CD3+CD4+、CD3+CD8+T細胞在IgA腎病患者外周血的表達及臨床意義

李 琳，陳 志，孫 韜，吳 昊

(吉林大學第一醫院 腎病科，吉林 長春130021)

CD3+CD4+、CD3+CD8+T細胞在IgA腎病患者外周血的表達及臨床意義

李 琳，陳 志，孫 韜，吳 昊*

(吉林大學第一醫院 腎病科，吉林 長春130021)

IgA腎病(immunoglobin A nephropathy)是最常見的原發性腎小球腎炎[1],也是導致終末期腎衰竭最常見的原因之一[2]。IgA腎病的病因未明，被認為多種免疫細胞及相關因子參與了其發病機制[3]。

T細胞亞群主要包括CD3+CD8+的細胞毒性T 細胞(cytotoxic T cells，Tc)和CD3+CD4+的輔助性T 細胞(helper T cells，Th)等[4]，CD4+T細胞和CD8+T細胞在調節宿主免疫中發揮了重要作用[5，6]。本文擬通過檢測IgA腎病患者外周血CD3+CD4+T細胞、CD3+CD8+T細胞的水平以及CD4+/CD8+的比值，來反映IgA腎病患者的細胞免疫狀態。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 研究對象 研究對象為2015年3月到2017年3月吉林大學第一醫院收治IgA腎病患者26例。所有患者經腎穿刺經病理明確診斷。所有病例排除了合并有嚴重感染和自身免疫性疾病，以及既往有惡性腫瘤病史的患者。所有入組病例3個月內未用過激素及免疫抑制劑。 隨機選擇20 例年齡與性別匹配的健康正常者,均排除心、肝、腎等疾病為對照組。

1.1.2 試劑和儀器 試劑：CD3 anti-human PE cy7,CD4 anti-human FITC,CD8 anti-human pacific blue均購自美國BD公司，淋巴細胞分離液Ficoll-Histopaque 1.077購自美國Sigma公司。儀器：FACS Fortessa 流式細胞儀(美國BD公司)。

1.2 方法

1.2.1 標本收集 取IgA腎病患者組及健康對照組清晨空腹靜脈人乙二胺四乙酸(ethylene diamietetraacetic acid，EDTA)抗凝血5 mI,立即輕搖混勻,室溫保存,3 h內測定。

1.2.2 外周血單個核細胞(PBMC)的提取 超凈臺中，將采到的抗凝血加PBS1∶1混勻。取離心管，每管加5 ml淋巴細胞分離液。將稀釋的抗凝血沿管壁緩慢勻速加到分離液的上面。將離心管置于水平離心機，室溫下2 000 rpm，離心20 min。離心結束后，用毛細吸管輕輕穿過血漿層至白膜層，沿離心管周緣吸出白膜層細胞，置于新離心管中。加PBS液，吸管吹打細胞均勻，室溫1 200 rpm，離心5 min，洗滌2次。用含0.1%BSA的PBS重懸提取的PBMC細胞。

1.2.3 熒光標記細胞外抗原染色 流式管中每管細胞數為5×105，1 650 rpm，離心5 min，棄上清。加入100 μl流式洗液，并加入細胞表面抗原hCD3 PE-cy7/hCD4 FITC/hCD8 pacific blue各10 μl?；靹蚝笾?℃避光孵育20 min。冷流式FACS洗液洗滌細胞2次。棄上清，重懸至500 μl流式洗液中。

1.2.4 流式分析 應用流式細胞儀檢測IgA腎病患者組和健康對照組外周血中CD3+CD4+T細胞和CD3+CD8+T細胞的表達情況。

1.2.5 統計學處理 采用GraphPad Prism 5.0作圖，流式數據采用Flowjo分析數據并作圖，組別間差異比較采用配對t檢驗，P<0.05有統計學意義。

2 結果

2.1 流式分析IgA腎病患者組與健康對照組CD3+CD4+T細胞的比例

結果表明IgA腎病患者外周血CD3+CD4+T細胞的比例低于健康對照組，差異有統計學意義(P<0.001)。結果見表1及圖1。

2.2 流式分析IgA腎病患者組與健康對照組CD3+CD8+T細胞的比例

結果表明IgA腎病患者外周血CD3+CD8+T細胞的比例高于健康對照組，差異有統計學意義(P<0.01)。結果見表1及圖1。

2.3 測定IgA腎病患者組與健康對照組CD4+/CD8+比值

結果提示IgA腎病患者外周血CD4+/CD8+比值低于健康對照組，差異有統計學意義(P<0.001)，結果見表1。

表1 IgA腎病患者外周血T 細胞亞群檢測結果比較(%，

Note:**,P<0.01;***,P<0.001

圖1 健康對照組、IgA腎病患者組CD3+CD4+T細胞、CD3+CD8+T細胞及CD4+/CD8+比值的比較**,P<0.01;***,P<0.001

3 討論

IgA腎病為最常見的原發性腎小球疾病[7],據統計，IgA腎病發生率占全部原發性腎小球疾病的45%-50%[8]。IgA腎病發病機制不明，目前認為與免疫因素、基因異常及上呼吸道感染有關。盡管IgA腎病的發病機制尚未闡明，但IgA腎病腎組織中明確有IgA免疫球蛋白沉積，提示與免疫炎癥性反應相關[9]。多種免疫細胞和相關細胞因子參與IgA腎病發病機制[10]。

T細胞亞群是目前臨床上較常用的反映免疫功能狀態的指標，T細胞的免疫調節作用主要由CD4+T細胞、CD8+T細胞完成[11]。其中，CD4+T細胞可協調B細胞分化產生抗體，CD8+T細胞可抑制抗體的合成及T細胞增殖，兩者的穩態維持著機體正常的免疫應答[12]。我們檢測了IgA腎病患者的這兩種T淋巴細胞亞群，發現與對照組相比，IgA腎病患者CD4+T細胞數量及CD4+/CD8+比值均降低，差異有統計學意義，顯示患病機體T淋巴細胞數量異常，免疫功能低下。此外這也提示了IgA腎病患者容易并發感染。

綜上，我們認為IgA腎病患者外周血的CD4+T細胞減少而CD8+T細胞增多，這種T細胞亞群改變也反映了IgA腎病中免疫功能的紊亂及容易并發感染。

[1]FloegeJ,Moura IC,Daha MR,New insights into the pathogenesis of IgA nephropathy[J].Semin Immunopathol,2014,36(4):431.

[2]Liu P,Lassén E,Nair V,et al.Transcriptomic and Proteomic Profiling Provides Insight into Mesangial Cell Function in IgA Nephropathy[J].J Am Soc Nephrol,June 23,2017.doi:10.1681/ASN.2016101103.

[3]Al Hussain T,Hussein MH,Al Mana H,et al,Pathophysiology of IgA Nephropathy[J].Adv Anat Pathol,2017,24(1): 56.

[4]Caby F.Writing committee of the CD4/CD8 ratio restoration in long-term treated HIV-1-infected individuals: Incidence and determinants[J].AIDS,2017,31(12):1685.

[5]Gerner W,Kaser T,Saalmuller A.Porcine T lymphocytes and NK cells--an update[J].Dev Comp Immunol,2009,33(3):310.

[6]Sallustio F,Serino G,Cox SN,et al.Aberrantly methylated DNA regions lead to low activation of CD4+T-cells in IgA nephropathy[J].Clin Sci (Lond),2016,130(9):733.

[7]Ledbetter JA,Deans JPruffo A,et al.CD4,CD8 and the role of CD45 in T-cell activation[J].Curr Opin Immunol,1993.5(3): 334.

[8]聶東紅.IgA腎病腎間質纖維化患者血清膠原蛋白I、血小板衍生生長因子、轉化生長因子-P1水平變化及意義[J].中國臨床醫生雜志,2017,45(2):63.

[9]于 航.IgA腎病發病機制的研究進展[J].內蒙古醫科大學學報,2017,39 (1):90.

[10]程小莉，呂治安，楊艷艷,等.巨噬細胞在IgA腎病患者腎臟中的浸潤及其與腎纖維化的關系[J].西 安 交 通 大 學 學 報 ,2017,38 (1):66.

[11]譚 政,龔非力.T 細胞功能亞群[J].生命科學,2010,22(6)：499.

[12]吳姍姍，嚴 峰，鄧玉玲,等.小細胞和非小細胞肺癌晚期患者CD3+CD4+及CD3+CD8+T 淋巴細胞亞群的差異[J].中國免疫學雜志,2015,31(1):114.

本研究受國家自然科學基金(81641064)，吉林省省級產業創新專項資金項目(2016C041-2)，吉林省教育廳“十三五”科學技術研究規劃項目(JJKH20170841KJ),吉林省發改委產業技術研究開發專項(2015Y036-1)資助

1007-4287(2017)08-1305-02

2017-06-15)

*通訊作者