腫瘤相關基因Gankyrin在胰腺癌組織中表達的臨床意義

吳萬波 王曉紅 丁耘峰 張明 邵霞 朱曉偉

·論著·

腫瘤相關基因Gankyrin在胰腺癌組織中表達的臨床意義

吳萬波 王曉紅 丁耘峰 張明 邵霞 朱曉偉

目的 研究腫瘤相關基因Gankyrin在胰腺癌組織中表達的臨床意義。 方法 采用免疫組織化學染色法檢測Gankyrin在62例胰腺癌及對應癌旁組織中的表達情況，分析其與腫瘤病理參數的相關性及其對胰腺癌患者預后的影響。結果 胰腺癌及癌旁正常胰腺組織Gankyrin陽性表達率分別為72.5%(45/62)及19.4%(12/62)，癌組織的陽性表達率顯著高于癌旁組織，差異有統計學意義(P<0.001)。胰腺癌組織Gankyrin表達與TNM分期、腫瘤分化及轉移相關(P<0.05)，而與患者年齡、性別及腫瘤位置無關(P>0.05)；Gankyrin陽性者的術后3年生存率為17.8%(8/45)，陰性者為41.2%(7/17)，Gankyrin陽性表達者術后生存時間顯著短于陰性表達者(P=0.034)。結論 Gankyrin在胰腺癌組織中高表達，其表達與患者預后不良密切相關。

胰腺腫瘤； 腫瘤分期； 腫瘤轉移； 預后； Gankyrin

胰腺癌因其高惡性生物學行為被稱為“癌中之王”，預后很差，晚期胰腺癌患者的中位生存期僅8～12個月，發生轉移者的中位生存期更短[1]。目前臨床對胰腺癌診斷主要依賴于影像學及病灶穿刺病理活檢。雖有血清腫瘤標志物CA19-9，但其特異性與敏感性均不能滿足臨床診治要求[2]，因此尋找新的腫瘤標志物對提高胰腺癌診治至關重要。Gankyrin為一種腫瘤相關基因，在胰腺癌組織中的表達及意義報道較少。本研究應用免疫組織化學染色法檢測胰腺癌組織Gankyrin的表達，探討其臨床意義。

材料與方法

一、標本收集

選取2009年6月至2013年9月浙江省湖州市中心醫院手術切除并經病理證實的胰腺癌患者62例，術前均未行放化療。其中男性41例，女性21例， 年齡41～76歲，平均(56±12)歲。根據美國癌癥聯合委員會(AJCC，2002)的TNM分期，Ⅰ+Ⅱ期29例，Ⅲ+Ⅳ期33例。本研究經湖州市中心醫院倫理委員會批準，患者均簽署知情同意書。

二、免疫組織化學染色法檢測Gankyrin蛋白表達

取患者石蠟包埋的胰腺癌及癌旁正常胰腺組織，參考Yuan等[3]的方法行免疫組織化學染色。小鼠抗人Gankyrin一抗購自Santa Cruz公司，工作濃度1∶50，山羊抗小鼠二抗購自中杉公司。以細胞的胞質和(或)胞核出現黃色或棕黃色顆粒為陽性染色，按著色強度及陽性胰腺細胞比例評分。著色強度按無染色、淺黃色、黃色、棕黃色分別計為0、1、2、3分；按陽性細胞比例，<5%計0分，5%～25%計1分，25%～50%計2分，50%～75%計3分，>75%計4分。兩分值相加，≤3判為陰性(-)，≥4判為陽性(+)。

三、統計學處理

采用SPSS 22.0統計軟件進行數據分析。胰腺癌及癌旁組織Gankyrin表達差異采用χ2檢驗；Gankyrin表達與腫瘤臨床病理參數的相關性采用Kruskal-WallisU或H檢驗；生存分析繪制Kaplan-Meier生存曲線。P<0.05為差異具有統計學意義。

結 果

一、胰腺癌及癌旁組織Gankyrin表達

胰腺癌及癌旁組織Gankyrin陽性表達率分別為72.5%(45/62)及19.4%(12/62)，癌組織的表達水平顯著高于癌旁組織(圖1)，差異有統計學意義(χ2=35.35，P<0.001)。

二、胰腺癌組織Gankyrin表達與腫瘤臨床病理參數的相關性

分析Gankyrin在胰腺癌組織中的表達與患者臨床資料的關系，結果顯示Gankyrin表達水平與患者性別、年齡及腫瘤位置無顯著相關性，而與胰腺癌組織TNM分期、腫瘤分化及淋巴結轉移密切相關，提示Gankyrin高表達與胰腺癌惡性進展密切相關(表1)。

圖1 胰腺癌(1A)及癌旁組織(1B)Gankyrin表達(免疫組化 ×200)

表1 胰腺癌組織Gankyrin表達與腫瘤臨床病理參數的相關性(例)

病理參數例數Gankyrin陰性Gankyrin陽性U值或H值P值性別3050.37 男411031 女21714年齡3440.23 >50歲31625 ≤50歲311120TNM分期2980.02 Ⅰ+Ⅱ291118 Ⅲ+Ⅳ33627腫瘤分化2070.01 高19109 中23518 低20218淋巴結轉移254.50.02 無361422 有26323腫瘤位置316.50.58 胰頭461234 胰體尾部16511

三、Gankyrin表達水平與患者預后的關系

62例患者術后3年總生存率為24.2%(15/62)，其中Gankyrin陽性者的術后3年生存率為17.8%(8/45)，陰性者為41.2%(7/17)，Gankyrin陽性患者術后3年生存時間顯著短于陰性患者，差異有統計學意義(χ2=4.51，P=0.034，圖 2)。

討 論

胰腺癌是一種惡性度極高的消化系統腫瘤，多數患者發現時已失去手術機會，預后極差。而對于能夠手術治療的患者，由于其高增殖、高侵襲能力，患者術后生存時間較其他消化系統腫瘤短。胰腺癌的發生、發展、侵襲及轉移是一個多因素、多基因、多信號通路協同作用的過程，因此其治療也可以多靶點、多方法同時進行。隨著分子生物學飛速發展，各種基因、蛋白質組學技術為篩選胰腺癌可靠的標志物提供便利。

圖2 Gankyrin表達與胰腺癌患者術后生存率的關系

Gankyrin是一個通過雜交消減法得到的肝癌相關基因，又名PSMD10或p28GANK[4]，它是由7個錨蛋白Gankyrin結構域組成的小分子蛋白[3]，擁有螺旋-環-螺旋結構，分子表面有凹槽，具有多種生物學功能。它通過活化E3泛素連接酶MDM2，負向調控p53蛋白表達，抑制腫瘤細胞的凋亡[5]；通過活化CDK4，使成視網膜細胞瘤蛋白(Rb)高度磷酸化，促進細胞周期G1/S進展，促進細胞增殖[6]，也可通過抑制Oct4降解促進細胞增殖[7]。近期研究表明， IL-1β/IRAK-1信號轉導通路參與Gankyrin介導的腫瘤細胞惡性進展過程[8]；而miR605通過抑制Gankyrin基因的表達，從而抑制腫瘤細胞的增殖[9]。近期研究發現，結腸癌[10]、肝癌[11]、食管癌[12]、小細胞肺癌[13]等多種腫瘤組織高表達Gankyrin，且與腫瘤惡性進展密切相關。本研究結果表明，胰腺癌組織Gankyrin表達水平顯著高于其對應的癌旁正常組織，Gankyrin表達與患者性別、年齡及腫瘤位置無顯著相關性，而與腫瘤TNM分期、分化及轉移密切相關，提示其在胰腺癌發生、發展中同樣起重要的作用。

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(本文編輯：呂芳萍)

The expression of cancer-related gene gankyrin in pancreatic cancer

Wu Wanbo, Wang Xiaohong, Ding Yunfeng, Zhang Ming, Shao Xia, Zhu Xiaowei.

Department of General Surgery, Huzhou Central Hospital, Huzhou 313000, China

Wang Xiaohong, Email: wangxhdr@126.com

Objective To investigate the clinical significance of tumor related gene gankyrin expression in pancreatic cancer. Methods The immunohistochemical staining was performed to study the gankyrin expression in 62 pairs of pancreatic cancer and matched non-tumor tissues. The correlations of gankyrin expression with pathological parameters and the influences on the prognosis were analyzed. Results Ggankyrin positivity in pancreatic cancer and matched non tumor tissue was 2.5%(45/62)and 19.4%(12/62), respectively. The positivity of gankyrin was significantly higher in pancreatic cancer compared with matched non-tumor tissues, and the differences were statistical significant (P<0.01). Gankyrin expression in pancreatic cancer tissues were significantly correlated with TNM stage, differentiation and metastasis (P<0.05), but not with age，gender or tumor location (P>0.05). The 3-year survival rates of patients with positive and negative gankyrin expression were 17.8%(8/45)and 41.2%(7/17), respectively. Patients with positive gankyrin expression had a significantly shorter survival period compared with these with negative expression in pancreatic cancer tissues (P=0.034). Conclusions Gankyrin was overexpressed in pancreatic cancer, which was correlated with poor prognosis.

Pancreatic neoplasms; Neoplasm staging; Neoplasm metastasis; Prognosis; Gankyrin

10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2017.04.008

313000 浙江湖州，湖州市中心醫院普外科

王曉紅，Email: wangxhdr@126.com

2016-12-21)