好的10個0.5麥氏單位濃度溶液均勻涂布于M-H瓊脂培養基表面，放置5 min，待平板表面水分吸收后，將SCF、MPN藥敏紙片貼于平板上，兩紙片之間相距20 mm，置于培養箱37℃孵育過夜10 h，取出，觀察結果。試驗方法及結果判斷標準參照2010版CLSI。

1.8 觀察指標

觀察SCF、MPN、SCF+MPN分別對MDR-EC、MDR-KPN、MDR-AB的半數抑菌濃度（MIC50）、90%抑菌濃度（MIC90）及平均抑菌濃度（MICG）。

1.9 聯合抑菌濃度（FIC）指數的確定

FIC指數為聯合用藥時各藥的MIC值（最小抑菌濃度）分別除以單藥時MIC值的商的和。相互作用解釋為：0＜FIC≤0.5為協同作用；0.5＜FIC≤1.0為相加作用；1.0＜FIC≤2.0為無關作用；FIC＞2.0為拮抗作用[4]。

1.10 統計學方法

采用SPSS 16.0統計軟件對數據進行分析。計量資料以±s表示，采用t檢驗；計數資料以率表示，采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 MPN、SCF、MPN+SCF對MDR-EC、MDR-KPN、MDR-AB的MIC比較

MDR-EC、MDR-KPN中的MICG為MPN+SCF＜MPN＜SCF，MDR-AB中的MICG為MPN+SCF＜SCF＜MPN，差異均有統計學意義（P＜0.05），詳見表1、圖1～3 [圖中MPV（單）為MPN單用時的MIC；MPN（聯）為MPN聯合SCF時MPN的MIC；SCF（單）為SCF單用時的MIC；SCF（聯）為MPN聯合SCF時SCF的MIC]。

2.2 MPN+SCF對MDR-EC、MDR-KPN、MDR-AB的FIC值

MPN+SCF對MDR-EC、MDR-KPN、MDR-AB的FIC值見表2。

表2MPN+SCF對MDR-EC、MDR-KPN、MDR-AB的

表1 MPN、SCF、MPN+SCF對MDR-EC、MDR-KPN、MDR-AB的MIC比較（±s，μg/mL）Tab 1 Comparison of MIC of MPN，SCF and MPN+SCF to MDR-EC，MDR-KPN，MDR-AB（±s，μg/mL）

表1 MPN、SCF、MPN+SCF對MDR-EC、MDR-KPN、MDR-AB的MIC比較（±s，μg/mL）Tab 1 Comparison of MIC of MPN，SCF and MPN+SCF to MDR-EC，MDR-KPN，MDR-AB（±s，μg/mL）

注：與SCF比較，＊P＜0.05；與MPN比較，#P＜0.05Note：vs.SCF，＊P＜0.05；vs.MPN，#P＜0.05

組別SCF MPN MPN+SCF MDR-EC MDR-KPN n MDR-AB MICG24.11#34.32 11.36＊#50 50 50 MIC5016.00 16.00 8.00 MIC9064.00 64.00 32.00 MICG42.14 36.82＊25.97＊#MIC5032.00 32.00 16.00 MIC90128.00 128.00＊64.00 MICG112.67 82.45＊56.64＊#MIC5016.00 16.00 8.00 MIC9032.00 64.00 32.00

圖1 MPN、SCF、MPN+SCF對MDR-EC的MICFig 1 MIC of MPN，SCF，MPN+SCF to MDR-EC

圖2 MPN、SCF、MPN+SCF對MDR-KPN的MICFig 2 MIC of MPN，SCF，MPN+SCF to MDR-KPN

圖3 MPN、SCF、MPN+SCF對MDR-AB的MICFig 3 MIC of MPN，SCF，MPN+SCF to MDR-AB FIC值

Tab 2 FIC of MPN+SCF to MDR-EC，MDR-KPN，MDR-AB

3 討論

EC、AB均為條件致病菌，KPN是腸桿菌科克雷伯氏菌屬中最為重要的一類病原菌，三者均為革蘭氏陰性桿菌，均可引起醫院獲得性肺炎、菌血癥等疾病，且3種病原菌耐藥狀況較為嚴重，特別是在ICU，其爆發、流行、病死率高等問題給臨床治療帶來挑戰。

目前，治療MDR-EC、MDR-KPN、MDR-AB等所致感染藥物較少。SCF是一種臨床常用的抗菌復合制劑，其成分中的舒巴坦屬于β-內酰胺類抗菌藥物，可在細菌繁殖期抑制細胞壁黏肽的生物合成；頭孢哌酮為不可逆的競爭性β-內酰胺酶（ESBLs）抑制劑，可與β-內酰胺酶發生不可逆的反應而使該酶失去活性，其已成為治療革蘭氏陰性桿菌的首選藥物[5-6]。有研究表明，碳青霉烯類（KPC）藥物是臨床上治療革蘭氏陰性桿菌的最后一道防線，其可通過抑制細菌細胞壁的合成而產生抗菌作用，已被廣泛應用于多種革蘭氏陰性桿菌的治療，且療效顯著[7]。但有研究認為，在MDR革蘭氏陰性桿菌治療中，單用藥的療效較低，但二藥或三藥聯合治療可發揮藥物協同或相加的效果，從而提高抗菌效果[8]。

本研究通過檢測MPN聯合SCF對上述3種MDR革蘭氏陰性桿菌的抗菌活性，發現MPN單用時MDR-EC、MDR-KPN、MDR-AB的MICG分別為36.82、82.45、34.32 μg/mL，SCF單用時MDR-EC、MDR-KPN、MDR-AB的MICG分別為42.14、112.67、24.11 μg/mL，MPN+SCF時MDR-EC、MDR-KPN、MDR-AB的MICG分別為25.97、56.64、11.36 μg/mL，MDR-EC、MDR-KPN中的MICG為MPN+SCF＜MPN＜SCF，MDR-AB中的MICG為MPN+ SCF＜SCF＜MPN，差異均有統計學意義。這表明，MPN聯合SCF可有效提高MDR革蘭氏陰性桿菌的抗菌活性，提示其可作為臨床治療MDR-EC、MDR-KPN、MDR-AB的用藥方案。本研究結果還顯示，MPN+SCF對MDR-EC、MDR-KPN、MDR-AB的FIC值最高的分別為＞0～0.5（78.00%）、＞0～0.5（72.00%）、＞0.5～1.0（82.00%）。這表明，MPN聯合SCF對MDR-EC、MDRKPN、MDR-AB具有協同作用；這可能是由于MDR-EC、MDR-KPN、MDR-AB耐藥機制主要與ESBLs、KPC的改變等有關[9-10]，MPN可抑制細菌細胞壁的合成，SCF可抑制MDR-AB的ESBLs的作用，使MDR-AB未能有效產生ESBLs等，促使MPN不被KPC水解，從而抑制MDRAB細胞壁黏肽的生物合成，減少ESBLs產生，達到協同作用。但本研究中，MPN聯合SCF后對MDR-KPN的MIC值較單用MPN、SCF低，但仍處于較高水平（56.64 μg/mL），這表明MPN聯合SCF的效果一般，提示MDRKPN的耐藥性除與細菌本身存在耐藥基因有關外，可能還與臨床上過多或頻繁使用MPN和SCF有關，如給予多種大劑量抗菌藥物、預防性和經驗性用藥等[11-12]，從而加快細菌耐藥性的進程，導致其療效下降。因此，在臨床工作中，應通過藥敏試驗和抗菌活性試驗等藥學監測手段，掌握MPN聯合SCF的最佳使用劑量，以達到更佳的效果。

綜上所述，MPN聯合SCF可有效提高對MDR-EC、MDR-KPN、MDR-AB等MDR革蘭氏陰性桿菌的抗菌活性，且兩藥聯用具有協同作用。

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Study on Antibacterial Activities of Meropenem Combined with Cefoperazone Sulbactam to 3 Kinds of Multidrug Resistant Gram-negative Bacteria

LIU Yanlin1，SONG Chuanjie2，3，YIN Ling1，LIANG Xiaoyan1，ZHANG Han1，LI Changzheng2，3（1.The Affiliated Hospital of Taishan Medical University，Shandong Tai’an 271000，China；2.The Affiliated Tumor Hospital of Shandong University，Jinan 250117，China；3.Shandong Academy of Medical Sciences，Jinan 250117，China）

R969

A

1001-0408（2017）21-2912-04

2017-04-07

2017-05-10）

（編輯：陳 宏）

山東省中醫藥科技發展計劃項目（No.2015-264）

＊副主任藥師，副教授，碩士。研究方向：臨床藥理學。電話：0538-6236471。E-mail：tyfyypcg@163.com

#通信作者：副主任醫師。研究方向：消化道腫瘤的臨床及基礎。電話：0531-67626991。E-mail：liczdoc@163.com

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.21.09