高效液相色譜法測定西布曲明、麻黃堿和芬氟拉明試驗

曹寧陽++董嬌++吳迪++王爍++岑琴

摘要：為建立高效液相色譜同時測定減肥類保健品中非法添加藥物西布曲明、麻黃堿和芬氟拉明的方法，樣品經(jīng)液相色譜分離后采用二極管陣列檢測器檢測，以保留時間和紫外特征吸收光譜圖作為定性依據(jù)。試驗結(jié)果表明：西布曲明、麻黃堿、芬氟拉明的檢出限分別為20，40，15 μg/mg；在4～80 μg/mL濃度范圍，線性相關(guān)系數(shù)均大于0.999 5；樣品加標(biāo)回收率大于95%，RSD小于3.4%。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法；西布曲明；麻黃堿；芬氟拉明；標(biāo)準(zhǔn)曲線

中圖分類號：TS218 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1674-1161（2017）05-0052-03

目前，市場上的減肥類保健品品種繁多，有些不法商家通過非法添加酚酞、咖啡因、西布曲明、麻黃堿和芬氟拉明等化學(xué)藥品來提高產(chǎn)品功效，對人體造成極大傷害。針對減肥類功能產(chǎn)品可能添加的化學(xué)藥物，國家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布藥品檢驗補(bǔ)充檢驗方法和檢驗項目批準(zhǔn)件2006004，2012005以及國家食品藥品監(jiān)督管理局辦公室文件食藥監(jiān)辦許[2010]114號附件，上述3個文件中均規(guī)定采用液質(zhì)法定性檢測，高相液相色譜法定量檢測，但批準(zhǔn)件200604中只提到用高效液相法定量檢測，卻沒有給出測定方法。為此，建立高效液相定量分析非法添加藥物西布曲明、麻黃堿和芬氟拉明的方法，且方法驗證良好、簡潔準(zhǔn)確，可作為減肥類保健食品中非法添加藥物的定量分析方法。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

麻黃堿（批號171241-201508）、西布曲明（批號100624-200401）由中國食品藥品檢定研究院提供；芬氟拉明（批號106265AL）由Dr.Ehrenstorfer提供。乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。減肥保健品由沈陽食品檢驗所購買。

1.2 儀器與設(shè)備

Waters 2695高效液相色譜儀，配有2998二極管陣列檢測器；HZF-A500電子天平（福州華志科學(xué)儀器有限公司）；KQ-250DB超聲波發(fā)生器（昆山市超聲儀器有限公司）；H2050R離心機(jī)（長沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司）。

1.3 檢測方法

1.3.1 HPLC色譜條件 色譜柱：Thermo Syncronis C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；

柱溫：30 ℃；流速：1 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL。梯度條件見表1。

1.3.2 對照品溶液的配制 分別準(zhǔn)確稱取西布曲明、麻黃堿和芬氟拉明對照品5 mg（精確至0.1 mg），置于50 mL容量瓶中，加入適量甲醇溶解，并定容至刻度，配置成100 μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液。分別吸取西布曲明、麻黃堿和芬氟拉明標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液200.0 μL，400.0 μL，800.0 μL，2.0 mL，4.0 mL，8.0 mL于10 mL容量瓶中，用甲醇定容，配制成質(zhì)量濃度分別為2，4，8，20，40，80 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液。

1.3.3 樣品前處理 取適量樣品（約1 g），置于10 mL容量瓶中，加入約8 mL甲醇超聲提取10 min，放冷至室溫，加入甲醇定容至刻度，混合均勻，經(jīng)過夜沉淀后取上層溶液適量，高速離心（不小于4 000 r/min），取上清液用0.45 μm微孔濾膜過濾，用高效液相色譜儀分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 流動相的選擇

分別以甲醇-0.02 mol/L乙酸銨-0.1%乙酸水溶液，以及乙腈-0.02 mol/L乙酸銨-0.1%乙酸水溶液作為流動相，用混合標(biāo)準(zhǔn)溶液優(yōu)化最佳分離條件。試驗發(fā)現(xiàn)，以乙腈-0.02 mol/L乙酸銨-0.1%乙酸水溶液作為洗脫液，采用表1中的梯度洗脫條件，可使麻黃堿、芬氟拉明和西布曲明保持足夠分離度和良好峰形。同時，根據(jù)不同化合物的紫外響應(yīng)值，西布曲明采集225 nm的色譜圖，麻黃堿和芬氟拉明采集265 nm的色譜圖，分別見圖1及圖2。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線

將1.3.2中得到的西布曲明、麻黃堿和芬氟拉明混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液按1.3.1色譜條件進(jìn)行檢測，以對應(yīng)的色譜圖峰面積為縱坐標(biāo)（y，響應(yīng)值）、質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（x，μg/mL）進(jìn)行回歸分析。結(jié)果表明，西布曲明、麻黃堿和芬氟拉明在各自濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，線性相關(guān)系數(shù)（r）均大于0.999 5，詳見表2。

2.2.1 檢出限 西布曲明、麻黃堿和芬氟拉明的檢出限分別為20，40，15 μg/mg（信噪比S/N≈3）。

2.2.2 回收率和精密度 取空白樣品6份，每份300 mg，加入各組分標(biāo)樣，按1.3.3進(jìn)行樣品前處理，進(jìn)樣10 μl，結(jié)果見表3。

由表3中的數(shù)據(jù)可知：樣品加標(biāo)回收率大于95%，RSD小于3.4%。

2.3 陽性樣品驗證

對市售某減肥藥品按照1.3.3進(jìn)行樣品前處理，按照1.3.1色譜條件進(jìn)行檢測。在225 nm的檢測波長下，24.016 min出現(xiàn)色譜峰，和標(biāo)準(zhǔn)品對照確定為西布曲明。

3 結(jié)論

樣品經(jīng)液相色譜分離后采用二極管陣列檢測器檢測，以保留時間和紫外特征吸收光譜圖作為定性的依據(jù)，確定西布曲明、麻黃堿、芬氟拉明的檢出限分別為20，40，15 μg/mg；在4～80 μg/mL濃度范圍，線性相關(guān)系數(shù)（r）均大于0.999 5；樣品加標(biāo)回收率大于95%，RSD小于3.4%。陽性樣品驗證試驗表明，方法學(xué)驗證良好。

該方法樣品前處理簡單、結(jié)果準(zhǔn)確、靈敏度高、重復(fù)性好，可作為減肥類保健食品中非法添加藥物的定量分析方法。

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