普樂士泰膠囊對慢性非細菌性前列腺炎模型大鼠的改善作用Δ

葉綠萍，李德鋼，劉素春，馬儒清，賓 彬（.廣西中醫藥大學第一附屬醫院藥學部，南寧 500；.廣西中醫藥大學第一附屬醫院胃腸肛門中心，南寧 500；.廣西中醫藥大學第一附屬醫院檢驗科，南寧500；4.廣西中醫藥大學第一附屬醫院男科，南寧 500）

普樂士泰膠囊對慢性非細菌性前列腺炎模型大鼠的改善作用Δ

葉綠萍1＊，李德鋼2，劉素春3，馬儒清1，賓 彬4#（1.廣西中醫藥大學第一附屬醫院藥學部，南寧 530023；2.廣西中醫藥大學第一附屬醫院胃腸肛門中心，南寧 530023；3.廣西中醫藥大學第一附屬醫院檢驗科，南寧530023；4.廣西中醫藥大學第一附屬醫院男科，南寧 530023）

目的：考察普樂士泰膠囊對慢性非細菌性前列腺炎（CNP）模型大鼠的改善作用。方法：將60只大鼠隨機分為假手術組（蒸餾水）、模型組（蒸餾水）、普樂安片組（陽性對照，2 g/kg）和普樂士泰膠囊高、中、低劑量組（16、8、4 g/kg），除假手術組外的其余5組大鼠均注射消痔靈注射液0.2 mL復制CNP模型。造模7 d后ig相應藥物，每日1次，連續45 d。末次給藥后24 h，肉眼觀察前列腺的病變并稱定其濕質量；顯微鏡下進行白細胞（WBC）計數和卵磷脂小體（SPL）計數，并對前列腺組織切片進行病理觀察。結果：與假手術組比較，模型組大鼠前列腺局部出現灰白色結節、腺體與周圍組織發生粘連等病變；腺體濕質量和前列腺組織中WBC、SPL計數均顯著增加（P＜0.01）；顯微鏡下可見前列腺間質中有明顯充血、水腫及多種炎癥細胞浸潤。與模型組比較，普樂安片組和普樂士泰膠囊各劑量組大鼠前列腺局部灰白色結節減少、腺體與周圍組織粘連程度減輕；腺體濕質量和前列腺組織中WBC、SPL計數均顯著減少（P＜0.01）；顯微鏡下可見病理變化得到不同程度改善，且以普樂士泰膠囊高劑量組改善最為明顯，前列腺組織間質中僅有輕度充血、水腫和少量炎癥細胞浸潤。結論：普樂士泰膠囊對CNP模型大鼠有一定的改善作用。

普樂士泰膠囊；慢性非細菌性前列腺炎；白細胞；卵磷脂小體；大鼠

慢性前列腺炎（Chronic prostatitis，CP）是中青年男性一種常見的多發的生殖系統疾病，約50%的成年男性一生中某個階段會受該病的困擾[1]。前列腺炎臨床表現多為尿頻、尿急、尿痛，尿道口常有溢液，伴有會陰部、恥骨上區、腰背部隱痛等不適。1995年美國國立衛生研究院（National Institutes of Health，NIH）以前列腺炎病因學為基礎，將前列腺炎分為4類，其中第Ⅲ類為慢性非細菌性前列腺炎（Chronic nonbacterial prostatitis，CNP）或慢性盆底疼痛綜合征（Chronic pelvic pain syndrome，CPPS）。CNP的特征為沒有明顯的前列腺感染，但伴有會陰部、恥骨上區、腰背部等疼痛和尿頻、尿急、尿痛，尿道口常有溢液等不適及各種排尿和性功能異常，為最常見的類型，約占CP的90%以上[2]。

普樂士泰膠囊是廣西中醫藥大學第一附屬醫院治療前列腺炎的院內制劑，是根據該院男科主任賓彬教授臨床長期應用的經驗方研制而成。處方由益母草、白蔻仁、薏苡仁、苦杏仁、川牛膝、太子參、石菖蒲、茜草、大血藤、王不留行、敗醬草、萆薢、威靈仙、山藥、車前子、小茴香、通草等多味中藥組成，具有清熱化濕、導濁通淋、活血祛瘀、行氣止痛之功，臨床上用于治療CNP取得了良好的療效，且長期服用未見不良反應的發生[3]，為我院男科治療前列腺炎的常用處方。本研究主要通過建立大鼠CNP模型，考察普樂士泰膠囊對CNP模型大鼠前列腺的影響，探討普樂士泰膠囊對CP的治療作用，為其臨床應用提供實驗依據。

1 材料

1.1 儀器

AEU-210電子稱（日本島津公司）；CH30普通光學顯微鏡（日本Olympus公司）。

1.2 藥品與試劑

普樂士泰膠囊（由廣西中醫藥大學第一附屬醫院制劑室提供，批號：20140306，規格：0.38 g/粒）；普樂安片（浙江康恩貝制藥股份有限公司，批號：131141，規格：0.57 g/片）；消痔靈注射液（吉林省集安益盛藥業股份有限公司，批號：14042601，規格：10 mL∶0.4 g）；戊巴比妥鈉（美國Sigma-Aldrich公司，由上海語燕生物技術有限公司分裝，批號：20110222，純度：＞99%）；硫酸慶大霉素注射液（河南輔仁懷慶堂制藥有限公司，批號：1311031，規格：2 mL∶8萬U）。

1.3 動物

SD大鼠60只，SPF級，♂，體質量220～240 g，購自廣西醫科大學動物實驗中心[許可證號：SCXK（桂）2009-0002]。

2 方法

2.1 分組

將60只大鼠按體質量隨機分為6組，分別為假手術組、模型組、普樂安片組（陽性對照）和普樂士泰膠囊高、中、低劑量組。

2.2 造模

各組大鼠ip 0.6%戊巴比妥鈉麻醉（30 mg/kg），剪除下腹被毛，于無菌條件下在下腹部正中切口，直達腹腔，提起膀胱及兩側精囊，暴露附于精囊內側的前列腺背葉，分別注入消痔靈注射液0.2 mL（假手術組大鼠注入0.2 mL生理鹽水），送復臟器，逐層縫合肌肉皮膚。術后每只大鼠im慶大霉素0.1 mL預防感染[4]。

2.3 給藥

造模后第7天各組大鼠開始給藥。假手術組和模型組：蒸餾水1 mL/100 g；普樂安片組：給藥劑量為2 g/kg（相當于成人日用量的20倍），臨用前用生理鹽水制備成0.2 g/mL的混懸液；普樂士泰膠囊高、中、低劑量組：給藥劑量分別為16、8、4 g/kg（分別相當于成人日用量的20、10、5倍），臨用前用生理鹽水分別制備成1.6、0.8、0.4 g/mL的混懸液。各組大鼠均ig給藥，每日1次，連續45 d。

2.4 取材及指標檢測

末次給藥后24 h，稱大鼠體質量后將其斷頸處死，取出前列腺稱定其濕質量，肉眼觀察前列腺體顏色變化、有無灰白色結節及腺體與周圍組織粘連等。然后將前列腺右側葉迅速放入10%中性福爾馬林液中固定48 h，逐級乙醇脫水，二甲苯透明、浸蠟、石蠟包埋，常規切片（4 μm），行蘇木精-伊紅（HE）染色，在400倍光鏡（HP）下觀察前列腺間質充血、水腫和間質內炎癥細胞浸潤情況。前列腺組織間質充血、水腫判斷標準：無為-，輕度為±，較明顯為+，顯著為++[5]；前列腺組織間質內炎癥細胞浸潤判斷標準：0個細胞/HP為-，1～9個細胞/HP為±，10～19個細胞/HP為+，≥20個細胞/HP為++。用電子稱稱定前列腺左側葉濕質量后，將前列腺組織放入試管內，按每1 mg組織加4 μL無菌生理鹽水的比例進行組織勻漿，取部分組織勻漿光鏡下觀察白細胞（WBC）計數和卵磷脂小體（SPL）計數。WBC計數：WBC數/ L＝4個大方格內的WBC總數×50×106；SPL計數：滿視野為++++，占3/4視野為+++，占2/4視野為++，占1/4視野為+，少許散在不足1/4視野為-[6]。

2.5 統計學方法

3 結果

3.1 前列腺肉眼觀察結果

假手術組大鼠前列腺腺體柔軟，表面光澤、紅潤，未見灰白色結節及腺體與周圍組織粘連。與假手術組比較，模型組大鼠前列腺腺體表面顏色暗紅，明顯水腫或充血，局部有灰白色結節，腺體與周圍組織明顯粘連。各給藥組大鼠前列腺腺體表面均可見顏色暗紅，局部有灰白色結節，腺體與周圍組織有粘連，但較模型組大鼠均有不同程度改善，且普樂士泰膠囊各劑量組大鼠前列腺變化與普樂安片組相似。

3.2 前列腺濕質量測定結果

各組大鼠體質量差異均無統計學意義（P＞0.05）。與假手術組比較，模型組大鼠前列腺濕質量顯著增加（P＜0.01）；與模型組比較，各給藥組大鼠前列腺濕質量顯著減少（P＜0.01），且接近假手術組水平（P＞0.05），表明普樂安片及各劑量普樂士泰膠囊均對CNP模型大鼠前列腺濕質量的增加有明顯的抑制作用，結果見表1。

表1 各組大鼠體質量及前列腺濕質量測定結果（±s）Tab 1 Determination results of body mass and wet prostate quality of rats in each group（±s）

表1 各組大鼠體質量及前列腺濕質量測定結果（±s）Tab 1 Determination results of body mass and wet prostate quality of rats in each group（±s）

注：與假手術組比較，＊＊P＜0.01；與模型組比較，##P＜0.01Note：vs.sham operation group，＊＊P＜0.01；vs.model group，##P＜0.01

前列腺濕質量，g 1.702±0.111 2.485±0.241＊＊1.849±0.197##1.831±0.187##1.972±0.279##2.029±0.205##組別假手術組模型組普樂安片組普樂士泰膠囊高劑量組普樂士泰膠囊中劑量組普樂士泰膠囊低劑量組n 10 10 10 10 10 10大鼠體質量，g 234.2±13.894 230.2±13.838 229.4±14.331 228.9±12.332 230.8±13.070 229.3±13.115

3.3 WBC、SPL計數結果

與假手術組比較，模型組大鼠前列腺組織中WBC計數顯著增加、SPL計數顯著減少（P＜0.01）；與模型組比較，普樂安片組及普樂士泰膠囊各劑量組大鼠前列腺組織中WBC計數顯著減少、SPL計數顯著增加（P＜0.05或P＜0.01）。假手術組、模型組、普樂安片組和普樂士泰膠囊高、中、低劑量組大鼠前列腺組織中WBC計數分別為（1.228±0.728）×109、（2.805±0.788）×109、（1.676± 0.531）×109、（1.612±0.516）×109、（1.949±0.774）×109、（2.107±0.723）×109個，SPL計數結果見表2。

表2 各組大鼠前列腺組織中SPL計數結果Tab 2 Results of SPL count in prostate tissue of rats in each group

3.4 前列腺組織顯微鏡下病理觀察結果

假手術組大鼠前列腺組織間質內偶見炎癥細胞浸潤和成纖維細胞，腺腔大小不一，腺泡上皮多為單層柱狀或立方形，個別呈假復層；腺腔內可見大量深染色的分泌物。模型組大鼠前列腺組織間質均有顯著充血、水腫及大量炎癥細胞浸潤。普樂士泰膠囊中、低劑量組大鼠前列腺組織間質也有較明顯充血、水腫和炎癥細胞浸潤；而普樂士泰膠囊高劑量組大鼠前列腺組織間質僅有輕度充血、水腫，少見或無炎癥細胞浸潤，較模型組大鼠的前列腺炎癥狀明顯減輕，且變化與普樂安片組相似。顯微鏡下病理觀察結果見圖1，前列腺組織間質充血、水腫與炎癥細胞浸潤分級結果見表3。

圖1 各組大鼠前列腺組織病理觀察結果（HE染色，× 400）Fig 1 Results of pathological observation of prostate tissue of rats in each group（HE staining，×400）

表3 各組大鼠前列腺組織間質充血、水腫與炎癥細胞浸潤分級結果Tab 3 Results of interstitial congestion，edema and inflammatory cell infiltration grading in prostate tissue of rats in each group

4 討論

歷代中醫醫籍中并沒有前列腺炎的記載，僅將其籠統地歸屬于“淋證”“精濁”“白濁”等范疇[7]。患病率高、治愈率低、復發率高是前列腺炎的特點，雖然其不威脅患者生命，卻嚴重影響了患者生活質量[8]。目前研究認為，衣原體、支原體或病毒等非細菌感染，以及自身免疫、氧化應激、自身基因或者物理化學等因素均可引起CNP的發生[9]。近年研究表明，炎癥反應參與了CNP的發病[10]。WBC、SPL計數是判斷炎癥反應的主要參考指標之一，也是CP的常規前列腺液檢查中重要的判斷指標。但有學者認為，前列腺液以前列腺中央帶分泌液為主，部分腫脹的炎癥組織使周圍帶的腺管因阻塞而導致排除不暢，不能客觀地反映病情變化，再加上檢查的操作過程中也會因尿路WBC污染而造成檢驗結果偏差，以前列腺液的WBC、SPL計數難以準確反映CP炎癥的真實狀況和嚴重程度[11]。因此，在本研究中筆者選擇大鼠前列腺腺組織勻漿進行測定，以去除可能存在的部分干擾因素，使結果更接近客觀情況。普樂安片有補腎固本的作用，對改善前列腺的微循環、尿道黏膜及其周圍組織水腫以及縮小前列腺體積、加快新陳代謝、消退前列腺局部炎癥等有很好的作用，臨床上廣泛用于前列腺炎和前列腺增生癥的治療，療效確切[12]。因此，本研究以普樂安片為陽性對照藥。

中醫治療學認為，CP的病因本質為濕熱濁邪阻滯，而治法應先祛其濕濁再補其虛[13]。普樂士泰膠囊組方以中醫理論為指導，寒溫并用，消中有補，運用了整體觀念和辨證論治的特點，在治療上顯示出其獨特的優勢。方中君藥益母草具有清熱解毒、活血祛瘀、消腫利尿等功效[14]，益母草中主要活性成分益母草堿、水蘇堿具有抑制腎間質纖維化的形成、抗細菌內毒素、抗炎、改善微循環等作用[15-16]，對前列腺組織瘀血、水腫等癥狀有一定緩解作用。苦杏仁可宣通上焦肺氣，使氣化助于濕化；白蔻仁可運化中焦濕滯，化濁宜中；薏苡仁有益脾滲濕之功，使濕熱從下而去，三者宣上暢中滲下，從而疏導三焦濕邪[17]，輔以萆薢分清泌濁，引下焦濕邪外出。王不留行、大血藤活血通絡，敗毒散瘀，改善血運；敗醬草能清熱解毒、涼血消腫散結；車前子清利濕毒；山藥、威靈仙、車前子助健脾滲濕；通草防利水過甚，增強生津潤腸；石菖蒲開精竅；太子參補脾肺之氣而無燥熱之弊，健運水濕；小茴香行氣止痛；川牛膝補益肝腎，性善下行，可引諸藥直達下焦病所[18-19]。諸藥合用，使脾氣健運、理氣通絡、清肅下降，可改善CP的不適癥狀。

本研究結果顯示，普樂士泰膠囊可明顯降低CNP模型大鼠前列腺組織中WBC計數、升高前列腺組織中SPL計數（P＜0.05或P＜0.01），并可明顯減輕CNP大鼠的前列腺組織水腫、充血、炎癥細胞浸潤及與周圍組織粘連和局部灰白色結節等，使前列腺炎癥狀態改善。同時，本研究結果也證實了普樂士泰膠囊攻補兼施的組方合理性，提示其可改善前列腺血液循環障礙，促進血液運行，改善組織水腫及炎性浸潤，達到治療CNP的作用，但更多的作用機制仍有待進一步研究。

查閱近十幾年與CP治療相關的文獻，發現關于CP的中醫藥治療大多數依然為醫家各自的經驗總結，一般樣本量不大，療效機制不明確，大多數沒有和現代藥理實驗相結合，仍處于探索研究階段[20]。因此，筆者下一步的研究將嚴格按《中醫病證診斷療效標準》的證候分型分類，結合現代醫學的研究方法及手段，希望能檢測出用藥后前列腺腺組織內留存了該藥的哪些藥物成分，探索如何提高口服用藥后前列腺腺組織內的血藥濃度等，注重實驗指標的具體化、量化研究，以進一步提高療效判斷標準。

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Improvement Effect of Prostatitis Capsule on Chronic Non-bacterial Prostatitis Model Rats

YE Lüping1，LI Degang2，LIU Suchun3，MA Ruqing1，BIN Bin4（1.Dept.of Pharmacy，the First Affiliated Hospital of Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning 530023，China；2.Centre of Gastrointestinal Anus Surgery，the First Affiliated Hospital of Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning 530023，China；3.Dept. of Laboratory Section，the First Affiliated Hospital of Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning 530023，China；4.Dept.of Andrology，the First Affiliated Hospital of Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning 530023，China）

OBJECTIVE：To investigate the improvement effect of Prostatitis capsule on chronic non-bacterial prostatitis（CNP）model rats.METHODS：60 rats were randomly divided into sham operation group（distilled water），model group（distilled water），Pule’an tablet group（positive control，2 g/kg）and Prostatitis capsule high-dose，medium-dose，low-dose groups（16，8，4 g/kg）.Except for sham operation group，other 5 groups were injected Xiaozhiling injection 0.2 mL to reduce CNP model.After 7 d of modeling，they

related medicines，ig，once a day，for 45 d.After 24 h of last administration，prostate lesions were observed by eyes and wet quality was weighed.White blood cell（WBC）count and lecithin body（SPL）count were conducted under microscope，and prostate tissue slices were pathologically observed.RESULTS：Compared with sham operation group，prostate showed gray nodules，adhesion in glands and surrounding tissue；wet quality of prostate and WBC，SPL count in prostate tissue were significantly increased（P＜0.01）；under microscope，there were significant congestion，edema and a variety of inflammatory cell infiltration in prostate interstitial.Compared with model group，gray nodules in prostate in Pule’an tablet group and Prostatitis capsule group were reduced，as well as adhesion degree in prostate and surrounding tissue；wet quality of prostate and WBC，SPL count in prostate tissue were significantly decreased（P＜0.01）；pathological changes had improved to varying degrees under microscope，especially the changes in Prostatitis capsule high-dose group，and prostate tissue only showed mild congestion，edema and little inflammatory cell infiltration.CONCLUSIONS：Prostatitis capsule has a certain improvement effect on CNP model rats.

Prostatitis capsule；Chronic non-bacterial prostatitis；Leukocytes；Lecithin body；Rats

R285.5

A

1001-0408（2017）22-3057-04

2016-11-01

2017-03-06）

（編輯：林 靜）

廣西壯族自治區衛生廳中醫藥科技專項課題/廣西壯族自治區衛生廳醫院制劑遴選課題（No.GZYZ1105）

＊副主任藥師。研究方向：臨床藥學、藥劑學。電話：0771-5840015。E-mail：164589433@qq.com

#通信作者：主任醫師，教授，碩士。研究方向：中醫男科。電話：0771-5848554。E-mail：billbinn@sina.com

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.22.09