齊墩果酸滴丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

李 祥，梁 穎，楊新建（天津市中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院，天津 300120）

齊墩果酸滴丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

李 祥＊，梁 穎#，楊新建（天津市中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院，天津 300120）

目的：建立齊墩果酸滴丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：鑒別制劑性狀，檢測制劑重量差異、溶散時(shí)限；采用超高效液相色譜法測定制劑中齊墩果酸的含量：色譜柱為ACQUITY UPLC BEH C18，流動(dòng)相為乙腈-水（70∶30，V/V），流速為0.30 mL/min，檢測波長為206 nm，柱溫為30℃，進(jìn)樣量為5 μL。結(jié)果：制劑鑒別特征明顯，丸重差異為37.62%～46.56%，溶散時(shí)間均為24 min。齊墩果酸檢測質(zhì)量濃度線性范圍為0.006～0.06 mg/mL（r＝0.999 8）；精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)的RSD＜2.0%；加樣回收率為99.34%～100.40%（RSD＝0.4%，n＝6）。結(jié)論：該研究所建標(biāo)準(zhǔn)可用于齊墩果酸滴丸的質(zhì)量控制。

齊墩果酸滴丸；超高效液相色譜法；齊墩果酸；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

ABSTRACTOBJECTIVE：To establish the quality standard of Oleanolic acid dripping pills.METHODS：The property of the preparation was identified，and weight difference and dissolution time limit were detected.UPLC method was adopted to determine the content of oleanolic acid in the preparation.The determination was performed on ACQUITY UPLC BEH C18column with mobile phase consisted of acetonitrile-water（70∶30，V/V）at the flow rate of 0.30 mL/min.The detection wavelength was set at 206 nm，the column temperature was 30℃，and the sample was 5 μL.RESULTS：The characteristics of the preparation was significant；weight difference ranged 37.62%-46.56%；dissolution time limit was 24 min.Linear range of oleanolic acid ranged 0.006-0.06 mg/mL（r＝0.999 8）.RSDs of precision，stability and reproducibility tests were all lower than 2.0%.The recoveries were 99.34%-100.40%（RSD＝0.4%，n＝6）.CONCLUSIONS：Established standard can be used for quality control of Oleanolic acid dripping pills.

KEYWORDSOleanolic acid dripping pills；UPLC；Oleanolic acid；Quality standard

齊墩果酸是一種五環(huán)三萜類化合物，以游離或糖苷形式廣泛存在于世界各地的植物中[1]。經(jīng)檢測，山茱萸、山楂、女貞子、木瓜、烏梅、連翹、石榴皮、柿蒂、夏枯草等119種植物中均含有齊墩果酸[2]；該成分常用檢測方法為薄層掃描法、高效液相色譜法（HPLC）、超高效液相色譜法（UPLC）等[3-8]。我院自行研制了齊墩果酸滴丸，并按照2015年版《中國藥典》要求制定了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，以期為齊墩果酸滴丸的質(zhì)量控制提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

ACQUITYⅠ型UPLC儀，包括紫外檢測器（美國Waters公司）；AG285型電子分析天平（瑞士Mettler Toledo公司）；KE-100E型超聲波清洗器（昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司，功率：250 W，頻率：40 kHz）；WD08-1型全自動(dòng)滴丸機(jī)（天津市昂大科技發(fā)展有限公司）。

1.2 藥品與試劑

齊墩果酸滴丸（天津市中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院制劑室自制，批號(hào)：20151211、20151225、20160105，規(guī)格：3 mg/丸）；齊墩果酸對(duì)照品（中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)：20140406，純度：≥98.5%）；聚乙二醇-4000、二甲基硅油均為藥用規(guī)格，甲醇、乙睛為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 定性鑒別（齊墩果酸）

取樣品10丸，加醋酐2 mL，水浴加熱使溶解，振搖，加硫酸3滴，即顯紫紅色；取樣品10丸，加三氯甲烷5 mL，水浴加熱使溶解，加硫酸5滴，即顯橙紅黃色至橙紅色；取樣品5丸，加香草醛冰醋酸液（取香草醛0.5 g，加冰醋酸10 mL使溶解，即得）0.5 mL，加高氯酸1 mL，水浴加熱使溶解，溶液顯紫色。

2.2 檢查

2.2.1 重量差異 按2015年版《中國藥典》（四部）“通則0108”項(xiàng)下[9]要求檢查3批樣品（每批20丸）重量差異，詳見表1。結(jié)果表明，3批樣品重量差異在±10%范圍內(nèi)，符合規(guī)定。

2.2.2 溶散時(shí)限 按2015年版《中國藥典》（四部）“通則0108”項(xiàng)下[9]要求檢查3批樣品（每批6丸）的溶散時(shí)限，詳見表2。結(jié)果表明，3批樣品溶散時(shí)限均為24 min（＜30 min），符合規(guī)定。

表1 重量差異測定結(jié)果Tab 1 Results of weight difference determination

表2 溶散時(shí)限檢查結(jié)果Tab 2 Results of dissolution time limit

2.3 含量測定

2.3.1 色譜條件 色譜柱：ACQUITY UPLC BEH C18（50 mm×2.1 mm，1.7 μm）；流動(dòng)相：乙腈-水（70∶30，V/V）；流速：0.30 mL/min；檢測波長：206 nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：5 μL。在上述色譜條件下，理論板數(shù)以齊墩果酸峰計(jì)＞14 900；各成分基線分離良好，分離度＞1.5，詳見圖1。

圖1 超高效液相色譜圖Fig 1 UPLC chromatorgams

2.3.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取齊墩果酸對(duì)照品12 mg，置于l00 mL量瓶中，加甲醇50 mL，超聲處理30 min，加甲醇定容，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3.3 供試品溶液的制備 取樣品10丸，研細(xì)，準(zhǔn)確稱取約含齊墩果酸12 mg的細(xì)粉，置于100 mL三角瓶中，加甲醇50 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液移至100 mL量瓶中，加甲醇定容，即得。

2.3.4 線性關(guān)系考察 準(zhǔn)確量取“2.3.2”項(xiàng)下齊墩果酸對(duì)照品溶液0.5、1、2、3、4、5 mL，分別置于10 mL量瓶中，加甲醇定容，制成質(zhì)量濃度分別為0.006、0.012、0.024、0.036、0.048、0.06 mg/mL的系列對(duì)照品溶液。精密量取上述系列對(duì)照品溶液各5 μL，按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。以齊墩果酸質(zhì)量濃度（x，mg/mL）為橫坐標(biāo)、峰面積（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得齊墩果酸回歸方程y＝23 906x+1 953（r＝0.999 8）。結(jié)果表明，齊墩果酸檢測質(zhì)量濃度線性范圍為0.006～0.06 mg/mL。

2.3.5 精密度試驗(yàn) 取“2.3.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液適量，按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測定6次，記錄峰面積。結(jié)果，齊墩果酸峰面積的RSD為0.56%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取“2.3.3”項(xiàng)下供試品溶液（批號(hào)：20151211）適量，分別于室溫下放置0、5、10、15、24 h時(shí)按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。結(jié)果，齊墩果酸峰面積的RSD為1.09%（n＝5），表明供試品溶液室溫放置24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.3.7 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取同一批樣品（批號(hào)：20151211）適量，按“2.3.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，共6份，再按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。結(jié)果，齊墩果酸峰面積的RSD為0.58%（n＝6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.3.8 回收率試驗(yàn) 取已知含量樣品（批號(hào)：20151211）適量，共6份，按“2.3.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積并計(jì)算回收率，結(jié)果見表3。

表3 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）Tab 3 Results of recovery tests（n＝6）

2.3.9 樣品含量測定 取3批樣品各適量，分別按“2.3.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積并計(jì)算樣品含量。結(jié)果，3批樣品（批號(hào)：20151211、20151225、20160105）齊墩果酸的平均含量分別為3.029、3.002、2.927 mg/丸。

4 討論

本研究在建立UPLC法測定齊墩果酸滴丸中齊墩果酸含量的方法時(shí)，參考文獻(xiàn)[10]，以甲醇-0.1%磷酸-三乙胺為流動(dòng)相，其吸收峰有拖尾，分離效果不能滿足標(biāo)準(zhǔn)制定要求。最終確定以乙腈和水作為流動(dòng)相，能夠在較短時(shí)間內(nèi)測定，且峰形良好，無拖尾現(xiàn)象。同時(shí)本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，UPLC的溶劑洗脫強(qiáng)度稍弱于HPLC。由于UPLC色譜柱填料粒徑較小，流路管線較細(xì)，因此流動(dòng)相和供試品溶液需經(jīng)0.22 μm微孔濾膜濾過。

綜上所述，本研究建立的UPLC法特異性強(qiáng)、重復(fù)性好，與傳統(tǒng)的HPLC分離方法比較，分析時(shí)間短，操作簡便，靈敏度高，精密度及穩(wěn)定性良好，所建標(biāo)準(zhǔn)可用于齊墩果酸滴丸的質(zhì)量控制。

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[10] 田燕，高萌，蔣妮，等.齊墩果酸滴丸的制備及質(zhì)量評(píng)價(jià)[J].大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，32（5）：521-523、538.

（編輯：張 靜）

Study on Quality Standard of Oleanolic Acid Dripping Pills

LI Xiang，LIANG Ying，YANG Xinjian（The Affiliated Hospital of Tianjin Academy of TCM，Tianjin 300120，China）

R927

A

1001-0408（2017）21-2994-03

2016-11-03

2017-03-28）

＊主管藥師。研究方向：醫(yī)院制劑研發(fā)。電話：022-27285099

#通信作者：主任藥師。研究方向：醫(yī)院制劑研發(fā)。E-mail：changzhengyj@sina.com

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.21.32