黃連解毒流浸膏質(zhì)量控制的研究

■文/河南省駐馬店技師學(xué)院 楊 靜

黃連解毒流浸膏質(zhì)量控制的研究

■文/河南省駐馬店技師學(xué)院 楊 靜

為了建立黃連解毒流浸膏的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，試驗(yàn)采用高效液相色譜法對(duì)黃連解毒流浸膏中的小檗堿和黃芩苷進(jìn)行鑒別，并測(cè)定它們的含量。結(jié)果表明，黃連解毒流浸膏中的小檗堿和黃芩苷與其對(duì)照品保留時(shí)間一致。黃連解毒流浸膏中的小檗堿和黃芩苷的線性方程、精密度、穩(wěn)定性、回收率等均符合高效液相色譜法含量測(cè)定要求。結(jié)論：建立的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)簡(jiǎn)便可行，可用于黃連解毒流浸膏的質(zhì)量控制。

黃連解毒流浸膏；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；高效液相色譜法

近年來，國(guó)內(nèi)養(yǎng)豬生產(chǎn)中各種原因引起的高熱、敗血癥和毒血癥的發(fā)病率和死亡率越來越高。化學(xué)合成藥物的作用較為單一，多不能同時(shí)具備抗炎、退熱、抗菌和抗病毒的作用。黃連解毒湯由黃連、黃柏、黃芩和梔子等4味藥材組成[1]，是清熱解毒方劑的常用代表方劑，具有良好的清熱、苦寒和解毒的功能[2]，適用于畜禽的各種急性熱毒病和各種急性炎癥[3～9]。顆粒劑具有吸收快、療效好、易攜帶、久置不易霉變等優(yōu)點(diǎn)。本試驗(yàn)通過對(duì)黃連解毒流浸膏中小檗堿和黃芩苷的含量[10～12]等進(jìn)行了研究，初步制訂出了《黃連解毒流浸膏的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案》。為黃連解毒顆粒劑制備做準(zhǔn)備。

1 試驗(yàn)儀器與材料

DHG-9141A型電熱恒溫干燥箱，Sartorius BS 110S精密分析天平，Waters高效液相色譜儀，黃芩苷原料藥(含量85.7%)，鹽酸小檗堿(含量98%)，自制3批連柏流浸膏，3批芩梔流浸膏，甲醇，無水甲酸。

2 試驗(yàn)內(nèi)容

2.1 含量測(cè)定

2.1.1 方法學(xué)考察

2.1.1.1 對(duì)照品溶液制備 準(zhǔn)確稱取黃芩苷對(duì)照品8mg，小檗堿對(duì)照品5mg，于100mL容量瓶中，加甲醇溶解，濾過，即得。

2.1.1.2 供試品溶液制備方法 分別取比重為1.28～1.30的連柏流浸膏1mL、芩梔流浸膏2mL于燒杯中，加入50mL甲醇溶解，再取1mL于50mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，即分別得到連柏流浸膏的樣品溶液A和芩梔流浸膏的樣品溶液B。

取2mL連柏流浸膏的樣品溶液A與2mL芩梔流浸膏的樣品溶液B混合，即得到連柏流浸膏和芩梔流浸膏的混合樣品溶液A+B。進(jìn)樣量均為20μL，按下述方法測(cè)定流浸膏中小檗堿和黃芩苷的含量。結(jié)果見表1。通過測(cè)定可發(fā)現(xiàn)，低濃度的流浸膏供試品溶液混合后，黃芩苷和小檗堿的含量基本沒有變化，可將兩浸膏供試品溶液混合同時(shí)測(cè)定小檗堿和黃芩苷的含量。

2.1.1.3 色譜條件 采用迪馬Diamonsil C18色譜柱(250×4.6mm，5μm)；以0.46%甲酸-0.3%三乙胺的乙腈溶液(A)和0.46%甲酸-0.3%三乙胺的水溶液(B)為流動(dòng)相；梯度洗脫：0～37min，A從10%線性升至32%，37～45min，A從32%線性升至50%保持5min后，將梯度變回A為10%，再保持5min；檢測(cè)波長(zhǎng)：260nm；進(jìn)樣量：20μL；流速：1.0mL/ min；柱溫：30℃。

表1 混合對(duì)小檗堿和黃芩苷含量的影響(n=3)

圖1 黃芩苷線性關(guān)系圖

圖2 小檗堿線性關(guān)系圖

表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果

表3 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.1.1.4 線性關(guān)系考察 將混合對(duì)照品溶液(黃芩苷含量為336μg/mL，小檗堿為200μg/mL)用甲醇逐級(jí)稀釋，分別得到5個(gè)濃度混合對(duì)照品溶液，每種濃度取20μL重復(fù)進(jìn)樣3次，記錄3種成分的峰面積，利用峰面積Y對(duì)濃度x做直線回歸，求得黃芩苷和鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。試驗(yàn)結(jié)果見圖1和圖2。由圖可知，黃芩苷的相關(guān)系數(shù)R=0.9990，小檗堿的相關(guān)系數(shù)R=1，表明：黃芩苷在21～336μg/ mL，小檗堿在12.5～200μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.1.1.5 精密度試驗(yàn) 取含黃芩苷和小檗堿的混合對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，試驗(yàn)結(jié)果見表5，計(jì)算相對(duì)黃芩苷的峰面積RSD為0.19%，小檗堿的峰面積RSD為0.08%，表明儀器精密度良好。

2.1.1.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 分別取連柏流浸膏制成的供試品溶液2mL和芩梔流浸膏制成的供試品溶液2mL，將2種供試品溶液混合后，按0h、2h、4h、8h、12h、24h進(jìn)樣，記錄色譜圖中峰面積并計(jì)算，試驗(yàn)結(jié)果見表3，RSD均小于2，表明24h流浸膏中小檗堿和黃芩苷含量基本不變，樣品溶液性質(zhì)穩(wěn)定。

2.1.1.7 加樣回收率 取已知含量的連柏流浸膏1mL于100mL燒杯中，按照浸膏中小檗堿含量的80%、100%、120%加入含量為98%的小檗堿原料藥，加入50mL甲醇，超聲溶解，再取1mL于50mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。每個(gè)水平配置3個(gè)平行樣品。

另取已知含量的芩梔流浸膏1mL，于100mL燒杯中，按照浸膏中黃芩苷含量的80%、100%、120%加入已知含量的黃芩苷原料藥，50mL甲醇，超聲溶解，再取1mL于50mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。每個(gè)水平配置3個(gè)平行樣品。

測(cè)定前將連柏流浸膏供試品溶液和芩梔供試品溶液1∶1混合后，再取20μL，注入高效液相色譜儀，測(cè)定小檗堿和黃芩苷的含量，計(jì)算回收率，試驗(yàn)結(jié)果見表4，小檗堿的平均回收率為100.5%，黃芩苷為99.2%，符合回收率的要求。

表4 流浸膏加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=3)

表5 流浸膏中小檗堿和黃芩苷的含量檢測(cè)結(jié)果

2.1.2 樣品含量檢測(cè) 取黃連40g、黃柏80g、黃芩80g、梔子60g(實(shí)驗(yàn)室可做的最大量)，按照試驗(yàn)一中最佳提取工藝制備3批黃連解毒流浸膏(比重為1.28～1.30)，取連柏流浸膏1mL于100mL燒杯中，加入50mL甲醇，超聲溶解，再取1mL于50mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

另取芩梔流浸膏2mL于100mL燒杯中，加入50mL甲醇，超聲溶解，再取1mL于50mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

測(cè)定前將連柏流浸膏供試品溶液和芩梔供試品溶液1∶1混合后，再取20μL，注入高效液相色譜儀，測(cè)定小檗堿和黃芩苷的含量。試驗(yàn)結(jié)果見表5，流浸膏中小檗堿和黃芩苷總的含量為6.00g和5.88g。

3 小結(jié)

本試驗(yàn)所用含量測(cè)定方法線性關(guān)系良好，精密度、穩(wěn)定性、回收率均良好，方法簡(jiǎn)單，可以作為黃連解毒流浸膏的含量測(cè)定方法。■

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