和解泄熱安神法對乙醇依賴癥大鼠戒斷行為的干預研究

張曉霞 楊 玲 薛曉軒 余軼群 王志斌

(1 北京中醫藥大學東方醫院脾胃肝膽科,北京,100078; 2 北京中醫藥大學東方醫院功能檢查科,北京,100078)

和解泄熱安神法對乙醇依賴癥大鼠戒斷行為的干預研究

張曉霞1楊 玲2薛曉軒2余軼群1王志斌1

(1 北京中醫藥大學東方醫院脾胃肝膽科,北京,100078; 2 北京中醫藥大學東方醫院功能檢查科,北京,100078)

目的:研究和解泄熱安神法方藥對乙醇依賴癥大鼠戒斷行為的干預作用。方法:21只雄性SD大鼠用隨機數字表隨機分為正常組、觀察組和對照組,每組7只,除正常組大鼠外,其余均采用飲用含乙醇飲水(6%,v/v)21 d復制乙醇依賴癥模型。之后采用和解泄熱安神方藥灌胃觀察組、純凈水灌胃對照組大鼠共7天,灌胃期間仍飲用含乙醇飲水。第29天起撤除含乙醇飲水,所有大鼠均飲用純凈水,觀察記錄大鼠乙醇戒斷行為。整個實驗期間觀察大鼠精神狀態、活動、記錄周體重變化及日飲水量。結果:隨著乙醇依賴大鼠的戒斷時間延長,戒斷行為評分逐漸升高,與正常組比較,對照組的戒斷行為評分明顯升高(P<0.05),于戒斷后6 h行為表現最明顯并持續至24 h。觀察組行為評分介于二者之間,并明顯低于對照組(P<0.05)。結論:和解泄熱安神法方藥可以減輕乙醇依賴癥大鼠的戒斷行為評分,緩解乙醇戒斷癥狀。

中醫藥;和解泄熱安神法;乙醇依賴癥;乙醇戒斷;大鼠

物質依賴是指個體強烈或不可自制地反復渴求濫用某種物質,其中對于乙醇的依賴被稱為乙醇依賴(Alcohol Dependence,AD)[1]。物質依賴是個體處于生物、社會和環境多重因素調控的模式中形成的,其中生物因素主要以化學物質作用于中樞神經系統并產生明顯的獎賞效應,使患者的中樞神經系統異常興奮,從而發生與應激狀態下相似的的生理功能變化。

全世界約有20億人口的乙醇消費者,飲酒相關的社會問題也日益突顯,因此AD已經不僅屬于個人健康問題,而涉及到整個衛生系統[2]。由于突然減少或停止持續高劑量乙醇消耗,軀體會呈現出如自主活動增多、交感神經興奮增強和精神活動激越等復雜的乙醇戒斷綜合征(Alcohol Withdrawal Syndrome,AWS)[3],從而使部分患者無法承受,導致再次復飲乙醇,這就直接加劇了個人和社會體系的各種負擔。

中醫藥在調暢情志、調理精神活動方面有自己獨特的優勢,但截至目前,尚未見到采用和解泄熱安神法干預大鼠乙醇戒斷行為的相關報道。我們前期發現了柴胡加龍骨牡蠣湯化裁可以改善AD患者的生命質量[4],因此,我們通過建立大鼠乙醇依賴模型,觀察灌服和解泄熱安神法顆粒劑對大鼠乙醇戒斷行為的影響,從而驗證乙醇戒斷可能的多種行為,并為乙醇依賴的形成機制提供參考,亦為和解泄熱安神法治療AWS的作用機制提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 實驗選用8周齡SD(Sprague Dawley)雄性大鼠21只,體重(120±20)g,(北京維通利華實驗動物技術有限公司提供,動物許可證批號:SCXK(京)2006-0009)。實驗動物飼養于中國中醫科學院中藥所清潔級動物房,12 h光照和黑夜循環,溫度(22±2)℃,濕度50%～60%。

1.1.2 藥物 和解泄熱安神法方藥:柴胡10 g、黃芩10 g、清半夏9 g、生龍骨15 g、生牡蠣15 g、生姜10 g、琥珀3 g、黨參15 g、桂枝6 g、茯苓15 g、酒大黃6 g、大棗10 g、葛花10 g、枳椇子10 g、豆蔻6 g、通草6 g。藥物采用中藥配方顆粒方式,以80 ℃以上熱水沖調,充分攪拌為混懸液,用藥劑量按實驗動物與人體體表面積比等效量核算比率,計算動物的等效劑量供灌胃用(以上藥物由康仁堂公司提供,通過北京中醫藥大學東方醫院顆粒中藥房分裝)。

1.1.3 試劑與儀器 試驗用喂飼大鼠的低濃度乙醇飲水按體積比將北京紅星股份有限公司出產的63%(V/V)的紅星二鍋頭酒和純凈水配置成6%(V/V)的含乙醇飲水。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備 適應性飼養1周后,正式開始實驗。通過隨機數字表法將21只大鼠隨機分為3組:觀察組(7只)、對照組(7只)和正常組(7只),觀察組和對照組在前21 d合稱為造模組。所有大鼠常規進食大鼠維持飼料,正常組大鼠自由飲用純凈水,造模組大鼠以含6%低濃度乙醇飲水作為唯一水源,共21 d。

1.2.2 干預方法 所有大鼠常規進食大鼠維持飼料,正常組大鼠自由飲用純凈水,觀察組和對照組大鼠繼續以6%低濃度乙醇飲水為唯一飲水來源。實驗第22天起觀察組大鼠每天早9時和解泄熱安神顆粒灌胃1次(1 mL/100 g),每日給藥量折合臨床成人用藥量7倍(18.2 g/kg);對照組每天早9時純凈水灌胃1次(1 mL/100 g),共干預7 d。實驗期間每天觀察動物進食、飲水、行為、活動、精神狀態、毛發及二便等情況,連續28 d,計量動物體重1次/周,造模組記錄每天飲水量及折合后的乙醇量。

1.2.3 檢測指標與方法 實驗第29天撤除觀察組和對照組大鼠的含乙醇飲水,給予和正常組大鼠相同的純凈水飲用。依照李菁等[5]的方法觀察大鼠撤除乙醇后的戒斷癥狀。觀察組、對照組及正常組于大鼠撤除乙醇后不同時間(2、6、24、48 h)給予行為體征和聽源性癲癇發作評分。乙醇戒斷行為體征評分標準見表1。

2 結果

2.1 一般情況觀察 3組大鼠均無死亡事件發生,正常組大鼠體毛整齊有光澤,活動度正常,精神良好,進食正常。1～3周中,飲酒組大鼠的體毛略顯凌亂,光澤度尚可,活動減弱,精神萎靡,喜團聚蜷臥,環境變化時會有相互撕咬和驚竄表現。增加中藥和去離子水灌胃后,觀察組大鼠活動度有所增加,對外界刺激反應恢復,相互撕咬及驚竄現象減少。

表1 乙醇戒斷行為體征評分標準

注:*刻板行為包括理毛、打噴嚏、搖頭、咬、咀嚼5種;**以100 dB聲音刺激大鼠1 min

在中斷乙醇水供應換為純凈水后,造模組大鼠明顯出現躁動,易激惹,攻擊性強,行為刻板,姿勢異常等表現,而正常組大鼠則在這些行為上明顯不同。

2.2 飲酒量和體重比較 實驗前28 d記錄了飲酒大鼠每天的飲酒量。結果顯示實驗過程中大鼠每天的飲酒量變化呈緩慢上升趨勢,但觀察組和對照組間飲酒量差異無統計學意義(P>0.05)。見表2,圖1。

表2 大鼠日均飲酒量變化表

注:與對照組比較,*P>0.05

圖1 大鼠飲酒量變化圖

每周給大鼠稱體重1次,以觀察乙醇對大鼠生長的影響。28 d后,比較觀察組、對照組與正常組大鼠體重,經計算差異無統計學意義(P>0.05)。見表3,圖2。

表3 大鼠體重變化表

注:3組間體重變化比較,*P>0.05

圖2 大鼠體重變化圖

3.3 大鼠乙醇戒斷行為評分 不飲酒的正常組大鼠較為溫順,不易激惹,攻擊性行為較少;而對照組大鼠在乙醇飲水換為純凈水后,開始出現打噴嚏、極易激惹、聽源性癲癇發作次數和強度均增加,其戒斷癥狀評分在戒斷后2、6、24 h時均顯著高于正常組大鼠(P<0.05)。而觀察組大鼠的行為則介于二者之間。48 h后各組的戒斷行為學評分與正常組比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表4,圖3。

表4 大鼠乙醇戒斷行為學評分表(分

注:各時間點不同組間數據比較，*P<0.05;各組間數據比較，△P>0.05

圖3 大鼠乙醇戒斷行為學評分變化圖

3 討論

本研究通過持續給予低濃度含乙醇飲水(v/v,6%)的方法建立大鼠AD模型,突然停止供應乙醇飲水誘發大鼠乙醇戒斷行為的出現,并以和解泄熱安神法顆粒灌胃對動物進行干預性治療來觀察和解泄熱安神法對乙醇戒斷行為的作用。我們發現在造模過程中,進食、飲水和體重等指標上飲酒大鼠和正常組大鼠無明顯區別,這說明短期的低劑量飲酒對動物的生長影響不明顯。但通過一般狀態觀察,我們發現造模大鼠在飲酒后,會表現出與正常大鼠顯著不同的特征,如活動減弱、精神萎靡、喜團聚蜷臥、環境變化時會有相互撕咬和驚竄等表現。這可能與乙醇及其代謝產物對大腦刺激后產生的一般醉酒反應有關。

AD的本質就是一種藥物依賴性精神疾病,該病的發生背景很復雜,與患者的遺傳、生活的社會環境、自身的心理狀態等因素有關[6],而該病行為學的背后則與機體大腦內的神經遞質活動有關。長期飲酒者通過中樞神經系統在乙醇環境中長期暴露,引起一系列內源性適應反應,例如乙醇可以刺激體內內源性阿片類物質的釋放,加強該受體的結合的穩定性來獲得獎勵效應,而乙醇對大腦內多巴胺的影響又使患者能從中獲得更多的快感。如此反復的刺激后就可形成牢固的反射通路,為獲得這些通路刺激帶來的快感,并祛除戒斷癥狀,乙醇依賴癥患者就必須通過不斷飲酒實現這種獎賞反饋。通過諸多研究,研究者們發現影響乙醇依賴癥行為學的神經遞質包括NMDA系統,GABA系統,DA系統,5-HT系統以及內源性阿片物質激勵系統。而在這些參與系統中,并非都占主導,而是相互交叉,互相影響的[7]。

機體攝入的乙醇促使GABA釋放,增強了整體的抑制效應:一方面激活的氯離子通道使細胞電位發生超極化,從而引起全腦神經傳導緩慢,另一方面乙醇競爭性抑制NMDAR,使興奮性的神經遞質減少,從而引起機體代償性地增加興奮性受體并減少了抑制性受體,使大腦的興奮-抑制維持在一個非正常水平的平衡狀態[8]。由于長期的乙醇攝入使腦組織產生相應的耐受,但乙醇戒斷使血中乙醇濃度下降時,原來建立的非正常平衡被突然破壞,高水平的興奮性遞質和低水平的抑制性遞質導致了戒斷綜合征發生,臨床以怕冷、出汗、惡心嘔吐和軀體震顫為主,也有少數的震顫性譫妄和癲癇發作會危及生命[9]。因此乙醇戒斷行為是AD患者難以忍受并且放棄戒酒和再次復飲的最主要原因,減輕乙醇戒斷行為在戒酒過程中顯得尤為重要。

我們通過對大鼠乙醇戒斷行為評分結果發現,造模后的AD大鼠的評分顯著高于正常組大鼠,但其中觀察組的評分低于對照組。這不僅量化了大鼠因戒酒產生的行為變化,使一般行為觀察變為可研究的數據,而且通過觀察可以看到低含量乙醇飲水確實能夠造成大鼠的行為學改變,而和解泄熱安神法能明確降低大鼠乙醇戒斷行為評分,從而起到改善乙醇戒斷癥狀的作用。

研究中所采用的和解泄熱安神法方藥來自于《傷寒論》名方柴胡加龍骨牡蠣湯加減。我們在前期總結了AD患者病機多屬脾胃虛弱、肝膽濕熱和痰熱內擾,并且發現代表了和解泄熱安神法的柴胡加龍骨牡蠣湯化裁可以明顯改善AD患者生命質量[4],而柴胡加龍骨牡蠣湯歷來就應用于緩解精神、情志方面的癥狀[10]。本方中柴胡作為君藥發揮主要作用,中藥藥理學發現柴胡具有鎮靜、安神、止痛的作用,在本方起到鎮靜安神的效果。從桂枝中提取桂皮醛有同樣顯著的鎮痛、鎮靜及抗驚厥效果。而作為中藥歸屬鎮靜安神類藥物的龍骨、牡蠣在實驗研究中也證實有抑制小鼠的自主活動、促進睡眠及抗驚厥作用[11]。另有研究[12]指出該方可以通過影響腦內單胺類神經遞質起到抗應激作用,減輕戒斷癥狀;并有促進大鼠5-HT、DA、GABA等合成釋放[13-14],從而調整大腦興奮-抑制狀態。

由于本研究為復方制劑,未進行拆方或單藥的比較研究,因此為了進一步挖掘和解泄熱安神法方藥的作用機制,仍需進一步的相關研究,以便明確地發現該法方藥在對AD患者乙醇戒斷行為治療中的具體作用機制和靶點。

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(2017-05-16收稿 責任編輯：王明)

Interventional Study on Harmonizing, Heat-relieving and Mind-tranquilizing Therapy in Treating Alcohol Withdrawal Behaviors in Alcohol Dependence Model Rats

Zhang Xiaoxia1, Yang Ling2, Xue Xiaoxuan2, Yu Yiqun1, Wang Zhibin1

(1GastroenterologyDepartment,DongfangHospitalAffiliatedtoBeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100078,China; 2FunctionalInspectionDepartment,DongfangHospitalAffiliatedtoBeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100078,China)

Objective:To observe the interventional effects of harmonizing, heat-relieving and mind-tranquilizing therapy in treating alcohol withdrawal behaviors in alcohol dependence model rats.Methods:Twenty-one male SD rats were randomly divided into normal, treatment and control group by random number table with 7 rats in each group. All rats were fed water with alcohol (6%, v/v) for 21 days to make alcohol dependence models except normal ones. Rats in the treatment group were administered by medicinal granules with the functions of harmonizing, heat-relieving and mind-tranquilizing while rats in the control group were fed with pure water for constantly 7 days, and rats drank water with alcohol during the experiment. From the 29th day, all rats started to drink pure water without alcohol, and their behaviors, mental status, life activity, weekly body weight and daily drinking were observed and evaluated.Results:With the extension of alcohol withdrawal time, sores of withdrawal behaviors raised gradually. The scores of control group was higher when compared with normal group (P<0.05). It had a peak score at 6 h and lasted until 24 h after withdrawal. The sore of the treatment group was between that of the normal and control group, which was lower than that of the control group (P<0.05).Conclusion:Harmonizing, heat-relieving and mind-tranquilizing therapy may decrease scores of alcohol withdrawal in alcohol dependence rats and relieve alcohol withdrawal symptoms.

Traditional Chinese Medicine; Harmonizing, heat-relieving and mind-tranquilizing therapy; Alcohol dependence; Alcohol withdrawal; Rats

國家中醫重點專科建設項目(ZJ0101PW008) 作者簡介:張曉霞(1968.01—),女,大專,主管技師,研究方向:消化系統疾病的診斷技術工作,E-mail:zhang_sherry@sina.com

王志斌(1978.03—),男,碩士,副主任醫師,研究方向:中西醫結合治療脾胃病,E-mail:wangsanger@126.com

R285.5

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2017.08.039