壯藥竹節蓼的質量標準研究Δ

曾祥燕，唐玉榮，顏萍花，黎 理（廣西中醫藥大學藥學院，南寧 530001）

壯藥竹節蓼的質量標準研究Δ

曾祥燕＊，唐玉榮，顏萍花，黎 理#（廣西中醫藥大學藥學院，南寧 530001）

目的：建立壯藥竹節蓼的質量標準。方法：采用薄層色譜法（TLC）對藥材樣品進行定性鑒別；采用高效液相色譜法對藥材樣品中槲皮苷進行含量測定：色譜柱為Agilent Zorbax SB-C18，流動相為乙腈-0.1%冰醋酸溶液（20∶80，V/V），流速為1.0 mL/min，檢測波長為360 nm，柱溫為30℃，進樣量為10 μL；參照2015年版《中國藥典》測定藥材樣品水分、灰分和浸出物的含量。結果：竹節蓼藥材的TLC圖斑點清晰，分離度好。槲皮苷檢測質量濃度線性范圍為0.023～0.46 mg/mL（r＝0.999 1）；精密度、穩定性、重復性試驗的RSD＜2.0%；加樣回收率為98.01%～103.05%（RSD＝1.71%，n＝6）。藥材樣品水分、總灰分、酸不溶性灰分、浸出物和槲皮苷含量分別為6.39%～9.78%、2.82%～8.07%、0.02%～0.27%、14.14%～28.45%、0.09%～0.50%。結論：該研究所建標準可用于壯藥竹節蓼的質量控制。

壯藥；竹節蓼；槲皮苷；定性；定量；薄層色譜法；高效液相色譜法

ABSTRACTOBJECTIVE：To establish quality standard for Zhuang medicine Homalocladium platycladum.METHODS：TLC method was used for qualitative identification.HPLC method was used to determine the content of quercetrin in samples：Agilent Zorbax SB-C18column，mobile phase consisted of acetonitrile-0.1%acetic acid（20∶80，V/V），flow rate of 1.0 mL/min，detection wavelength of 360 nm，column temperature of 30℃，injection volume of 10 μL.The contents of moisture，total ash and extract in samples were determined.referring to Chinese Pharmacopiea（2015 edition）.RESULTS：TLC spots of H.platycladum were clear and well-separated without interference from negative control.The linear range of quercetin were 0.023-0.46 mg/mL（r＝0.999 1）. RSDs of precision，stability and repeatability tests were all lower than 2.0%.The average recoveries were 98.01%-103.05%（RSD＝1.71%，n＝6）.The contents of moisture，total ash，extract and quercetrin in samples were 6.39%-9.78%，2.82%-8.07%，0.02%-0.27%，14.14%-28.45%，0.09%-0.50%respectively.CONCLUSIONS：Established trial can be used for quality control of Zhuang medicine H.platycladum.

KEYWORDSZhuang medicine；Homalocladium platycladum；Quercetrin；Qualitative；Quantitative；TLC；HPLC

竹節蓼為蓼科植物竹節蓼Homalocladium platycladum（F.Muell.ex Hook.）L.H.Bailey的全草[1]，又名觀音竹、飛天蜈蚣、扁竹等，味甘、淡，性平，歸肝、肺經，具有清熱解毒、祛瘀消腫的功效，主治癰瘡腫毒、跌打損傷等癥，在民間常作為草方用于治療腫瘤，效果顯著[2-3]，但其化學成分研究未見報道。本課題組前期研究發現竹節蓼中含有金絲桃苷和槲皮苷等黃酮類化合物。而研究表明，槲皮苷和金絲桃苷具有抗腫瘤、抗炎、抗菌等作用，與竹節蓼功效主治具有一定相關性[4-7]。筆者采用薄層色譜法（TLC）和高效液相色譜法（HPLC）[8-10]對竹節蓼藥材中槲皮苷進行定性定量分析，并對其水分、灰分及浸出物含量進行測定，以期為其質量控制提供科學依據。

1 材料

1.1 儀器

1260型HPLC儀，包括DAD檢測器、1260色譜工作站（美國Agilent公司）；FA1104型電子分析天平（上海精密科學儀器有限公司）；KQ5200B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司，功率：250 W，頻率：40 kHz）；DHG-9070A型電熱鼓風干燥箱（上海一恒科學儀器有限公司）；H1650-W型高速離心機（長沙湘儀離心機儀器有限公司）；HH-S6型電熱恒溫水浴鍋（金壇市醫療儀器廠）。

1.2 試劑

槲皮苷對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：111538-200504，純度：＞98%）；硅膠GF254（青島海洋化工有限公司，批號：0140828）；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。

1.3 藥材

竹節蓼藥材采自廣西各地（見表1），經廣西中醫藥大學中藥鑒定教研室蔡毅教授鑒定為真品。以編號為ZJL-1的藥材樣品作對照藥材。

表1 竹節蓼藥材來源Tab 1 Resouce of H.platycladum

2 方法與結果

2.1 定性鑒別

取藥材樣品粉末1 g，加50%甲醇溶液20 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，濃縮加50%甲醇溶液定容至1 mL，即得供試品溶液。另取槲皮苷對照品，加50%甲醇溶液制成質量濃度為1 mg/mL的對照品溶液。再取竹節蓼對照藥材粉末1 g，同供試品溶液制備方法制成對照藥材溶液。按TLC法[2015年版《中國藥典》（四部）][11]試驗，吸取上述3種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以乙酸丁酯-環己烷-甲酸-水（6∶1.2∶1.8∶0.5，V/V/V/V）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以3%三氯化鋁乙醇溶液，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。結果，供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應位置上顯相同顏色的斑點，詳見圖1。

圖1 薄層色譜圖Fig 1 TLC chromatogram

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件與系統適用性試驗 色譜柱：Agilent Zorbax SB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為乙腈-0.1%冰醋酸溶液（20∶80，V/V）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：360 nm；柱溫：30℃；進樣量：10 μL。在上述色譜條件下，理論板數以槲皮苷峰計＞3 000；各成分基線分離良好，分離度＞1.5，詳見圖2。

圖2 高效液相色譜圖Fig 2 HPLC chromatograms

2.2.2 對照品溶液的制備 取槲皮苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成質量濃度為0.344 mg/mL的對照品溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備 稱取藥材樣品（編號：ZJL-1）約1 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加70%甲醇溶液20 mL，稱定質量，超聲提取45 min，放至室溫，再次稱定質量，加70%甲醇溶液補足減失的質量，搖勻，濾過，精密量取濾液約2 mL，以半徑為12 cm、10 000 r/ min離心10 min，取上清液，即得。

2.2.4 線性關系考察 分別精密量取“2.2.2”項下對照品溶液0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、2.0 mL，分別置于2 mL量瓶中，加甲醇定容，制成系列對照品溶液。精密量取上述系列對照品溶液各10 μL，按“2.2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以槲皮苷質量濃度（x，mg/mL）為橫坐標、峰面積（y）為縱坐標進行線性回歸，得槲皮苷回歸方程為y＝18 165.511 9x－47.969 429（r＝0.999 1）。結果表明，槲皮苷檢測質量濃度線性范圍為0.023～0.46 mg/mL。

2.2.5 精密度試驗 取“2.2.2”項下對照品溶液適量，按“2.2.1”項下色譜條件連續進樣測定6次，記錄峰面積。結果，槲皮苷峰面積的RSD＝0.08%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.2.6 穩定性試驗 取“2.2.3”項下供試品溶液（編號：ZJL-1）適量，分別于室溫下放置0、4、8、12、16、24 h時按“2.2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果，槲皮苷峰面積的RSD＝0.51%（n＝6），表明供試品溶液在室溫放置24 h內基本穩定。

2.2.7 重復性試驗 精密稱取同一批樣品（編號：ZJL-1）適量，按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，共6份，再按“2.2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果，槲皮苷峰面積的RSD＝1.73%（n＝6），表明本方法重復性良好。

2.2.8 加樣回收率試驗 取已知含量樣品（編號：ZJL-1）適量，每份0.25 g，共6份，分別加入一定質量的槲皮素對照品，按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，再按“2.2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算加樣回收率，結果見表2。

2.2.9 樣品含量測定 取11批樣品各適量，分別按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，再按“2.2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算樣品含量，結果見表3。

表2 加樣回收率試驗結果（n＝6）Tab 2 Results of recovery test（n＝6）

表3 樣品含量測定結果（n＝3，%）Tab 3 Results of content determination of samples（n＝3，%）

由表3可知，11批藥材樣品中槲皮苷含量為0.09%～0.50%，初步擬定按干燥品計算，本品含槲皮苷不得少于0.08%。

2.3 水分、灰分和浸出物的測定

參照2015年版《中國藥典》（四部）通則水分測定法、灰分測定法、浸出物測定法測定藥材樣品水分、灰分和浸出物[11]，結果見表4。

表4 藥材樣品水分、灰分和浸出物測定結果（n＝3，%）Tab 4 Determination of moisture，ash and extract of samples（n＝3，%）

由表4可知，11批竹節蓼藥材水分含量為6.39%～9.78%，總灰分含量為2.82%～8.07%，酸不溶性灰分含量為0.02%～0.27%，浸出物含量為14.14%～28.45%。從實際應用的角度考慮，初步擬定本品水分不得過10.00%，總灰分不得過8.50%，酸不溶性灰分不得過0.30%，浸出物含量不少于12.60%。

3 討論

筆者按本試驗色譜條件進樣分析，測得槲皮苷色譜峰面積的RSD＜2.0%，分離度符合含量測定要求，方法穩定、重復性好，雜質干擾小。經測定，11批藥材樣品中槲皮苷含量在0.09～0.50%之間，說明不同時間竹節蓼中槲皮苷的含量差異較大，地域的差別及采收時間的不同對其含量影響的規律如何，相關研究將另文報道。

在TLC鑒別中，通過對乙酸丁酯-丙酮-甲醇-甲酸（5∶3∶1∶1，V/V/V/V）、氯仿-丙酮-甲酸-水（6∶3∶1∶1，V/V/V/V）、乙酸丁酯-環己烷-甲酸-水（6∶1.2∶1.8∶0.5，V/ V/V/V）等展開系統進行試驗，結果顯示，各編號藥材樣品均可檢出槲皮苷，以乙酸丁酯-環己烷-甲酸-水（6∶1.2∶1.8∶0.5，V/V/V/V）為展開系統時，展開效果較好，重現性好，斑點清晰且分離較好，比移值適中，故選用乙酸丁酯-乙酸乙酯-甲酸-水（11∶3∶1.5∶1.5，V/V/V/V）為展開系統；此方法穩定性及重復性好，簡便、快速，可作為竹節蓼的定性鑒別方法。

本試驗通過廣泛收集不同產地樣品進行研究，結果具有一定的代表性，能夠用于評價竹節蓼藥材的質量；本研究所建標準可用于壯藥竹節蓼的質量控制。

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Study on Quality Standard of Zhuang Medicine Homalocladium platycladum

ZENG Xiangyan，TANG Yurong，YAN Pinghua，LI Li（College of Pharmacy，Guangxi University of TCM，Nanning 530001，China）

R927

A

1001-0408（2017）21-2989-03

2016-08-11

2016-10-10）

（編輯：張 靜）

廣西壯族自治區重點實驗室培育基地項目（No.桂科基字〔2014〕32號）；廣西“2011協同創新中心”項目（No.桂教科研〔2013〕20號）；廣西重點學科項目（No.桂教科研〔2013〕16號）；廣西高校中青年教師基礎能力提升項目（No.桂教科研〔2016〕3號）；《廣西壯藥質量標準（第三卷）》質量評價與標準研究項目（No.MZY2015001）；廣西科學研究與技術開發計劃項目（No.桂科重1598005-10）；廣西中醫藥大學研究生教育創新計劃資助項目（YJS201626）

＊碩士研究生。研究方向：中藥及民族藥品種鑒別與開發利用。E-mail：1471090976@qq.com

#通信作者：講師，碩士。研究方向：中藥及民族藥品種鑒定與開發利用。E-mail：lijiayou42@163.com

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.21.30