萊克多巴胺檢測方法研究進展

朱楠楠++師忠義

摘要：總結萊克多巴胺的主要檢測方法，分析儀器檢測方法及免疫檢測方法的優缺點、檢出限及效率，展望萊克多巴胺檢測方法的未來發展方向，為提高萊克多巴胺檢測的準確性及效率提供參考。

關鍵詞：萊克多巴胺；檢測方法；儀器檢測；免疫檢測

中圖分類號：S816.17 文獻標識碼：A 文章編號：1674-1161（2017）05-0073-02

萊克多巴胺是一種β-腎上腺受體激動劑，可治療充血性心力衰竭癥、肌肉萎縮癥等疾病。因其具有營養再分配作用，可促進脂肪分解、提高瘦肉率，被作為新型飼料添加劑應用于動物生產。人們在食用萊克多巴胺殘留過多的動物產品后，可能出現頭暈、嘔吐、心悸、四肢麻木等癥狀。患有高血壓、甲狀腺功能亢進、糖尿病等疾病的患者可能會有更嚴重的不良反應，嚴重的甚至危及生命。我國工信部、農業部、商務部、衛生部、國家工商行政管理總局、國家質量監督檢驗檢疫總局聯合發布公告，自2011年12月5日起在我國境內禁止生產和銷售萊克多巴胺。但受利益驅使，有些不法商販仍在畜產品生產過程中非法使用萊克多巴胺，導致食品安全事件時有發生。為此，國內外不僅增強對萊克多巴胺的監控，還建立多種檢測萊克多巴胺的方法。

1 儀器檢測方法

目前，用于檢測萊克多巴胺的儀器檢測方法主要有高效液相色譜法、氣相色譜-質譜法和液相色譜-質譜法等。

1.1 高效液相色譜法

國家標準GB/T 20189-2006中規定了用高效液相色譜法檢測動物飼料中萊克多巴胺的方法。黃怡等利用分子印跡技術和固相萃取技術與高效液相色譜法聯用測定飼料中的萊克多巴胺，檢出限達到

0.1 mg/kg，回收率大于80%，相對標準偏差小于10%。程盛華等用甲醇-磷酸二氫鉀溶液作為流動相，用高效液相色譜法檢測動物組織中的萊克多巴胺，檢出限達到10 ug/kg，回收率為78.1%～90.8%，相對標準偏差小于5%。

高效液相色譜法檢測的結果較準確，重復性好，但只適合做定量分析，操作過程比較繁瑣，檢測時間較長。

1.2 氣相色譜-質譜法

農業部958號公告-4-2007規定了用氣相色譜-質譜法測定豬肌肉、豬肝、豬尿和牛尿中萊克多巴胺殘留量的方法。李勝等用氣相色譜-質譜法測定飼料中的萊克多巴胺，方法檢出限達5 μg/kg，回收率為67.5%～92.3%。王培龍等利用分子印跡技術與固相萃取技術結合氣相色譜-質譜同時測定豬尿中萊克多巴胺、克倫特羅、氯丙那林、馬步特羅，檢出限低于0.5 μg/L，回收率為75.1%～97.5%，相對標準偏差小于10%。

與高效液相色譜法相比，這種方法的分離效率和靈敏度更高，分析結果準確，是萊克多巴胺定量和確證性方法。缺點是檢測前需要對樣品進行前期衍生化處理，過程特別繁瑣、復雜，在實際應用中受到一定限制。

1.3 液相色譜-質譜法

農業部958號公告-3-2007規定了用液相色譜-質譜法測定動物源食品中萊克多巴胺殘留量的方法。國家標準GB/T 22147-2008規定了用液相色譜-質譜法測定飼料中萊克多巴胺的方法。臧勇軍等用液相色譜-電噴霧質譜法同時檢測肉類中的萊克多巴胺和克倫特羅，萊克多巴胺的定量檢出限為0.2 μg/kg，回收率為82.0%～87.5%，批內相對標準偏差均小于7.1%。曾紹東等優化提取豬肉中9種β-受體激動劑的酶解條件，同時測定豬肉中的9種β-受體激動劑，此法檢出限為0.2 μg/kg，回收率為80.4%～110.3%，相對標準偏差不大于6.7%。

這種方法具有靈敏度高和分析結果準確等優點，樣品不需要進行復雜的前期衍生化處理，缺點是儀器價格昂貴、需要專業操作技能，檢測花費時間較長，一般用作對陽性結果進行確認。

2 免疫檢測方法

與儀器檢測方法相比，免疫檢測方法具有前處理相對簡單、操作簡便、檢測快速、無需昂貴儀器等優點，但該方法得出的測定結果易出現假陽性或假陰性。目前，常用于檢測萊克多巴胺免疫檢測的方法主要有酶聯免疫法、膠體金免疫法和化學發光免疫法等。

2.1 酶聯免疫法

農業部1025號公告-6-2008規定了用酶聯免疫吸附法檢測動物性食品中萊克多巴胺殘留量的方法。賈濤等應用酶聯免疫法檢測飼料中的萊克多巴胺，最低檢出限達0.5 ng/mL，回收率為75%～95%，相關系數超過0.99。鄭海松等建立一種檢測肉及肉制品中萊克多巴胺的酶聯免疫分析方法，出口豬肉罐頭的檢出限為0.28±0.30 μg/kg，牛肉的檢出限為0.26±0.21 μg/kg，回收率為82.9%～91.1%，相對標準偏差為4.3%～8.7%。

2.2 膠體金免疫法

蔣蔚等采用檸檬酸鈉還原法制備膠體金顆粒，標記萊克多巴胺單克隆抗體，研制出一種試紙條來檢測豬尿中的萊克多巴胺藥物殘留，8～10 min即可完成測試，檢出限為5 ng/mL，并可以用肉眼判斷檢測結果。王森等應用膠體金免疫技術研制一種瘦肉精三合一免疫膠體金快速檢測板，可以同時檢測畜肉中的萊克多巴胺、鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇藥物殘留。將樣品進行粗提處理，檢測板的檢出限為5.0 μg/kg，檢測時間約20 min；將樣品進行精提處理，檢測板的檢出下限為1.0 μg/kg，檢測時間約35 min。

2.3 化學發光免疫法

陳旭基于β-受體激動劑對魯米諾-高碘酸鉀化學發光體系的抑制作用，設計基于玻璃芯片的檢測方法。玻璃芯片可以重復使用，豬毛中萊克多巴胺的檢測限為2.0×10-8 mol/L。刁雅潔建立流動注射-Ni（IV）-魯米諾化學發光體系，飼料中萊克多巴胺含量的檢出限為1.0×10-10 mol/L，相對標準偏差為1.65%。

3 結語

儀器檢測方法和免疫檢測方法各有優缺點，是不可完全互相取代的，這就需要在實際檢測活動中，多用免疫檢測方法進行大量樣品的初步篩查，再用氣相色譜-質譜法或液相色譜-質譜法對結果進行確證。儀器檢測方法的研究應集中在增加樣品預處理效率、縮短檢測時間、開發更小更簡便設備、建立更好的檢測方法等方面，免疫檢驗方法則可以考慮和其他技術聯用，進一步提高準確度和靈敏度。

參考文獻

[1] 黃怡， 張青杰， 劉敏，等.分子印跡固相萃取-高效液相色譜法測定飼料中萊克多巴胺[J].色譜，2012，30（1）：56-61.

[2] 王培龍，范理，蘇曉鷗，等.分子印跡固相萃取-氣相色譜-質譜法測定豬尿中4種β-受體激動劑[J].分析化學，2012，40（3）：470-473.

[3] 曾紹東，王明月，楊春亮，等.超高效液相色譜-質譜法測定豬肉中9種β-受體激動劑殘留量[J].分析儀器，2013（4）：5-11

[4] 鄭海松，陳雪嬌，楊小嬌，等.肉及肉制品中萊克多巴胺的ELISA檢測方法的建立[J].肉類研究，2011（10）：26-28.

[5] 蔣蔚，劉迎春，陳永軍，等.萊克多巴胺膠體金免疫層析法快速檢測試紙條的研制[J].中國動物傳染病學報，2011，19（6）：59-64.

[6] 王森，周亞蓮，盛慧萍，等.瘦肉精三合一膠體金快速檢測板的研制及在畜肉中的應用[J].浙江農業科學，2012，1（12）：1 710：

1 719.

[7] 陳旭.豬毛中的β-受體激動劑微流控芯片-化學發光檢測系統的研究[D].北京：中國農業科學院，2015.