電針對二腎一夾高血壓大鼠血壓、血管重構的影響研究

郝日雯，關 偉，郭繼龍，王海軍，冀來喜

（山西中醫藥大學，山西太原030024）

電針對二腎一夾高血壓大鼠血壓、血管重構的影響研究

郝日雯，關 偉，郭繼龍，王海軍，冀來喜

（山西中醫藥大學，山西太原030024）

目的：本實驗研究通過電針二腎一夾高血壓大鼠（2K1C-RHR）的人迎、曲池穴及兩穴組穴，觀察各單穴及組穴方協同降壓的效果，并探討其針刺降壓的機制。方法：按照二腎一夾法建立高血壓大鼠模型，隨機分為空白組8只、模型組8只、治療組24只，治療組進行為期4 w針刺雙側人迎、曲池及人迎、曲池組穴的治療，監測不同組、不同時期的血壓變化情況，測定其血管平滑肌細胞面積（VSMC）、血管壁厚（WT）、血管內徑（LD），計算WT/LD比值及血漿中血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）、醛固酮（ALD）的含量，并進行相互比較。結果：模型組與空白組相比，大鼠頸總動脈管壁增厚，血管內徑縮小明顯，WT/LD的比值明顯增大，存在明顯的血管重構現象，大鼠血漿AngⅡ、ALD含量顯著升高；通過針刺治療，模型組與治療組比較，血壓均明顯下降，WT、LD、WT/LD比值和VSMC面積均有不同程度的改善，血漿AngⅡ、ALD含量均明顯降低。結論：針刺人迎穴、曲池穴有很好的降壓效果，且人迎、曲池組穴降壓效果優于各個單穴；其針刺降壓機制之一可能是通過改善血管重構來緩解血壓的持續升高，與調節血漿中AngⅡ和ALD的含量有關。

二腎一夾高血壓大鼠；針刺；血管重構；血管緊張素Ⅱ；醛固酮

高血壓是世界各國最常見的心腦血管疾病之一，其發病機制十分復雜，目前認為它發生的主要病理生理學基礎包括交感神經系統以及腎素-血管緊張素-醛固酮系統（RAAS）的活化。內皮功能失調、氧化應激增強、血管張力增高以及血管壁重塑等也可能是血壓增高的原因，而腎臟在維持機體血壓平衡中起著非常重要的作用［1］。本研究在建立二腎一夾高血壓大鼠（2K1C-RHR）模型基礎上，電針其人迎穴、曲池穴以及兩穴組合，觀察電針對血壓的影響和頸總動脈重構的基礎性觀察，以及檢測血漿中血管緊張素（AngⅡ）、醛固酮（ALD）的含量，比較組間相互差異，為針刺治療改善高血壓尋求新的切入點，為針刺防治高血壓的研究提供一定的實驗依據，探究最佳的降壓腧穴配伍。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 實驗動物 清潔級健康SD大鼠40只，體質量80~100 g，雌雄各半。動物來源于北京維通利華實驗動物有限公司，該公司符合國家健康一級動物標準，動物許可證號：2012-0017。實驗動物均采用標準飼料適應性喂養1 w，動物飼養室溫度、采光、通風良好。用消毒的顆粒型大鼠飼料和自來水喂養，自由攝食。

1.1.2 實驗器具 ①針具：32號0.5寸（13 mm）不銹鋼毫針（蘇州產華佗牌）、LH202H型韓氏治療儀。②手術器械：U形動脈銀夾（內徑0.2~0.25 mm）、直剪、彎剪、眼科剪、手術鑷、止血鉗、1號手術縫合線、1 mL注射器。③指標檢測器械：Bp600A小型動物無創血壓測量系統、冰箱、試管、離心機。④主要實驗用品：大鼠血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）酶聯免疫分析試劑盒、大鼠醛固酮（ALD）酶聯免疫分析試劑盒（北京綠源博德生物科技有限公司）。⑤實驗儀器：OLYMPUS光學顯微鏡（日本）；Mias病理圖像分析系統（徠克醫療儀器有限公司，中國）；HITACHI800透射電鏡（日本日立）；TGL-16B臺式高速離心機（常州翔天實驗儀器廠）。BP600A型大鼠血壓計（成都泰盟）。

1.2 實驗方法

1.2.1 分組 選用健康SD大鼠40只，隨機分為空白組、模型組、曲池組（A組）、人迎組（B組）和組穴組（C組），每組8只。按照二腎一夾法建立高血壓大鼠模型，A組選取雙側人迎、B組選取雙側曲池、C組選取雙側兩穴。

1.2.2 造模［2］取SD大鼠稱重，按40 mg/kg腹腔注射10%水合氯醛麻醉，仰臥固定在手術臺上，備毛后用碘酒和酒精消毒手術區域，用干凈的紗布作消毒手術洞巾。沿腹部前正中線左側取3 cm的切口，血管鉗分離肌肉和脂肪組織，用浸有生理鹽水的棉花球將臟器輕輕分開暴露腎臟。眼科鑷小心分離腎蒂部筋膜，分離出一段左腎動脈，在近主動脈端用U形動脈銀夾（內徑0.2~0.25 mm）套上，夾開口朝向腹側。依次分層縫合肌肉、皮膚，并酒精消毒切口，腹腔注射慶大霉素2萬U/只后將動物放回籠中。

1.2.3 模型鑒定 于手術前及術后1、2、3、4 w各測大鼠尾動脈收縮壓（SBP）一次（測血壓方法見后），若手術4 w后收縮壓超術前30 mmHg或術后收縮壓＞150 mmHg，認為造模成功［2］。

1.2.4 治療方法 空白組不做任何處理和治療，只監測血壓。模型組按上述方法造模后，同治療組一樣抓取固定，但不做針刺治療。治療組分為治療A組（電針人迎），治療B組（電針曲池），治療C組（電針人迎穴與曲池穴）。按照中國針灸學會實驗針灸研究會華興邦《大鼠穴位圖譜的研制》標準及針刺深度選取雙側相應穴位在造模完成后第2天進行治療［3］。

實驗大鼠人迎穴取穴根據人迎在人體的解剖位置同時結合大鼠解剖，取穴在下頜前正中線旁開約1.5 mm，直刺2 mm；曲池穴取穴在橈骨近端，肘關節外側前方凹陷中，直刺4 mm。用華佗牌32號0.5寸不銹鋼毫針（長13 mm），LH202H型韓氏儀，選用疏密波，強度l mA，頻率2 HZ/15 Hz，1次/d，每次持續刺激20 min，共治療4 w。

1.2.5 標本采集處理方法 血壓監測：先將大鼠血壓計預熱30 min，然后把大鼠放入預熱箱預熱15 min，保證預熱完全而獲得足夠大的脈搏波。為確保血壓的準確性，一方面將大鼠要固定好，以消除雜音對脈搏波的干擾，同時需連續測量3次取平均值。治療前1 d 9：00 Am測量的血壓作為各組大鼠治療前血壓，治療4 w后第2天9：00 Am測量的血壓作為各組治療后血壓。

病理學觀察：血壓測量完畢后將大鼠解剖，取長約1 cm右側頸總動脈組織，立即放入4%多聚甲醛中固定。經梯度酒精脫水、二甲苯透明石蠟包埋，常規切片（厚度約為5 μm）。烘干后的石蠟切片再用二甲苯脫蠟，經梯度乙醇至水洗二甲苯Ⅰ10 min、二甲苯Ⅱ10 min、無水乙醇Ⅰ5 min、無水乙醇Ⅱ5 min，然后依次95%、90%、80%、70%乙醇各2 min，蒸餾水沖洗2 min。

HE染色：蘇木素染液中染色7 min，自來水沖洗1 min，蒸餾水沖洗，1%鹽酸酒精溶液分化3~5 s，流動的自來水沖洗，0.5%水溶性伊紅溶液中染色3 min，切片進行常規脫水、透明。

封片：95%乙醇10 min，無水乙醇Ⅰ、Ⅱ各5 min，二甲苯∶乙醇（1∶1）溶液2 min，二甲苯Ⅰ、Ⅱ各10 min，中性樹膠封片。

光學顯微鏡下觀察：用計算機圖像分析系統測定血管平滑肌細胞面積、血管壁厚度和內徑，并計算WT/LD比值。電鏡下觀察頸總動脈重構的超微結構變化情況。

血管緊張素Ⅱ、血漿醛固酮水平的檢測：4 w治療結束后，將大鼠用10%水合氯醛（45 mg/kg）腹腔麻醉，腹主動脈取血4~5 mL，注入含10% EDTA.Na 230 μL及抑肽酶20 μL的試管中混勻，在4℃，3 000 rpm條件下離心10 min，分離血漿，酶聯免疫吸附法檢測AngⅡ及ALD。

表1 針刺治療前后各組大鼠血壓比較 （mmHg，±s）

表1 針刺治療前后各組大鼠血壓比較 （mmHg，±s）

注：與空白組比較，1）P＜0.01；與模型組比較，2）P＜0.01；與組穴組比較，3）P＜0.01；與人迎組比較，4）P＜0.01

針刺前 第1周 第2周 第3周 第4周空白組 8 103.38±3.90 104.90±4.63 106.32±3.36 105.68±3.66 105.30±3.82模型組 8 186.32±3.951）189.09±1.571）189.12±2.781）192.14±2.881）191.06±2.391）曲池組 8 190.56±1.70 178.62±5.162）156.43±8.772）3）4）143.15±5.662）3）4）138.16±8.072）3）4）人迎組 8 189.17±1.53 172.82±4.632）140.12±3.982）3）136.83±4.442）3）123.01±3.352）3）組穴組 8 188.28±2.68 169.27±5.322）136.94±6.882）120.43±5.852）114.59±4.882）組別 例數

1.3 統計學方法

采用SPSS18.0醫學統計軟件進行統計分析，組間比較采用SNK法（q檢驗）。資料表達均用均數±標準差（±s）表示。

2 結果

2.1 治療前后各組大鼠血壓比較

針刺前：空白組與模型組大鼠血壓之間差異有統計學意義（P＜0.01），說明實驗動物造模成功。而模型組與治療各組之間差異無統計學意義（P＞0.01），說明模型組與各治療組之間有較好的可比性。

針刺1 w、2 w、3 w和4 w后，模型組與曲池組、人迎組和組穴組比較差異有統計學意義（P＜0.01）；針刺2 w、3 w和4 w后，組穴組與曲池組、人迎組比較差異有統計學意義（P＜0.01）；人迎組與曲池組比較差異有統計學意義（P＜0.01）。結果見表1。

2.2WT、LD、WT/LD、VSMC的變化

模型組大鼠的頸總動脈管壁（WT）增厚明顯，但管內徑（LD）縮小明顯，WT/LD比值明顯增大，VSMC面積增大明顯，與空白組比較差異有統計學意義（P＜0.01）；治療組中WT、LD、WT/LD比值和VSMC面積均有不同程度改善，與模型組比較差異有統計學意義（P＜0.01）；其中，人迎組與組穴組WT、LD、WT/LD比值和VSMC比較差異無統計學意義，但與曲池組相比，WT、LD、WT/LD比值和VSMC比較差異有統計學意義。結果見表2。

表2 各組大鼠WT，LD，WT/LD，VSMC的變化 （±s）

表2 各組大鼠WT，LD，WT/LD，VSMC的變化 （±s）

注：與空白組比較，1）P＜0.01；與模型組比較，2）P＜0.01；與人迎組比較，3）P＜0.01

組別 例數 WT（μm） LD（μm） WT/LD（%） VSCM（μm2）空白組 8 60.03±1.57 420.92±13.11 74.31±0.51 168.88±2.50模型組 8 70.30±0.841）377.35±32.941）18.75±1.691）214.011±1.251）曲池組 8 67.65±0.432）3）405.79±11.062）3）16.68±0.492）3）211.67±2.672）3）人迎組 8 64.53±0.242）410.21±9.842）15.53±0.812）200.24±6.842）組穴組 8 64.39±0.202）414.92±13.112）15.19±0.342）174.37±3.232）

2.3 血漿AngⅡ的變化

與空白組相比，模型組大鼠血漿AngⅡ的含量升高明顯。針刺治療4 w后，人迎組、曲池組、組穴組的大鼠血漿AngⅡ含量與模型組比較明顯降低（P<0.01）。結果見表3。

表3 各組大鼠血漿AngⅡ的變化 （pg/mL，±s）

表3 各組大鼠血漿AngⅡ的變化 （pg/mL，±s）

注：與空白組比較，1）P＜0.01；與模型組比較，2）P＜0.01

組別 例數 AngⅡ空白組 8 146.21±51.37模型組 8 376.08±38.171）曲池組 8 162.30±28.922）人迎組 8 147.93±52.452）組穴組 8 145.92±45.322）

2.4 血漿ALD的變化

與空白組相比，模型組大鼠血漿ALD含量顯著升高。針刺治療4 w后，人迎組、曲池組、組穴組的大鼠血漿ALD含量與模型組比較有所降低。其中，人迎組、組穴組針刺后血漿ALD水平與模型組比較顯著降低（P<0.01）。結果見表4。

表4 各組大鼠血漿ALD的變化 （pg/mL，±s）

表4 各組大鼠血漿ALD的變化 （pg/mL，±s）

注：與空白組比較，1）P＜0.01；與模型組比較，2）P＜0.01

組別 例數 AngⅡ空白組 8 97.99±34.54模型組 8 158.55±44.971）曲池組 8 138.46±44.01人迎組 8 105.08±59.012）組穴組 8 94.14±37.972）

3 討論

中醫學中并無“高血壓”病名，根據高血壓所表現的頭痛頭暈，時發時止，耳鳴，心悸癥狀，屬于中醫學的“眩暈、頭痛”等范疇。許多醫家在總結和繼承前人的理論基礎上，對高血壓的病因病機有著多元化認識。熊興江等［4］將高血壓病的病因病機概括為“火、飲、虛”。還有研究表明高血壓發展初、中期，常見火證，病位在肝、心、胃、腸，尤其肝火為甚［5］，西醫多認為血壓升高與交感神經興奮相關。黃飛翔等［5］認為風、痰、瘀、虛是高血壓病發生的主要病因。根據中醫的整體觀念及大量文獻所述，高血壓病的發病與飲食不節、勞逸過度或情志失調等因素密切相關，久之導致肝、脾、腎三臟功能失常而出現氣血失調，病變往往以陰虛為本，陽亢為標，且互為因果，陰損及陽，氣機失常，兼證常挾痰、挾濕、挾火、挾瘀等。

現代醫學研究認為高血壓的發病機制復雜，但總體認為是在各種因素下血壓的調節功能失調而產生，主要有中樞神經系統、體液內分泌系統及腎臟等參與發病過程。針刺治療通過介導腎素-血管緊張素-醛固酮系統、血管活性因子神經遞質、免疫系統和胰島素抵抗等多種途徑和多因素產生降壓效應，使機體內環境平衡，通過對人體神經-體液-內分泌-免疫等多個系統平衡整合，從而達到降低血壓的目的［6］。

本研究在針刺選穴時綜合考慮穴位所屬經脈、所處位置及動物實驗中針刺的可行性，并結合多年臨床經驗，選取人迎、曲池作為治療穴并組成腧穴處方進行實驗研究。人迎穴為足陽明胃經之穴，且為足陽明、少陽之會，氣海輸注于前的門戶，是行使氣海功能的真正所在。選擇“營運之腧”的人迎穴為主穴治療高血壓，以發揮司氣海、協調營衛運行之功效。針刺人迎穴之所以降壓效果明顯，與其特殊解剖位置相關。人迎穴位置當頸總動脈的分叉點，頸動脈竇壓力感受器位于此處。針刺可以刺激頸動脈竇壓力感受器，從而使興奮傳導到延髓心血管中樞，興奮心迷走中樞和抑制心交感中樞來降低心率，同時抑制交感縮血管中樞使血管舒張來降低外周阻力，最終使偏高的血壓下降到正常［7］。曲池穴是手陽明大腸經的合穴，陽明經多血多氣，針刺曲池穴能攝納陽明氣血，使氣血下降，平亢盛之肝陽，鎮上逆之邪火，故能起到平肝潛陽、定眩降壓之功效。現代研究表明，曲池穴可增強心肌收縮力，減緩心率，對血管舒縮功能有調節作用，輕刺激可引起血管收縮，重刺激多引起血管擴張，其降低血壓作用已被證實且遠期療效較好。

本實驗結果顯示：2K1C-RHR的頸總動脈存在著明顯的血管重構現象，表現為WT明顯增厚、LD明顯縮小、WT/LD比值明顯增大、VSMC面積明顯增大。說明針刺可能是通過改善高血壓的血管重構來減緩血壓的持續性升高。進而我們可以了解到針刺對高血壓病理發展過程中血管重構的影響，從而為針刺降壓找到一個新的切入點，提供一定的實驗依據。同時提示針刺組穴組對2K1C-RHR高血壓大鼠的AngⅡ和ALD水平有確切降低效應。

因此，針刺人迎穴、曲池穴有很好的降壓效果，且人迎、曲池組穴降壓效果優于各個單穴；針刺可以緩解或改善二腎一夾高血壓大鼠頸總動脈血管重構及降低血漿AngⅡ和ALD的含量；其針刺降壓機制之一可能是通過調節血漿中AngⅡ和ALD的含量改善血管重構來緩解血壓的持續升高，實驗證實人迎穴可以作為針刺降壓的有效穴位中的優選穴位，形成降壓腧穴配伍組方降壓方。但是由于時間、經驗以及模型等諸多方面的因素未能對其降壓機制作更深入的探討，期待后續研究來進一步完善。

［1］王芳，周鵬，王沛堅.頑固性高血壓的發病機制及治療新策略［J］.嶺南心血管病雜志，2015（5）：720-723.

［2］朱新安，任宇丁，肖輝，等.兩種艾灸法對二腎一夾型高血壓大鼠血壓及血管緊張素Ⅱ、腎素活性的影響［J］.新疆中醫藥，2006，24（3）：4-8.

［3］華興邦.大鼠穴位圖譜的研制［J］.實驗動物與動物實驗，1991，11（6）：1.

［4］熊興江，王階.經方在高血壓病治療中的運用［J］.中國中藥雜志，2013，38（11）：1 836-1 839.

［5］劉巍，熊興江，王階.高血壓前期的中醫認識及治療［J］.中國中藥雜志，2013，38（14）：2 416-2 420.

［6］黃飛翔，游景成.高血壓心臟損害的辨證論治［J］.甘肅中醫學院學報，2005，22（2）：12-13.

［7］閻琦，王舒.針刺治療高血壓病機理概述［J］.長春中醫藥大學學報，2013，29（2）：359-361.

（編輯：張 凡）

Effect of electro-acupuncture on blood pressure and vascular remodeing in 2K1C-RHR

Hao Riwen，Guan Wei，Guo Jilong，Wang Haijun，Ji Laixi
（Shanxi University of Chinese Medicine，Taiyuan Shanxi 030024）

Objective：To observe the co-operation effects and to probe in the mechanism of reducing blood pressure by electro-acupuncture treatment in the stenosis of renal artery caused hypertension（2K1C-RHR）in rats on Renying point，Quchi point and two points together.Methods：40 rats were randomly divided into control group，model group，Renying group，Quchi group and both points group with 8 in each group.The hypertension models were established by 2K1CRHR，the rats in last three groups were treated by electro-acupuncture on respective points.And then the blood pressure，VSMC，WT，LD were checked，and WT/LD，the amount of AngⅡ，ALD were calculated.Results：Compared with control group，the WT of rats in model group was increased，and the LD was reduced obviously，and the WT/LD，AngⅡ，ALD were obviously increased，while after acupuncture，all indice were changed obviously，especially for the rats in both points group.Conclusion：Good effects on hypertension were observed by acupuncture on Renying point，Quchi point，especially for two points.One of the mechanisms of acupuncture on hypetension may be to alleviate the continuous elevation of blood pressure by improving vascular remodeling，which is related to the regulation of plasma levels of Ang II and ALD.

two kidney one clip hypertensive rats；acupuncture；vascular remodeling；angiotensinⅡ；aldosterone

R285.5

A

1671-0258（2017）04-0016-04

國家自然科學基金項目（81673887）

郝日雯，助教

關偉，講師，E-mail：894710745@qq.com