國產(chǎn)化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)檢測(cè)AFP的性能評(píng)價(jià)

郭繪芳

（太原市太航醫(yī)院，山西太原030006）

國產(chǎn)化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)檢測(cè)AFP的性能評(píng)價(jià)

Performance evaluation of domestic chemiluminescence immunoassay system for AFP

郭繪芳

（太原市太航醫(yī)院，山西太原030006）

目的：探討不同化學(xué)發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)定甲胎蛋白（AFP）結(jié)果的可比性，探討不同檢測(cè)系統(tǒng)的臨床適用性。方法：依據(jù)美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)（CLSI）EP9-A2文件的規(guī)定，以羅氏cobas-e601電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測(cè)結(jié)果為參比系統(tǒng)（X），以邁瑞CL-2000i全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀測(cè)試結(jié)果為待對(duì)比系統(tǒng)（Y），通過檢測(cè)AFP指標(biāo)，對(duì)兩套系統(tǒng)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比分析和偏倚評(píng)估。結(jié)果：兩檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)AFP的檢測(cè)結(jié)果具有良好的相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)大于0.95；預(yù)期偏差均在可接受范圍內(nèi)，具有良好的一致性。結(jié)論：國產(chǎn)邁瑞CL-2000i全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測(cè)AFP能夠滿足臨床需要，可以推廣應(yīng)用。

甲胎蛋白；化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)；性能評(píng)價(jià)

甲胎蛋白（AFP）是一種糖蛋白，正常情況下低濃度AFP存在于成人體內(nèi)，是一種常見的腫瘤標(biāo)志物［1］。對(duì)于原發(fā)性肝癌來說，70%～95%患者的AFP升高，所以AFP是早期診斷最敏感、最特異的指標(biāo)，其需要較高特異性的確定試驗(yàn)來完成相對(duì)低特異性的AFP檢測(cè)［2］。目前臨床試驗(yàn)越來越重視AFP項(xiàng)目結(jié)果的準(zhǔn)確性，實(shí)驗(yàn)室大多采用國外的檢測(cè)系統(tǒng)，但其檢測(cè)成本高昂，如何利用高性價(jià)比的檢測(cè)系統(tǒng)更好地服務(wù)于臨床工作還需要不斷探討。

本次研究參照美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)（NCCLS）指南中EP9-A2文件要求分析評(píng)價(jià)，檢測(cè)指標(biāo)AFP并對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證分析和偏倚評(píng)估，比較國產(chǎn)邁瑞CL-2000i全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀與進(jìn)口羅氏cobas-e601電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀兩種檢測(cè)系統(tǒng)的優(yōu)良，探討不同檢測(cè)系統(tǒng)的臨床適用性。

1 材料與方法

1.1 樣本來源

樣本來源于本院健康體檢及腫瘤病患。采集樣本為受檢者當(dāng)天新鮮血液，采集待凝集后完全分離血清，無溶血、脂血，分裝2份，在2 h內(nèi)完成操作。按照EP9－A2文件中方法對(duì)比實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分布建議，其濃度選擇需涵蓋正常參考區(qū)間和異常高值，濃度控制在分析方法線性范圍內(nèi)。

1.2 分析系統(tǒng)

參比檢測(cè)系統(tǒng)（X）：羅氏cobas-e601電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀，配套各項(xiàng)目檢測(cè)試劑、校準(zhǔn)品和質(zhì)控品。對(duì)比檢測(cè)系統(tǒng)（Y）：邁瑞CL-2000i全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀，配套各項(xiàng)目檢測(cè)試劑、校準(zhǔn)品和質(zhì)控品。

1.3 檢測(cè)方法

1.3.1 精密度檢測(cè) 參考CLSI EP9－A2文件［6］檢測(cè)總精密度：取出質(zhì)控品（低值和高值）同時(shí)段內(nèi)在兩種分析系統(tǒng)進(jìn)行指標(biāo)檢測(cè)，連續(xù)檢測(cè)20 d。檢測(cè)其批內(nèi)精密度：取出質(zhì)控品（低值和高值）同時(shí)段內(nèi)在兩種分析系統(tǒng)進(jìn)行指標(biāo)檢測(cè)，每天測(cè)定2批，2批間隔時(shí)長超過2 h，每個(gè)檢測(cè)對(duì)象需重復(fù)檢測(cè)20次，測(cè)試結(jié)果滿足質(zhì)控靶值范圍需求。記錄總精密度和批內(nèi)精密度的均值、標(biāo)準(zhǔn)差和CV等統(tǒng)計(jì)指標(biāo)。

1.3.2 比對(duì)試驗(yàn)和線性回歸 收集新鮮病人血清，選擇均勻分布在測(cè)量范圍內(nèi)的樣本濃度，在2 h內(nèi)完成邁瑞系統(tǒng)和羅氏系統(tǒng)的檢測(cè)，受試樣本重復(fù)2次操作取均值。嚴(yán)格按照廠商說明書，在試驗(yàn)前對(duì)各儀器進(jìn)行全面維護(hù)和校準(zhǔn)；嚴(yán)格執(zhí)行實(shí)驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)控，在可控時(shí)進(jìn)行標(biāo)本檢測(cè)。以羅氏cobas-e601電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測(cè)結(jié)果為參比系統(tǒng)（X），以邁瑞CL-2000i全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀測(cè)試結(jié)果為待對(duì)比系統(tǒng)（Y），進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析得到線性回歸方程以及相關(guān)系數(shù)。

1.3.3 離群值檢測(cè) 方法內(nèi)和方法間進(jìn)行離群值的檢查，按照EP9－A2文件要求操作。方法內(nèi)離群值：根據(jù)每臺(tái)系統(tǒng)上的樣本雙份測(cè)定結(jié)果，計(jì)算平均值和絕對(duì)差值，以平均絕對(duì)差值的4倍為界限，超出界值定義為離群值。方法間離群值：根據(jù)方法間成對(duì)測(cè)定結(jié)果，計(jì)算平均值和絕對(duì)差值，以平均絕對(duì)差值的4倍為界限，超出界值定義為離群值。允許從分析數(shù)據(jù)中刪除2.5%的離群值，若離群值超過2.5%則需檢查原因并重新采集數(shù)據(jù)。

1.3.4 X測(cè)定范圍的檢驗(yàn) 計(jì)算相關(guān)系數(shù)來粗略判斷取值范圍是否合適。當(dāng)（或）認(rèn)為取值范圍適當(dāng)，斜率和截距通過線性回歸方程得出。如果相關(guān)系數(shù)不滿足上述條件，則需要加大樣本量來擴(kuò)大數(shù)據(jù)濃度分布范圍。

1.3.5 偏倚評(píng)估及可接受性能判斷 偏倚評(píng)估中涉及與可接受性能判斷之間相應(yīng)的預(yù)期偏倚和相對(duì)偏倚，是由研究給定的醫(yī)學(xué)決定水平濃度代入回歸方程得出。鑒于不同檢測(cè)系統(tǒng)間比對(duì)的有關(guān)臨床可接受性能的統(tǒng)一判斷標(biāo)準(zhǔn)在國際上還沒有共識(shí)，我們按照澳大利亞室間質(zhì)評(píng)標(biāo)準(zhǔn)的靶值± 20%的診斷標(biāo)準(zhǔn)［3］，判斷不同檢測(cè)系統(tǒng)的測(cè)定結(jié)果是否具有可比性，其偏倚是否可接受。

1.3.6 一致性評(píng)價(jià) 邁瑞系統(tǒng)和羅氏系統(tǒng)分別使用系統(tǒng)各自的參考范圍來確定陰性和陽性，統(tǒng)計(jì)其對(duì)應(yīng)的陽性和陰性一致率、總一致率等流行病學(xué)指標(biāo)，假設(shè)檢驗(yàn)使用McNemar配對(duì)卡方檢驗(yàn)，對(duì)兩種方法臨床測(cè)定結(jié)果進(jìn)行一致性評(píng)價(jià)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 19.0，對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸與相關(guān)性分析，得出線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)，其一致性比較采用Kappa值進(jìn)行描述。當(dāng)R＞0.90，可認(rèn)為兩種檢測(cè)系統(tǒng)間檢測(cè)結(jié)果相關(guān)性良好。

2 結(jié)果

2.1 精密度評(píng)價(jià)

比對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)可靠，AFP在兩種檢測(cè)系統(tǒng)的總精密度和批內(nèi)精密度測(cè)定結(jié)果均滿足本實(shí)驗(yàn)室對(duì)精密度評(píng)價(jià)的要求。國產(chǎn)邁瑞CL-2000儀器性能表現(xiàn)良好，與羅氏水平相當(dāng)。結(jié)果見表1。

表1 甲胎蛋白（AFP）在兩種檢測(cè)系統(tǒng)的精密度測(cè)定結(jié)果 （%）

2.2 離群值檢驗(yàn)

在兩臺(tái)系統(tǒng)顯示的甲胎蛋白（AFP）測(cè)值，方法內(nèi)和方法間測(cè)定結(jié)果均無出現(xiàn)離群點(diǎn)，其絕對(duì)差值和相對(duì)差值均在平均絕對(duì)差值的4倍范圍內(nèi)。

2.3 回歸分析與相關(guān)性分析

回歸方程為：Y=1.138X+0.233 6，相關(guān)系數(shù)為0.993 2，大于0.975，取值范圍合適。

2.4 偏倚評(píng)估

與之間對(duì)應(yīng)的預(yù)期偏倚和相對(duì)偏倚均在允許偏倚之內(nèi)，偏倚可被接受，試驗(yàn)方法正確度的性能得到驗(yàn)證。結(jié)果見表2。

表2 甲胎蛋白（AFP）在兩種檢測(cè)系統(tǒng)的偏倚評(píng)估

2.5 一致率比較

將羅氏和邁瑞系統(tǒng)同時(shí)測(cè)定270例樣本，計(jì)算兩個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)結(jié)果的一致率并對(duì)測(cè)定結(jié)果差異的顯著性進(jìn)行McNemar配對(duì)卡方檢驗(yàn)；統(tǒng)計(jì)得出陰性一致率為99.17%、陽性一致率為98.67%以及總一致率為98.89%。McNemar配對(duì)卡方檢驗(yàn)表明，按水平，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可認(rèn)為兩種方法臨床測(cè)定結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果見表3。

表3 甲胎蛋白（AFP）在兩種檢測(cè)系統(tǒng)的一致率比較

3 討論

甲胎蛋白在正常人體內(nèi)劑量很低，一般小于20 ng/mL，當(dāng)AFP一直超過400 ng/mL時(shí)，被作為判斷肝癌的檢測(cè)指標(biāo)。目前實(shí)驗(yàn)室用放射免疫法、酶聯(lián)免疫法和化學(xué)發(fā)光法等方法對(duì)AFP這類腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行檢測(cè)，而近些年化學(xué)發(fā)光免疫分析在其中逐漸得到更多重視［4］。目前在臨床實(shí)驗(yàn)室內(nèi)采用的檢測(cè)系統(tǒng)中進(jìn)口系統(tǒng)所占比重巨大，雖然其各項(xiàng)性能優(yōu)異，但這些儀器與對(duì)應(yīng)進(jìn)口試劑配套，必須相互使用缺一不可，導(dǎo)致耗材成本高昂，不可避免產(chǎn)生了巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，并不利于在國內(nèi)的普及和推廣。所以值得我們關(guān)注的課題是同一份樣本在進(jìn)口和國產(chǎn)的不同發(fā)光免疫系統(tǒng)測(cè)定的結(jié)果是否存在差異，是否有可比性。

與進(jìn)口羅氏分析系統(tǒng)比對(duì)結(jié)果顯示，兩套檢測(cè)系統(tǒng)的比對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)可靠，數(shù)據(jù)分布均勻通過離群值檢測(cè)。從精密度評(píng)價(jià)結(jié)果來看符合腫瘤標(biāo)志物臨床應(yīng)用的指導(dǎo)原則中對(duì)精密度的基本要求，檢測(cè)指標(biāo)的總精密度和批內(nèi)精密度的CV均不超過10%。在評(píng)價(jià)低、中、高濃度水平的AFP的預(yù)期偏差均在可接受范圍內(nèi)，偏倚是可接受的。我們的研究結(jié)果表明兩檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)AFP的檢測(cè)結(jié)果具有良好的相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)大于0.95；測(cè)定甲胎蛋白陽性樣品一致率98.67%，陰性樣品符合率99.17%，總符合率達(dá)98.89%，羅氏和邁瑞系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果的一致性強(qiáng)度結(jié)果滿足條件。

研究顯示對(duì)于AFP，國產(chǎn)電化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)已具備與進(jìn)口產(chǎn)品競(jìng)爭市場(chǎng)的水平，機(jī)器性能穩(wěn)定精準(zhǔn)表現(xiàn)良好，能夠滿足臨床上對(duì)腫瘤標(biāo)志物的監(jiān)測(cè)需要。國產(chǎn)儀器經(jīng)過自我的創(chuàng)新，在吸收國外先進(jìn)儀器的精華同時(shí)，嚴(yán)格把控質(zhì)量提高服務(wù)，在醫(yī)療檢測(cè)儀器中逐漸擁有一席之地。此外與進(jìn)口儀器和試劑相比，鑒于其成本低廉，對(duì)基層醫(yī)院病人檢測(cè)以及健康人群的體檢普查等項(xiàng)目更適合推廣使用［5］。因此，國產(chǎn)化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)的甲胎蛋白項(xiàng)目在臨床實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)中前景光明。

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（編輯：翟春濤）

R735.7

A

1671-0258（2017）04-0057-03

郭繪芳，副主任檢驗(yàn)師，E-mail：13303518716@163.com